Иммуноферментный анализ (ИФА)

Иммуноферментный анализ (ИФА) проводят в два этапа: первый — взаимодействие антител с антигеном, второй — ферментативная индикация комплекса антиген — антитело за счет появления окрашивания реакционной смеси и регистрации окрашивания визуально либо спектрофотометрическим методом.

Существуют два варианта ИФА: твердофазный и жидко-фазный, различающиеся по способу разделения компонентов иммунохимической реакции. По сравнению с описанными ранее методами выявления антигенов и антител ИФА обладает существенными преимуществами:

• · высокой чувствительностью, позволяющей определять до 0,05 нг/мл вещества;
• · возможностью использования минимальных объемов исследуемого материала (1−2 мкл);
• · возможностью инструментального или визуального учета реакции;
• · экспрессностью и возможностью автоматизации всех этапов реакции.

ИФА в настоящее время широко используют в практике для диагностики многих инфекционных болезней бактериальной, грибковой этиологии, протозойных инфекций и гельминтозов, но особенно вирусных инфекций, в частности гепатитов А, В, С, D, Е, G, ВИЧ-инфекции, герпесвирусных, ротавирусных, аденовирусных, астровирусных, парвовирусных и других инфекций.

В клинике МИФ наиболее часто применяется для диагностики иммунодефицитных состояний при лимфопролиферативных заболеваниях. Средние данные, относящиеся к МИФ-позитивным лимфоцитам, приведены в таблице.

метод диагностика инфекционный Количество МИФ-позитивных лимфоцитов в периферической крови здоровых взрослых людей, %.

• 1. IgE — МИФ-позитявные клетки встречаются крайне редко.
• 2. IgD и IgM часто встречаются на одной клетке.
• 3. Количество IgG± лимфоцитов может быть завышено в связи с тем, что не удается полностью исключить лимфоциты с Fc-рецепторами или малые моноциты.

О различных способах применения МИФ для исследования структуры, синтеза и динамики мембранных антигенов следует сделать несколько коротких замечаний. В принципе при наличии соответствующих АТ (антитело) мембранные антигены можно выявить на всех клетках.

Определенный клинический интерес представляет выявление мембранных антигенов на макрофагах, плазматических клетках, гранулоцитах и опухолевых клетках, для чего, помимо антигенов, все шире используют лектины.

Оценка результатов: линейная или гранулярная флюоресценция клеточных мембран.

Новые возможности возникают при комбинации МИФ с другими методами: твердофазной иммунофлюоресценцией, электрофорезом с НДС в ПААГ. Если связать антиген с носителем, то по аналогии с розеткообразованием можно идентифицировать и количественно определять антиген-связывающие клетки (принцип флюоресцентной иммуноадгезии). Применение в клинике нашло также определение иммунных комплексов при помощи клеток Raji благодаря наличию в них рецепторов к комплементу и Fc-фрагментам, а также определение аутоантител к антигенам клеточных мембран (печень, поджелудочная железа и опухоли).

Определение антител к мембранам островковых клеток.

Выявление антител к мембранам островковых клеток поджелудочной железы.

Инкубация сыворотки Сольного с меченными ФИТЦ IgG против антигенов человека (препарат любезно предоставлен д-ром Zlegler, Карлсбург).

Методы изучения локализации инфекции в мочевыводящих путях по обнаружению в моче бактерий, «нагруженных» антителами, недавно были заметно улучшены, что расширяет их применение.

Определение нагруженных антителами бактерий в моче.

Выявление нагруженных антителами бактерий в моче (Е. coli) при помощи меченных ФИТЦ IgG против антигенов человека.