Изучение морфологических и культуральных свойств

1) Изучение морфологических свойств микроорганизмов.

Изолировав чистую культуру микроорганизма, необходимо определить ее видовую принадлежность. Для этого проводят изучение целого ряда свойств выделенных животных (морфологических, культуральных, биохимических). Для идентификации организмов изучают также антигенные свойства. При установлении вида патогенных бактерий обязательно определяют патогенность на лабораторных животных. Совокупность всех свойств, признаков, особенностей микроорганизмов называют биологическими свойствами.

Морфологические свойства изучают путем микроскопии окрашенных препаратов, приготовленных из исследуемых молодых культур, выделенных на плотных или жидких питательных средах. Молодыми культурами для большинства мезофильных микробов считают 1−2-суточные, выращенные при температуре 37 °C, а выращенные культуры при 20 °C исследуют не позже 2 суток. При описании морфологических свойств необходимо отметить состав питательной среды, температуру роста микроба и возраст культуры. При этом отмечается форма микробных клеток наличие, характер их расположения, размер, наличие спор (их расположение), капсул, наличие инволюционных форм, а также тинкториальные свойства т. е. способность микроорганизмов окрашиваться анилиновыми красителями и по методу Грама.

При изучении морфологических свойств параллельно определяют и чистоту культуры. Кроме просмотра окрашенных мазков определяют наличие жгутиков путем исследования подвижности микробов в препаратах висячая или раздавленная капля, а также путем посева культуры в полужидкий мясопептонный агар (подвижные бактерии вызывают помутнение агара, а неподвижные растут по линии укола).

Характеристика препарата:

• 1. Чистота культуры: чистая
• 2 Форма микробных клеток: кокки
• 3. Величина бактерий: мелкие
• 4. Характер расположения: кокки, стафилококки
• 5. Тинкториальные свойства (окраска по Граму): положительная
• 6. Наличие спор: нет
• 2) Изучение культуральных свойств микроорганизмов.

Этот этап представляет собой изучение особенностей их роста на плотных, полужидких и жидких средах при определенных условиях.

Характер роста на плотной питательной среде изучают с подробным описан формы, величины, прозрачности, цвета, поверхности, рельефа, консистенции краев и структуры колоний, образованных на МПА, также изучают характер роста по линии укола при посеве в столбик МПЖ. Бактерии каждого вида формируют колонии с определенными признаками, которые учитывают при идентификации.

Характеристика колонии на плотной среде (МПЖ):

• 1. Форма колонии: круглая с фестончатым краем
• 2. Диаметр колонии: 2−3 мм
• 3. Цвет колонии: бело-желтый
• 4. Рельеф: плоско-выпуклый
• 5. Поверхность колонии: гладкая
• 6. Характер краев: фестончатые, с небольшими неровностями
• 7. Структура колонии: гомогенная
• 8. Консистенция: кашеобразная
• 9. Блеск: присутствует
• 10. Прозрачность: полупрозрачная

Характеристика в жидкой среде (МПБ):

• 1. Степень помутнения: слабое
• 2. Наличие пленки на поверхности: тонкая, нежная
• 3. Наличие пристеночного кольца: слабо выражено
• 4. Наличие осадка: хлопьевидный
• 5. Цвет среды: желтый.
• 3. Изучение биохимических свойств.

У микроорганизмов разных видов в пределах рода есть общие (родовые) и специфические для отдельных видов ферменты. В связи с тем, что каждый вид микробов характеризуется важнейшим этапом идентификации микроорганизмов.

О наличии того или иного фермента судят по способности микроорганизма воздействовать на известный субстрат. Присутствие фермента выявляют по изменению физического состояния субстрата (разжижению желатина), закислению питательной среды (среды Гисса с углеводами). Образованию определенных продуктов метаболизма (индол, аммиак, сероводород) и т. д.

Ферментативная активность микробов чрезвычайно разнообразна. Она зависит от характера и количества ферментов, которые микробная клетка продуцирует и выделяет во внешнюю среду.

При изучении ферментативной активности микробов наибольшее значение придают определению сахаролитических, протеолитических, липолитических и окислительно-восстановительных ферментов, активирующих соответственно расщепление углеводов, белков липидов и редуцирующих некоторые органические красители.

Выявление сахаролитической активности. Сахаролитическую активность изучают по образованию микроорганизмами экзоферментов карбогидраз (глюкозидаз), по интенсивности образования органических кислот и ароматических веществ. Сахаролитическая способность микробов определяется по ферментативному расщеплению моносахаридов, полисахаридов, многоатомных условно именуемых «сахарами» на альдегиды, органические кислоты и газообразные продукты (углекислый газ, метан, водород). Конечными продуктами их расщепления являются углекислый газ и вода.

Для определения способности микроорганизмов расщеплять сахара используют специальные дифференциально-диагностические среды жидкие, полужидкие и плотные питательные среды. При отсутствии у микробов какого-либо фермента углеводы не расщепляются, индикатор остается в обесцвеченной форме, цвет среды не изменяется. Если под действием ферментов микробов углевод сбраживается, о образуется органическая кислота, которая вступает в реакцию с веществами, обесцвечивающими индикатор (со щелочью или розоловой кислотой) и нейтрализует их. В результате этого происходит восстановление цвета индикатора и окрашивание среды в розово-малиновый (с индикатором Андреде) или голубой (с индикатором «ВР») цвет.

Для выявления сахаролитических ферментов исследуемую культуру засеивают в среду Гисса, которая содержит 5 моноуглеводов: глюкозу, лактозу, маннит, мальтозу, сахарозу. Сахара и спирты, используемые для сред Гисса, должны быть химически чистыми.

Результат: Цвет среды изменился, значит есть фермент, под действием которого расщепляется углевод — рН среды меняется, а индикатор изменяет сцвет.