Лабораторная оценка иммунного статуса и диагностика основных иммунопатологических состояний

Оценка иммунного статуса проводится поэтапно. Прежде всего, чем приступить к лабораторному анализу, необходимо собрать иммунологический анамнез и выявить специфическую клиническую картину.

Лабораторные исследования подразделяют на тесты нескольких уровней. В ветеринарной практике используются в основном общий иммунологический анализ, позволяющий оценить иммунный статус и определить тип его функционирования.

Общий иммунологический анализ включает в себя:

Оценка клеточного звена иммунитета

подсчет общего числа лейкоцитов; выведение лейкограммы и расчет абсолютного количества лимфоцитов; определение относительного и абсолютного количества ТВ-лимфоцитов; определение фагоцитарной активности нейтрофилов.

Оценка клеточного звена иммунитета

определение концентрации в сыворотке крови суммарного количества иммуноглобулинов и их основных классов.

Оценка естественной резистентности

определение бактерицидной, лизоцимной активности крови; определение концентрации лизоцима, пропердина, интеферрона, комплемента и др неспецифическиз факторов иммунологической защиты Подсчет количества лейкоцитов и выведение лейкограммы, проводится по общепринятой методике. Почти все заболевания иммунной системы протекают с изменением количества лейкоцитов и их отдельных видов, зачастую меняется и их морфология.

Определение относительного и абсолютного количества Ти В-лимфоцитов крови. Определение соотношения между Ти В-лимфоцитами позволяет выявить направленность иммунологической реакции в какой-то мосент. Например, резкое увеличение числа В-лимфоцитов указывает на протекание фазы иммунного ответа, характеризующейся продукцией антител. Т-лимфоциты обеспечивают клеточные реакции иммунитета, в частности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и реакции трансплантационного иммунитета.

Ти В-популяции лимфоцитов мало различимы при световой микроскопии. Вместе с тем эти клетки имеют отчетливые антигенные и функциональные различия.

Одним из методов определения числа Ти В-лимфоцитов в крови является реакция розеткообразования. Суть ее состоит в том, что при контакте Т-лимфоцитов с эритроцитами барана клетки формируют образования, напоминающие тутовую ягоду, которые принято называть розетками. В-лимфоциты также могут формировать розетки, но для этого нужны более сложные условия: эритроциты нагружаются комплексом аниген-антитело-комплемент.

Определение фагоцитарной активности лейкоцитов (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс).

Фагоцитарная активность лейкоцитов максимально выражена у нейтрофилов и, в меньшей мере, у моноцитов и эозинофилов. Фагоцитарная активность лейкоцитов зависит не только от функциональной активности клеточных элементов, но и от состояния внутренней среды организма. Интенсивность же фагоцитоза в значительной степени обусловлена активностью самих клеточных элементов.

Наибольшее распространение получила методика определения фагоцитарной активности клеток крови по Кост и Стенко. Принцип методики основан на том, что при контакте с чужеродными частицами гранулоциты и моноциты поглощают (фагоцитируют) и разрушают их внутриклеточными ферментами. Для повышения диагностической значимости данного теста необходима стандартизация чужеродного вещества и преимущество необходимо отдавать латексу. Микробные культуры могут значительно влиять на ход реакции.

Определение иммуноглобулинов в сыворотке крови.

В ветеринарной лабораторной практике существует несколько методов определения иммуноглобулинов.

Количественное определение иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии в геле, содержащем моноспецифичную иммунную сыворотку (по Манчини). Суть методики: на стекляные пластины разливают раствор агара, содержащий моноспецифичную сыворотку, после застывания, в агаре делают лунки, в которые вносят исследуемую сыворотку крови животных. Затем пластины помещают во влажную камеру при 37оС и инкубируют в течение определенного времени. Далее замеряют диаметр образовавшихся колец преципитатов. В качестве стандарта используется сыворотка с известным количеством определенного иммуноглобулина.

Определение иммуноглобулинов методом дифференциального электрофореза в полиакриламидномгеле (в модификации В. М. Холода, 1983). Принцип метода: разделяют белки в зависимости от заряда белковой мицеллы и размера молекулы.

Определение иммуноглобулинов в сыворотке крови путем осаждения цинком сульфатом или натрия сульфитом. Принцип метода основан на том, что при добавлении цинка сульфата или натрия сульфита происходит осаждение из сыворотки иммуноглобулинов. Образующееся при этом помутнение, интенсивность которого зависит от концентрации иммуноглобулинов, можно оценить с помощью колориметра или нефелометра. Методы эти простые, но недостаточно специфичные.

Иммуноглобулины основные участники гуморального иммунитета. При многих иммунопатологических состояниях наблюдаются значительные отклонения уровней иммуноглобулинов в крови.

Ig G — самый легкий из иммуноглобулинов. Молекулярный вес его 150 000, подразделяется на 4 класса. Его количество составляет 70 — 80% от всех иммуноглобулинов. Ig G — составляет основную массу противобактериальных, противовирусных и др. антител, антитоксинов. Период полураспада составляет 12 — 14 дней. Активный синтез иммуноглобулинов G наступает на 3 — 7 дни после антигенного раздражения. Его количество возрастает во время инфекционных заболеваний (особенно п/острых и хронических), при некоторых болезнях печени и аутоиммунных расстройствах, после вакцинаций. Уровень этих иммуноглобулинов снижается при иммунодефицитах, задержке развития и некоторых опухолях лимфоидной системы.

Ig M — самый большой из иммуноглобулинов, молекулярная масса 900 000 — 950 000. Его количество составляет 10 — 15% от всех иммуноглобулинов. Несет на себе 5 — 10 активных, связывающих центров. Он в иммунном ответе появляется сразу. Способен связывать клеточные структуры и комплемент, антитоксической активностью практически не обладает. Период полураспада 3,5 сут. Концентрация Ig M повышается при острых инфекционных заболеваниях, поражающих систему крови, при острых гепатитах и первичном билиарном циррозе. Снижается — иммунодефицитах, некоторых опухолях лимфоидной системы.

Ig A — в организме существует в двух формах: сывороточной и секреторной (на слизистых). Связывается с клетками эпителия слизистых дисульфидными связями. Секретируется в молоко, слюну и секреты ЖКТ. Ig A связывает антиген, но не активизирует комплемент. Он играет решающую роль в местном иммунитете слизистых. Период полураспада составляет 3 — 6 суток. Количество от всех иммуноглобулинов 10 — 20%. Уровень сывороточного Ig A возрастает при заболеваниях дыхательных путей и кишечного тракта, при перитониальных инфекциях. Снижается — при гипои агам-маглобулинемиях, некоторых опухолях лимфоидной системы.

Ig Е — содержаться в сыворотке крови лишь в следовых количествах. В его состав входят реагины, подготавливающие базофилы и тучные клетки для участия в аллергических реакциях. Молекулярная масса 190 000. Количество возрастает при аллергических и инвазионных заболеваниях.

Ig D — также находится в крови в следовых количествах. Биологическая роль не установлена. Но считают, что он играет роль в развитии иммунологической толерантности и является как бы фактором предохраняющим иммунную систему от перенагрузки и истощения.

Кроме общего иммунологического анализа крови (тесты первого уровня) существуют тесты второго и третьего уровня, которые более специфичны и позволяют установить и дифференцировать конкретную патологию иммунной системы. К ним можно отнести разделение лимфоцитов на субпопуляции, выявление специфического аг или ат в иммунологической реакции и др.

Показательны при иммунологических реакциях и традиционные биохимические тесты (определение общего белка в сыворотке крови, концентрации гистамина, серотонина и др.).

Что касается нозологии, семиотики, классификации и номенклатуры болезней иммунной системы у животных, то этот вопрос в ветеринарной медицине более-менее оформлен. Примечательно, что родоначальниками этого выступали и выступают сотрудники ВГАВМ (Жаков, Прудников — иммуноморфология, Карпуть — иммунопатология и иммунитет при внутренних болезнях, Ятусевич — иммунитет при инвазионных болезнях, Конопелько, Могиленко, Абрамов, Севрюк, — иммунитет при незаразных болезнях, Веремей — при хирургической патологии, Кузьмич — при акушерско-гинекологической патологии и целый ряд др. сотрудников).

Поскольку иммунная система животных является наиболее динамичной, то она, естественно, постоянно меняются с возрастом, подвержена сезонным колебаниям, резко изменяется под влиянием различных факторов окружающей среды. В ветеринарной медицине выделяют следующие патологические состояния иммунной системы, или их можно объединить подтермином «иммунопатология» :

Иммунные дефициты (иммунодефициты).

Аутоиммунные болезни.

Аллергические заболевания.

Болезни иммунных комплексов.

Лимфопролиферативные заболевания.

2. Лабораторная диагностика основных иммунопатологических состояний 2.1. Диагностика иммунных дефицитов. Иммунный дефицит состояние, характеризующееся недостаточностью в целом или одного из звеньев иммунитета. О иммунном дефиците говорят тогда, когда имеется определенная клиническая картина на фоне недостаточности иммунитета по лабораторным показателям.

Иммунный дефицит может протекать по любому из супрессивных типов функционирования иммунной системы. Диагностируется по результатам общего иммунологического анализа крови.