Технология получения. 
Витамин А

Ретинол-это циклический, непредельный, одноатомный спирт. Образуется в кишечнике и печени из провитаминов (альфа-, бета-, и гамма-каротины) под действием фермента каротиндиоксигеназы до альдегидной формы ретинола — ретиналя (альфаи гамма-каротины расщепляются с образованием 1 молекулы, а бета-каротин — 2 молекулы ретиналя). Далее фермент алкогольдегидрогеназа переводит ретиналь в ретинол.

Каротиноиды — пигменты, их много в вывсших растениях, водорослях, в клетках некоторых микроорганизмов; животные организмы их не синтезируют.

Бета — каротина много содержится в моркови, тыкве, облепихе, люцерне, салате, черной смородине, чернике, крыжовнике, персиках, абрикосах и др.

Среди микроорганизмов бета-каротин синтезирует фототрофы, актиномицеты, плесневые грибы, дрожжи.

Основной продуцент Blakesleatrispora (+) b (-) штаммы.

К примеру, 1 г моркови содержит 60 мкг бетакаротина; при культивировании B.trispora 1 г биомассы содержит 3−8 тыс. мкг провитамина.

Промышленное производство ретинола осуществляется микробиологическим и химическим синтезами.

Микробиологический синтез основан на использовании B.trisporaв качестве субстрата применяется пшеничная или рисовая мука, растительное масло (хлопковое, кукурузное или подсолнчное). Вносят стимуляторы синтеза бета-каротина В-ионон цитрусовая меласса, а так тжетиамин. Свет усиливает выход этого пигмента.

Стадии выделения целевого продукта витамина, А существенно различается в зависимости от того, накапливается продукт в клетке или он выделяется в культуральную жидкость, или же продуктом является сама клеточная масса. Наиболее сложно выделение продукта, накапливающегося в клетках. Для этого клетки необходимо отделить от культуральной жидкости, разрушить (дезинтегрировать) и далее целевой продукт отчистить от массы компонентов разрушенных клеток. Выделение продукта облегчается, если он высвобождается (экстретируется) продуцентом культуральной жидкости Первым этапом на пути к очистке витамина является разделение культуральной жидкости и биомассы — сепарация. Иногда сепарация предшествует специальная обработка культуры — изменение рН, нагревание, добавление коагулянтов белка. Существуют различные методы сепарации: флотация, фильтрация, центрифугирование. Центрифугирование и фильтрация в некоторых производственных процессах реализуются в комбинации. Наиболее перспективной для осаждения биомассы содержащей витамин являются центрифуги-сепараторы, в которых биомасса осаждается на стенки вращаемого цилиндра.

Вторым этапом на пути к отчистки целевого продукта является разрушение клеток. Разрушение клеток (дезинтеграция) проводят физическим, химическим, химико-ферментативными методами.

Наиболее индустриальное значение имеет физическое разрушение:

• 1) ультразвуком;
• 2) с помощью вращающихся лопастей и вибраторов — метод, обычно используемый в пилотных и промышленных установках;
• 3) встряхиванием со стеклянными бусами;
• 4) Продавливание через узкое отверстие под высоким давлением
• 5) раздавливание замороженной клеточной массы;
• 6) растиранием ступки
• 7) осмотическим шоком
• 8) замораживание-оттаиванием
• 9) сжатием клеточной суспензии с последующим резким снижением давления (декомпрессия)

Физические способы разрушения более экономичны, чем химические, химико-ферментативные.

Осторожны и избирательное разрушение клеточной стенки возможно, при использовании химический и химико-ферментативных методах:

Лизис клеток антибиотиками, некоторые поверхностно активными веществами, а так же глицином; автолиза клеток при лимитированном по определенному субстрату росте или их лизис при заражении бактериофагами.

Выделение целевого продукта из культуральной жидкости или гомогената разрушенных клеток проводят путем его осаждения, экстрации или адсорбции.

Осаждение растворенных веществ возможно физическими (нагреванием, охлаждением, разбавление или концентрирование раствора) или химическими воздействиями, переводящими отделяемый продукт в малорастворимое состояние.

Экстракцию можно подразделить на твердо-жидкофазнеую, при которой из твердой фазы переходит в жидкую и жидко-жидкофазную перевод продукта из одной жидкой фазы в другую К твердо-жидкофазной эктракции относится простое обливание твердого образца водой с целью извлечения из него растворимых веществ, например, солей металлов из руд, подвергнутых бактериальной обработке, или растворимых продуктов из массы субстрата при твердофазном культивировании.

Жидко-жидкофазная экстракция органическим растворителям часто применяются для извлечения из культуральной жидкости антибиотиков, витаминов, каратиноидов, липидов, некоторых гидрофобных белков.

Полностью избежать нагревание, губительно для многих ценных веществ позволяют методы холодовой экстракции (криоэкстракция). Криоэкстракция осуществляется растворителями, кипящими при низких температурах и находящимися при комнатной температуре в газообразном состоянии Для экстракции неполярных органических соединений можно использовать жидкий пропан или бутан. При последующем осторожном нагревании до нуля градуса Цельсия кипящей растворитель улетучивается, и продукт остае6тся в чистом виде. Криоэкстракция может использоваться в комбинации с криоконсервацией клеток.

Адсорбция — экстракции, при которой экстрагирующим агентом является твердое тело. Оно заключается в связывании вещества поверхностью твердого т ела из жидкой или газовой фазы. Традиционно применяемыми адсорбентами являются древесный уголь.

Лиофилизация

Высушивание материала проводится в лиофильных установках при следующем режиме: замораживание содержимого ампул или флаконов до температуры в материалах не выше 55° С проводят в течение от 2 до 3 часов. Значение вакуума в период сублимации и досушивания колеблется в пределах от 4 до 7 Па. После чего включают обогрев полок и доводят постепенно температуру до 40 °C. Время лиофилизации при минусовых температурах в материале колеблется в пределах от 12 до 16 часов при температуре выше 0° С от 10 до 14 часов. Время досушивания препарата до температуры в материале от 18° С до 25° С составляет от 4 до 6 часов, при температуре обогрева полок не выше 35.

После окончания высушивания ампулы и флаконы запаивают под вакуумом. Запаянные вакуумы и закрытые флаконы проверяют визуально на отсутствие трещин. Все ампулы с вакциной проверяются на вакуум. Остаточная влажность споровой массы в ампулах не должна превышать 2,5%.