Особенности взаимодействия лаброцитов и макрофагов при различных условиях инкубации

Ильин Д.А.

Проблемы адекватности терапевтического воздействия у пациентов с хроническими воспалительными заболеваниями и характер их распространения определяют актуальность проведения соответствующих исследований [3; 4; 5; 6]. Особого внимания заслуживает изучение взаимодействия макрофагов и тучных клеток (лаброцитов) в процессах хронизации воспаления, а генетические аспекты этого феномена не достаточно освещены в современной литературе [1]. При этом количественный состав очагов воспаления играет важную роль, определяющую адекватность иммунного ответа [2].

Целью работы являлось изучение характера взаимодействия макрофагов и лаброцитов in vitro в зависимости от концентрации посадки и генетической принадлежности перитонеальных клеток.

В зависимости от генетической принадлежности и концентрации посадки клеток были сформированы следующие группы культур. Концентрация посадки в контрольных группах составляла 1000 тыс. перитонеальных клеток в 1 мл взвеси, выделенных от мышей линий C57BL/6 и CBA, а в экспериментальных группах она соответствовала 500 тыс. клеток в 1 мл. Определяли показатели фагоцитарной активности, включая фагоцитарный индекс, фагоцитарное число и общую поглотительную активность культуры. Находили численность дегранулирующих и не дегранулирующих тучных клеток. Оценивали влияние концентрации посадки и генетической принадлежности культур перитонеальных клеток на характер взаимодействия макрофагов и лаброцитов. Результаты оценивали на 2, 24, 48 и 72 часа инкубации.

На основании результатов проведенного исследования можно утверждать, что существует несколько типичных проявлений взаимодействия макрофагов с тучными клетками, связанных с характером поглощения фагоцитами гранул лаброцитов. При высокой концентрации посадки клеток значения фагоцитарного индекса на соответствующие сроки культивирования у группы СВА превосходили параметры группы С57ВL/6 в 3 — 5 раз. Фагоцитарное число и уровень общей эндоцитозной активности превышал таковой у группы С57ВL/6. Показатель численности дегранулирующих тучных клеток на все последующие сроки наблюдения превышал исходные параметры (на 2 часа). Наиболее часто дегранулирующие лаброциты встречались через 24 часа культивирования, а их численность превышала контрольные параметры в 3 раза. При увеличении сроков инкубации количество дегранулирующих клеток прогрессивно уменьшалось.

На 2 часа инкубации в культурах групп C57BL/6 и СВА наблюдали, что фагоцитарная активность макрофагов в равной степени проявлялась, как рядом с дегранулирующими лаброцитами, так и на удалении от них. Это на наш взгляд связано либо с низкой исходной фагоцитарной активностью макрофагов, когда гранулы успевают распределиться на значительное расстояние, либо с высокой скоростью выброса гранул в момент гибели лаброцита. В группе СВА на первые сутки инкубации отмечали, что гранулы содержали только те фагоциты, которые прилегали к области дегрануляции тучных клеток. В группе C57BL/6 такая взаимосвязь отсутствовала. На вторые сутки наблюдения в обеих группах в поглощении гранул участвовали фагоциты, расположенные в близи от дегранулировавших тучных клеток. В культурах клеток группы C57BL/6 большое количество гранул не поглощалось макрофагами, которые уже успели исчерпать свои потенциальные возможности в плане фагоцитарной активности. Диаметрально противоположную ситуацию отмечали в группе СВА. Через 72 часа экспозиции в группах C57BL/6 и СВА находили значительное количество не поглощенных гранул. Наиболее убедительной причиной данного явления следует считать снижение фагоцитарной активности клеток в этот период.

При пониженной концентрации посадки перитонеальных клеток показатели фагоцитарной активности (включая фагоцитарный индекс, фагоцитарное число и общую поглотительную активность) имели минимальные значения на все сроки инкубации в группах СВА и C57BL/6, поскольку гранулы лаброцитов фагоцитировались единичными макрофагами, содержащими незначительное количество гранул тучных клеток. Дегрануляции подвергались только единичные лаброциты.

На 2 часа экспозиции в обеих группах с низкой концентрацией клеток было зарегистрировано отсутствие фагоцитирующих макрофагов как в непосредственной близости от области дегрануляции лаброцитов, так и на удалении. В период наблюдения на 24 и 48 часов в группах культур от животных линии СВА и C57BL/6, отмечали наличие фагоцитов, участвующих в поглощении гранул тучных клеток только вблизи от дегранулировавших лаброцитов. В группе СВА на 72 часа инкубации культур, фагоцитирующие макрофаги присутствовали в непосредственной близости от области дегрануляции тучных клеток. В этот период в культурах группы C57BL/6 находили, что фагоциты преимущественно не участвовали в поглощении гранул, однако единичные макрофаги, находящиеся вблизи места дегрануляции лаброцитов содержали данные структуры.

Таким образом, наибольшую численность дегранулирующих лаброцитов выявляли в культурах от животных линии СВА на все сроки наблюдения в группе с высокой концентрацией перитонеальных клеток. При низкой концентрации посадки отсутствовали достоверные межгрупповые отличия в численности дегранулирующих тучных клеток на все сроки проведения эксперимента, поскольку дегрануляции подвергались только единичные лаброциты. В культурах с высоким содержанием клеток активность накопления метаболитов и секреция комплекса медиаторов макрофагами была повышенной, что и способствовало процессу дегрануляции. В культурах с пониженным содержанием клеток, вероятно, требовалось значительно больше времени для накопления указанных веществ.

Снижение концентрации посадки перитонеальных клеток в 2 раза приводила к резкому уменьшению абсолютной численности дегранулирующих тучных клеток и абсолютных показателей фагоцитоза (прежде всего общей эндоцитозной активности), по причине низкого содержания лаброцитов и макрофагов в обедненных культурах. Вероятной причиной минимальных значений показателей фагоцитарной активности является снижение концентрации регуляторных факторов макрофагов и тучных клеток.

В результате проведенного исследования было показано, что существуют генетически и концентрационно обусловленные различия в динамике фагоцитоза гранул лаброцитов макрофагами, и в характере взаимодействия между этими клетками. Особенности поглощения макрофагами гранул, содержащих биологически активные вещества (участвующие в развитии воспалительного процесса) указывают на то, что фагоциты могут либо способствовать высвобождению или активации этих веществ, либо избирательно инактивировать их, играя при этом роль регуляторов последующих клеточных реакций.

Возможность моделирования различных генетически детерминированных реакций макрофагов во взаимодействии с лаброцитами может быть использована в ходе разработки эффективных методов лечения больных с воспалительными заболеваниями.

макрофаг клетка лаброцит заболевание.