Биологический метод предпосевной обработки

Биологическая обработка семян проводилась препаратом эмистим С. Препарат широкого спектра действия. Продукт биотехнологического выращивания грибов-эпифитов из корневой системы лекарственных растений. Прозрачный бесцветный водно-спиртовый раствор. Содержит сбалансированный комплекс фитогормонов ауксиновой, цитокининовой природы, аминокислот, углеводов, жирных кислот, микроэлементов. Эмистим С увеличивает энергию прорастания и полевую всхожесть семян, устойчивость растений к болезням (бурой ржавчине, корневым гнилям и др.) и стрессовым факторам (высоким и низким температурам, засухе, фитотоксическому действию пестицидов), повышает урожай и улучшает качество растительной продукции. Нормы расхода: 10−20 мл. на 1 тонну семян; 10−15 мл. на 1 гектар посевов в зависимости от культуры и уровня агрофона[32].

Семена исследуемой культуры были инкрустированы раствором Эмистим С в концентрации 10−8%.

Условия проведения исследований

Исследования проводились на базе кафедры общей биологии и ботаники БГПУ им. М. Танка и отдела биохимии и биотехнологии растений ГНУ «Центральный ботанический сад» НАН Беларуси в условиях лабораторных и вегетационных опытов в период с 2012;2014г.

Согласно ГОСТу 24 933.0−81, всхожесть — это способность семян давать нормально развитые проростки за определенный срок (предусмотренный для каждой культуры) при оптимальных условиях проращивания. Процент всхожести устанавливают отношением нормально проросших семян к общему их количеству, взятому для проращивания. Энергия прорастания характеризует дружность прорастания семян, т. е. количество семян, нормально проросших за более короткий срок, установленный для каждой культуры. Оценка прорастания семян включала в себя измерения массы и длины корней и проростков, а также расчет всхожести и энергии прорастания [16].

Лабораторные опыты: проращивание семян проводилось в растильнях при температуре 18−210C и интенсивном освещении по 30 семян для каждой экспозиции и контроля в трехкратной повторности. В ходе прорастания семян оценивалась всхожесть и энергию прорастания контрольных и опытных образцов на 3-й, 7-ой и 10-й день онтогенеза. У 10-и дневных проростков оценивали такие морфометрические показатели, как длина и масса корней и проростков в контрольных и опытных образцах. Проросшими считались семена с зародышевым корешком более 0,5 см. Полученные данные были статистически обработаны с помощью программы M. Exel[16].

Методика определения содержания основных фотосинтетических пигментов в листьях.

Навеску растительного материала (100—200 мг) размельчали ножницами, помещали в маленькую ступку, добавляли на кончике скальпеля немного СаСОз, приливали 4—5 мл ацетона и тщательно растирали. Полученную вытяжку сливали по палочке на стеклянный фильтр, вставленный в колбу Бунзена. При помощи насоса жидкость отсасывают. После этого в ступку приливали еще немного ацетона, растирали, снова вливали на фильтр и отсасывали жидкость. Эту операцию повторяют несколько раз, пока раствор, стекающий из фильтра, не будет абсолютно бесцветным. Вытяжку перелили в мерную колбу, колбу Бунзена ополаскивали несколько раз небольшими порциями ацетона и доводили чистым ацетоном объем вытяжки в мерной колбе до метки. Концентрацию хлорофиллов, а и b определяли на спектрофотометре. Для этого часть полученного экстракта наливали в кювету спектрофотометра. Вторую кювету, заполненную чистым растворителем, использовали как контрольную. Кюветы помещали в кюветную камеру спектрофотометра и определяли оптическую плотность D вытяжки при длинах волн, соответствующих максимумам поглощения хлорофиллов, а и b в 100%-м растворе ацетона, 662 и 644 нм.

Затем вычисляли содержание пигментов в растительном материале, мг/г сырой массы по формулам:

Схла, мг/л = 9, 784? D662 — 0,990? D644,.

Схлb, мг/л = 21,427 ?D644 — 4,650? D662,.

Схла +хлb, мг/л = 5, 135? D662 + 20,437? D644.

Cкар, мг/л = 4,695 ?D440,5 — 0,268 ?Схла +хлb [33].

Методика определения содержания суммарной фракции флавоноидов.

0,25 г измельченного сырья помещали в колбу вместимостью 100 мл, добавляли 10 мл 70% спирта. Колбу с содержимым соединили с обратным холодильником и нагревали на кипящей водяной бане в течение 30 мин, затем охлаждали до комнатной температуры и отфильтровали через вату в мерную колбу вместимостью 50 мл. Вату промыли небольшим количеством 70% этанола и добавили к полученному экстракту, после чего довести общий объем экстракта до метки. Полученный экстракт можно использовать для определения суммарной фракции фенолов и флавоноидов.

Количественное определение суммарной фракции фенольных и флавоноидов. К 0,1 мл полученного экстракта прибавляли 0,4 мл раствора 2% алюминия хлорида в этаноле, 1 каплю 30%-ной уксусной кислоты. Раствор доводили 96% спиртом до 5 мл. В качестве контроля использовали следующий раствор: к 0,1 мл спирта добавляли 1 каплю 30%-ной уксусной кислоты, доводили до 5 мл 96% спиртом. Через час измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм (для флавоноидов) и 765 нм (для фенольных).

Содержание суммы флавоноидов в процентах (Х) в пересчете на гликозиды кверцетина в абсолютно сухом сырье вычислить по следующей формуле (1):

Х = (1).

А — оптическая плотность исследуемого раствора;

V1 — общий объем экстракта, мл;

V2 — объем раствора для спектрофотометрирования, мл;

V3 — объем экстракта, взятый для определения, мл;

E1%1cm — удельный показатель поглощения гликозидов кверцетина в комплексе с алюминия хлоридом в этаноле при длине волны 410 нм, равный 330;

m — масса сырья в граммах.

W — потеря в массе при высушивании сырья в процентах. [34].

Потери массы при высушивании различных органов составляют для: соцветий — 70−80%; листьев — 55−90%; корней и корневищ — 60−80%. Сушка считается законченной, при содержании в сырье, 10−15% свободной (гигроскопической) влаги.