Результаты. 
Исследование влияния МСМ сыворотки крови больных алкоголизмом на активность карбоксипептидазы Н и ФМСФ-ингибируемой карбоксипептидазы

Во фракциях, полученных кипячением сыворотки крови (t — МСМ) больных алкоголизмом по сравнению с контрольной группой здоровых людей обнаружено повышение ИИ у больных алкоголизмом. Наиболее выражено увеличение индекса интоксикации у больных с тяжелыми формами алкоголизма (депрессии, психические расстройства и т. п.) (рис.1).

а. б.

Рис. 1. Значения индекса интоксикации в разных группах. Контроль — группа клинически здоровых людей; группа 1 — больные алкоголизмом с выраженными симптомами — проявления алкогольного делирия (АД); группа 2 — больные алкоголизмом с выраженными симптомами — проявления алкогольно-абстинентного синдрома (ААС).

сыворотка кровь фракция пептид Индекс интоксикации больных алкоголизмом, оцененный по определению поглощения фракции ТХУ — МСМ после диализа оказался почти вдвое ниже, чем у контрольной группы здоровых людей (рис. 1 б). Вероятно, при диализе были удалены некоторые низкомолекулярные пептиды, содержащие ароматические аминокислоты и влияющие на поглощение при 280 нм.

ФМСФ — ингибируемая карбоксипептидаза (ФМСФ — КП) — фермент, открытый в лаборатории М. Т. Генгина в лаборатории биохимии ПГПУ им. В. Г. Белинского [3, 4, 7, 9], вероятно относится к классу сериновых карбоксипептидаз. Было показано, что уровень ФМСФ — КП коррелирует с распределением биологически активных пептидов — гормонов. Предполагается, что этот фермент вовлечен в биосинтез и процессинг нейропептидов [2, 7, 8]. Так как многие проявления алкоголизма (возбуждение, эйфория, депрессии и т. п.) напрямую связаны с нарушением баланса нейропептидов, представляет интерес изучение влияния фракций МСМ сыворотки крови больных алкоголизмом на активность ФМСФ — КП.

Фракции МСМ, полученные разными методами, оказывали различное действие на активность ФМСФ — КП. Наибольшие различия наблюдались при использовании фракции t — МСМ. Термостабильная пептидная фракция сыворотки крови здоровых людей оказывала значительное ингибирующее влияние на активность ФМСФ — КП (остаточная активность — 30%, рис. 2 а).

Вероятно, в сыворотке крови здоровых людей присутствуют ингибиторы протеиназ, контролирующие активность ферментов и уровень активных нейропептидов. При алкоголизме уровень этих ингибиторов снижается. Так, при добавлении термостабильной фракции сыворотки крови (t — МСМ) больных алкоголизмом в острой стадии алкогольного абстинентного синдрома (ААС) (группа 2) мы наблюдали лишь незначительное снижение активности ФМСФ — КП (остаточная активность — 85%). В условиях терапии (ноотропы, седативные препараты, витамины и т. д.) ингибирующее влияние сыворотки крови больных алкоголизмом восстанавливалось, но не достигало высоких ингибирующих значений контрольной группы здоровых людей (рис. 2 а, группа 4).

а. б.

Рис. 2. Влияние термостабильной фракции (t — МСМ) и ТХУ — МСМ фракции средних молекул сыворотки крови на активность ФМСФ — КП. Группа 1 — больные алкоголизмом с выраженными симптомами — проявления алкогольного делирия (АД); группа 2 — больные алкоголизмом с выраженными симптомами — проявления алкогольно-абстинентного синдрома (ААС); группа 3 — больные хроническим алкоголизмом с выраженными соматическими проявлениями (обострение хронических заболеваний, гепатоз, гепатит); группа 4 — больные, прошедшие курс комплексной терапии (инфузионная, антиседативные препараты, витамины, ноотропы, гепатопротекторы); контроль — группа клинически здоровых людей.

Отдельно среди наркологических больных была выделена группа людей с сочетанными патологиями — хронический алкоголизм, отягощенный гепатитом, почечной и сердечной недостаточностью (рис. 2 а, группа 3). Фракция t — МСМ сыворотки крови больных 3 — й группы оказывала наибольший ингибирующий эффект на активность ФМСФ-КП (остаточная активность — 20%). Вероятно, при длительном употреблении алкоголя нарушаются белок — синтезирующие функции печени, что приводит к дестабилизации компенсаторных механизмов, имеющих место в остром периоде заболевания.

На рис. 2 б приведены результаты исследований по влиянию на активность ФМСФ — КП диализованной фракции сыворотки крови здоровых людей и больных алкоголизмом (ТХУ — МСМ). ТХУ — МСМ сыворотки крови здоровых людей оказывали активирующее влияние на ФМСФ-КП. Фракции ТХУ — МСМ сыворотки крови больных алкоголизмом снижали активность ФМСФ — П в среднем на 20% (рис. 2 б).

Таким образом, фракции МСМ сыворотки крови, полученные разными способами (осаждение белков ТХУ и кипячение) не однозначно влияли на активность ФМСФ — КП.

Возможно, пептидные фракции сыворотки крови, полученные после осаждения белков разными способами, отличаются по соотношению пептидов различных молекулярных масс. Диализованнная ТХУ — МСМ — фракция содержит меньше низкомолекулярных пептидов (до 1000 кДа), чем недиализованная t — МСМ (удаление белков кипячением).

Также неоднозначно действуют МСМ — фракции сыворотки крови на активность карбоксипептидазы Н. КП Н — основной фермент процессинга нейропептидов, относится к классу карбоксипептидазо — В — подобных ферментов, катализирует реакцию отщепления положительно заряженных аминокислот с С — конца пептидов [2, 5, 8].

У здоровых людей фракция t — МСМ, содержащая преимущественно низкомолекулярные пептиды, оказывала ингибирующее действие на активность КП Н (остаточная активность — 29,7%, рис. 3 а), а диализированная фракция ТХУ — МСМ активировала КП Н (остаточная активность — 120%, рис 3 б). Влияние t — МСМ сыворотки крови больных алкоголизмом на активность КП Н прослеживалась более четко, чем влияние диализованных ТХУ — МСМ. У больных с проявлениями алкогольно — абстинентного синдрома наблюдается сильная активация КП Н при исследовании фракций t — МСМ, активация по сравнению с контролем прослеживается и у больных с АД, но гораздо слабее (рис. 3 а, группы 2 и 1).

а. б.

Рис. 3. Влияние фракций t — МСМ и фракций ТХУ — МСМ сыворотки крови на активность КП Н. Группа 1 — больные алкоголизмом с выраженными симптомами — проявления алкогольного делирия (АД); группа 2 — больные алкоголизмом с выраженными симптомами — проявления алкогольно — абстинентного синдрома (ААС); группа 4 — больные, прошедшие курс комплексной терапии (инфузионная, антиседативные препараты, витамины, ноотропы, гепатопротекторы); контроль — группа клинически здоровых людей.