Заключение. 
Генная терапия

Сравнительно недавно предложен ряд принципиально новых вариантов ГТ. При этом основное внимание обращено не на доставку нормального гена в клетки-мишени, а на коррекцию повреждений ДНК в самих клетках. Согласно одному из них, исправление точечных мутаций достигается in vitro путем высокоэффективной генной конверсии. Известно, что при добавлении в культуру делящихся клеток фрагментов геномной ДНК с частотой 1 на 1 000 возможна гомологичная рекомбинация между нативной геномной ДНК и гомологичным ей фрагментом. Согласно новой технологии, получившей название химерапластика [15], в культуру клеток добавляют небольшие по размерам синтетические ДНК/РНК гибридные молекулы (химеропласты), состоящие из короткой (25 нуклеотидов) цепочки ДНК и комплементарной ей цепочки нуклеотидов РНК. При этом в последовательность ДНК/РНК шпилечной структуры включают нужное основание, по которому планируется замена. Обе нуклеотидные последовательности шпилечной структуры комплементарны фрагмену двухцепочечной геномной ДНК, несущей мутацию. Высокая концентрация олигонуклеотидов в ядре, и наличие бактериального RecA белка позволяет на несколько порядков повысить частоту гомологичной рекомбинации. По некоторым данным успешная конверсия (замещение нужного кодона в геномной ДНК) происходит в 25−40% клеток [15]. Примененный ex vivo метод позволяет высокоэффективно осуществлять коррекцию генных дефектов. Клетки-мишени с восстановленной структурой генома могут быть возвращены в организм больного.

Складывается впечатление, что подобный подход может быть очень перспективным. Достаточно заметить, что на основе такого подхода в США в 1998 г. была организована коммерческая компания KIMERAGEN, руководителем научного отдела которой стал Мишэль Блазе, ранее возглавлявший группу по ГТ наследственного иммунодефицита, осуществившую первое успешное ГТ вмешательство на человеке в 1990 г. Предполагается, что метод химерапластики может найти применения для ГТ не менее 2 000 различных наследственных заболеваний. [Работы по технологии химеропластики основаны на исследованиях американских ученых Dr. {бип}.Kmiec и Dr. C.J.Steer (Kren B., Cole-Strauss A., Kmiec {бип}., Steer C.J. (1997) Hepatology, 25, 1462−1468; Kren B.T., Bandyopadhyay P, Steer C.J. (1998) Nature Medicine, 4, 285−290). Dr. Michael Blase (Майкл Блайз)-один из ближайших сотрудников пионера генной терапии Френча Андерсена (Dr. W. French Andersen) во время работы по ГТ тяжелого неспецифического иммунодефицита — долгое время возглавлял Отдел клинической генной терапии Института генома человека Национальных Институтов Здоровья в Бетезе, США. В 1998 г. он перешел в KIMERAGEN директором по науке, где возглавил работы по химеропластике].

Концептуально близок к химерапластике и второй ГТ подход, направленный на коррекцию последовательности самого гена. Для многих генов показано, что отсутствие целого экзона функционально менее катастрофично для функции белка, чем сайтовые мутации, приводящие к сдвигу рамки считывания либо резко нарушающие конформацию белкового продукта, например, нонсенс мутации (возникновение стоп-кодона) при миодистрофии Дюшенна или delF508 в гене СFTR при муковисцидозе. Суть метода, получившего название exon-skipping (перепрыгивание, выбрасывание экзона) сводится к введению в культуру мутантных клеток in vitro коротких антисмысловых последовательностей РНК, комплементарных местам сплайсинга первичного РНК-транскрипта. Их гибридизация в ядре приводит к проскальзыванию петли сплайсинга с захватом и выбрасыванием из мРНК экзона, несущего мутацию. Такой подход был с успехом применен для выбрасывания экзона 23 с мутацией типа стоп-кодон у мышей mdxбиологических моделях миодистрофии Дюшенна Естественно, что оба метода (химерапластика и exon-skipping) могут быть применены только для коррекции генома мутантных клеток вне организма. Последние в случае успешной трансформации могут быть пересажены пациенту обратно. Данный подход получил названия ex vivo и уже нашел применение в клинических проектах по ГТ. Удельный вес проектов ГТ с применением метода ex vivo пока невелик и составляет около 10%. Основная часть проектов по ГТ использует непосредственное введение генноинженерных конструкций в ткань опухоли (25%), внутривенно (15%) и подкожно (15%). Другие способы доставки генов включают внутритрахеальный, внутримышечный, внутриназальный и др. Некоторые из этих подходов были применены в экспериментах по генной терапии миодистрофии Дюшенна .