Методология и методы проведённого исследования

Исследования сывороток крови на наличие специфических антител против вируса РРСС и ПВИС полученных от свиней разных половозрастных групп проводились с помощью коммерческих наборов ИФА «РРСС-серотест» и РТГА производства НПО «Нарвак» г. Москва.

Научная новизна, практическая и экономическая значимость полученных результатов

Полученные результаты позволят усовершенствовать методы специфической профилактикия для борьбы с РРСС и ПВИС в свиноводческих хозяйствах и позволят существенно снизить финансовые затраты на приобретение биологических препаратов.

2. Основная часть

Обзор литературы

Патология репродукции свиней связана в первую очередь с инфекционными агентами [29].

Инфекционные агенты, вызывающие патологию воспроизводства свиней, подразделяют, как правило, на три группы [37]. В первую группу входят обычные микроорганизмы, распространенные практически во всех свиноводческих хозяйствах. Они проявляют патогенное действие у свиноматок с пониженной резистентностью. В эту группу микроорганизмов входят эшерихии, коринебактерии, стрептои стафилококки, пастереллы, микобактерии, листерии, микоплазмы и др. Полноценное кормление и соблюдение технологии производства — основа профилактики патологии репродукции свиней, связанной с инфекционными агентами первой группы.

Вторая группа включает инфекционные агенты, широко распространенные во многих свиноводческих хозяйствах и против которых развивается хороший иммунитет. В эту группу входят энтеровирусы свиней 4 серотипов (1, 3, 6, 8) и парвовирус свиней. Эти вирусы нарушают физиологический статус свиноматок, и после проникновения через плаценту вызывают гибель эмбрионов и плодов. Патогенное действие вирусов проявляется только в том случае, если они проникают через плаценту и поражают плоды в период их иммунологической ареактивности (до 70-дневного возраста). Аборты у свиноматок, как правило, не происходят.

В третью группу входят инфекционные агенты, вызывающие тяжелые репродуктивные нарушения. К этой группе относят вирусы классической чумы, болезни Ауески и репродуктивно-респираторного синдрома свиней, а также бруцеллы и лептоспиры. Эти инфекционные агенты вызывают патологию воспроизводства и нарушения общего состояния организма свиней. Клинически у животных отмечают повышение температуры тела, отсутствие аппетита и аборты. Плоды, погибшие до 55−60-дневного возраста, как правило, мумифицируются, а погибшие в более позднем возрасте подвергаются аутолизу — разложению под влиянием гидролитических ферментов. Аномалии у плодов развиваются после поражения вирусом классической чумы свиней [8,39,48].

Среди многочисленных болезней животных — инфекционные — причиняют самый серьезный экономический ущерб, особенно странам с высокоразвитым свиноводством. Поэтому специфическая профилактика многих инфекционных болезней свиней достигла исключительно широких масштабов и стала неотъемлемой частью технологии ведения свиноводства, особенно на промышленной основе [52,55]. В последние 15 лет во многих странах мира с развитым свиноводством были обнаружены два новых массовых вирусных заболевания, причиняющих ощутимый экономический ущерб. Во-первых, это репродуктивно респираторный синдром свиней (РРСС), впервые зарегистрированный в США и Канаде в 1987 г. и в большинстве стран Европы и Азии в 1990;1992 годах [55]. Во-вторых, это парвовирусная инфекция свиней [1]. В крупных свиноводческих хозяйствах эти заболевания нередко протекают совместно [7,8,25,35,39,41]. В конце 80-х годов двадцатого столетия в США начали накапливаться сообщения о болезни неизвестной этиологии, в которых основное внимание уделялось клиническому проявлению болезни. Ветеринарные специалисты полагали, что наблюдаемый ими синдром уникален вследствие своей тяжести, продолжительности, комбинации признаков нарушения репродуктивной и респираторной функций. Поскольку этиология оставалась неизвестной, синдром назвали «таинственная болезнь свиней» (Mystery swine disease) [52,54,55]. Использовали также и ряд других названий этой болезни: «синее ухо», «голубой аборт», «энзоотический аборт свиней», «инфекционный поздний аборт свиней», «SMEDI-подобный синдром», «бесплодие и респираторный синдром свиней» [65, 56, 57].

В июле 1991 года исследователи Центрального ветеринарного института в г. Лелистад (Голландия) сообщили, что им удалось выделить специфический возбудитель — вирус РРСС. Голландским ученым удалось установить истинную этиологическую природу этой болезни, выделив вирус, названный ими «агент Лелистад», в культурах легочных макрофагов свиней [52]. В настоящее время установлено, что возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус, который входит в род артеривирусов [14,48,52,55]. Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС, «синее ухо, голубой аборт», эпизоотический поздний аборт свиней) — вирусное контагиозное заболевание главным образом свиноматок, характеризующееся абортами, наличием мертворожденных поросят, преждевременными опоросами или задержкой опороса, респираторными нарушениями, появлением окрашивания кожи ушей и других органов. Болезнь отличается большим разнообразием признаков, определяемых во многом общим состоянием здоровья животного [3,7,33,]. При интродукции в неинфицированное стадо инфекция причиняет большой экономический ущерб, но скоро переходит в умеренную или даже инаппарантную форму. В эндемичной форме вирус продолжает долгое время циркулировать в стаде. В течение многих недель персистирует виремия. Вирус предрасположен к макрофагам и не размножается в большинстве клеточных линий, отличается чрезвычайной генетической и АГ — вариабельностью [6,10,11,14,22,23,26]. Первоначально это заболевание получило название «таинственная болезнь свиней» В 1991 г. были опубликованы сообщения о появлении аналогичного заболевания свиней в странах Европы. При этом ученым из Центрального ветеринарного института в Нидерландах был выделен новый вирус, который назвали «вирус Лелейстад». Вирус Лелейстад это РНК-содержащий, оболочечный вирус, отнесен к роду артеривирусов. Для исключения разночтения этой болезни в различных странах мира, сессия МЭБ (апрель 1991 г.) и 2-й Международный симпозиум в США (1992 г.) приняли единое название — репродуктивный респираторный синдром свиней (РРСС), или PRRS в латинской транскрипции [34,36].

В настоящее время можно говорить о панзоотии РРСС. Многие страны не могут лабораторно диагностировать болезнь или не хотят сообщать о ее появлении. [7,13,47,52,53,55,56,57]. На американском континенте о болезни сообщали США и Канада. В США существуют четкие статистические данные по болезни. Известны данные о её наличии в 19 штатах [55]. Cообщается о ретроспективном выявлении 364 стад животных, положительно реагирующих на РРСС на основании серологических исследований только в 7-ми свиноводческих штатах (Айова, Иллинойс, Индиана, Мичиган, Небраска и Северная Каролина). В Канаде сообщения подтверждены серологически в 2-х штатах: Онтарио и Квебек. В Европе наибольшее распространение болезни отмечали в свиноводческом поясе, охватывающем западные земли Германии, Нидерланды и Бельгию [52,53,54,55,56,57]. В Бельгии наибольшее количество вспышек болезни регистрировали в апреле 1991 г. В свиноводческих хозяйствах Франции РРСС — новое заболевание, вызываемое у свиней новым вирусом. Проявляется разнообразной симтоматологией и сопровождается абортами, мертворождением и гибелью поросят, а также гриппоподобными проявлениями. Во Франции РРСС регистрировали на 169 племенных фермах в период с ноября 1991 г. по май 1992 г., главным образом, в провинции Бретань. В Англии болезнь появилась в мае 1991 г. и широко распространилась в графствах Хамберсайд и Северном Йоркшире, а в последующем и в Шотландии. Болезнь регистрировалась также в Дании, Испании, Голландии и на о. Мальта. Обнаружены специфические AT к возбудителю в пробах крови свиней, поступившей в диагностические центры Европы из Италии и Польши.

Возбудитель болезни — РНК-содержащий вирус размером 45−65 нм. [34,36]. Он имеет наружную оболочку и чувствителен к липидным растворителям. По физико-химическим свойствам напоминает представителей семейства тогавирусов, рода артеривирусов (вирус артериита лошадей). Вирусы РРСС, выделенные в Европе (агент Лелистад) и в США (VR-2332), несколько отличаются по биологическим свойствам, хотя и имеют перекрестные серологические связи [45,46].

В культурах легочных макрофагов вирус РРСС вызывает ЦПИ в виде округления клеток с последующим пикнозом и отделением от монослоя в течение 2−4 сут. Вирус содержит РНК и оболочку, способен реплицироваться в макрофагах и проходить через плаценту, заражая плод, может длительно персистировать в организме животного и вызывать повторно иммуносупрессию. Передается при прямом контакте и респираторно. Быстро распространялся на фермах. Вирус РРСС проникает трансплацентарно, на что указывает обнаружение возбудителя и специфических AT у мертворожденных плодов и живых ослабленных поросят до первого приема молозива. Вирус чувствителен к изменению рН среды. Оптимум рН от 5 до 7. Обследовано 4 свиноводческие фермы на наличие AT к вирусу РРСС с помощью ИФА в течение 12 нед после опороса [47]. Титр AT у свиноматок сопоставляли с титром материнских AT у поросят в возрасте 2 нед. Материнские AT, выявляли у поросят в течение 4−10 нед. ВНА обнаружили через 12 дней после заражения или 18 дней после контакта с больными животными. Максимальных титров они достигали на 40−50-е сутки после заражения и сохранялись до 120 дней (срок наблюдений) [16,17].

Вирус РРСС успешно репродуцируется в легочных альвеолярных макрофагах (АМФ) поросят [26]. Для получения АМФ используют 4−6-нед поросят, свободных от патогенной микрофлоры ферм. АМФ выделяли 2-кратным промыванием отпрепарированных и изолированных легких забуференным физраствором, содержащим антибиотики (пенициллин, стрептомицин, неомицин и амфотерицин), который нагнетали через трахею с помощью автоматического шприца с иглой (около 500 мл). Выбор жидкости из легких, содержащей АМФ, проводят обычно шприцами через то же отверстие. Суспензию клеток из легких центрифугировали при 1500 обор. — 15 мин. При наличии эритроцитов к осадку добавляли 0,83%-ный р-р хлорида аммония и после 5-мин инкубации при комнатной температуре клетки вновь центрифугируют при тех же условиях. Заражение вирусом РРСС проводили через 2−24 ч после 2-кратной отмывки питательной средой и антибиотиками. Учет цитотоксического действия вируса проводят через 24, 48, 72, 96 и 120 ч. Культуральную жидкость используют в качестве AT ELISA. Титр макрофагального вируса составлял 1:8−1:16. Таким образом, АМФ могут быть использованы для препаративной наработки вируса в исследовательских целях, изготовления диагностикумов и обнаружения вируса в патологических материалах. Чувствительными к вирусу РРСС являются первичная культура АМФ свиней и клон клеток MARC-145 (клоновый вариант, полученный из перевиваемой культуры клеток МА-104 почки африканской зеленой мартышки). Максимальное накопление вируса отмечали при посевной концентрации 100−120 тыс. клеток/1 мл с использованием фетальной сыворотки и снятия монослоя не позднее 3−4-х суток [24].

У свиноматок болезнь начинается с временного отказа от корма или худшей его поедаемости [40,42]. В период абортов отмечают как повышенную до 41,5°С, так и пониженную температуру тела. У отдельных животных наблюдают респираторные нарушения и у 1−5% - голубовато-красное окрашивание кожи ушей, пятачка и вульвы. Существенным признаком заболевания супоросных свиноматок периода, близкого к опоросу, являются аборты и преждевременные опоросы, возникающие через 2−3 нед после обнаружения первых симптомов болезни. По данным английских ученых, пораженные свиньи на первой стадии болезни проявляют признаки инфлюэнцы, в частности, высокую температуру тела и тяжелое дыхание. Позднее ярко-красные пятна появляются по всему телу свиньи. Спустя некоторое время окраска пятен изменяется, и они приобретают синий цвет [25,38]. В первые 2 недели болезни, аборты могут составлять 60−70%, через 3 нед — 50 и через 18 нед — 10%. В естественных условиях клиника может значительно варьировать от стада к стаду и не коррелировать с основной тяжестью репродуктивных нарушений. В отдельных хозяйствах количество абортировавших свиней на последней стадии супоросности достигает 100%.

При анализе 214 пораженных хозяйств в округе Мюнстерленд в Германии [52] установлено, что 37% абортов произошло на 100−112 дни, 49% - на 113−11 дни 14% - на 117−120 дни супоросности. Если рассматривать крайние пределы нормальной супоросности в 113−117 дней, то запоздалые опоросы до 120 дней могут свидетельствовать о гибели плодов в более раннем периоде, обусловленных другими инфекциями свиней с репродуктивным синдромом, такими как парвовирусная или энтеровирусная. Однако, как правило, мумификации плодов при остром течении РРСС не наблюдается. В отдельных случаях у свиноматок наблюдали залеживание, шаткую походку, паралич задних конечностей или косую постановку головы. Гибель свиноматок не превышает 2%. После абортов свиноматки довольно быстро выздоравливают и только у отдельных из них отмечали «послеродовые схватки». Свиноматки повторно приходят в охоту, однако сообщается об удлиненном сроке холостого периода. У свиноматок, опоросившихся в оптимальные сроки супоросности (114,7±1,7 дн) в остром периоде болезни до 100% поросят могут быть мертворожденными. Немецкие авторы [52,56], обработав большое количество статистических показателей пораженных хозяйств, установили, что от больных свиноматок в пометах насчитывали 30−40% мертворожденных, 30% слабых и 30% внешне здоровых поросят. У мертворожденных поросят наблюдали выпуклообразную форму головы, конъюнктивиты и поражение роговицы глаз, подкожные отеки. Слабые поросята массой до 1 кг издают ужасающий визг и стенания, задние конечности их часто вытянутые, и они не могут нормально встать на ноги. При хроническом течении наблюдают относительное благополучие супоросных маток. Спустя 1−1,5 месяца возможно рождение на неблагополучной ферме здоровых поросят, но через некоторое время вновь отмечают аборты [18]. В откормочных хозяйствах болезнь протекает с рядом особенностей: основные клинические признаки связаны с поражением органов дыхания.

При вскрытии наблюдают кровоизлияния и отеки подкожной клетчатки, увеличенное содержание жидкости в перикардиальной и брюшной полостях, дистрофию печени и изменения в легких. Они кровенаполнены и чаще имеют мозаичную окраску. Слаборазвитые поросята, как правило, гибнут в первые недели жизни. Через 4−6 нед заболевание начинает приобретает хроническое течение; наблюдается задержка роста и развития, а также повышенная чувствительность к секундарным инфекциям. У отдельных животных отмечали негнойные энцефалиты и миокардиты [12, 20,21,38]. Правда, у большинства поросят их не обнаруживали. В целом патологоанатомические признаки не характерны и напоминают таковые при бактериальных инфекциях. У маток с поражением ушей признаков миокардита не отмечали. У больных животных в США процент поражения сердечной мышцы значительно выше, чем в Германии. Нередко болезнь протекала в смешанной форме, одновременно с гриппом, БА, парвовирусной инфекцией [39].

Korenc [54] проводил опыты по заражению культуральным вирусом РРСС 8-ми свиноматок на 84-й дн супоросности. Только у 2-х свиноматок наблюдали 1-дн повышение температуры тела до 39,6°С. У 2-х — покраснение кожи ушей и учащенное дыхание. Одна свиноматка абортировала на 10-й дней супоросности и принесла 7 мертвых и 4 живых слаборазвитых поросят. Две другие опоросились на 116-й и 117-й дн супоросности и в пометах обнаружили 10 живых и 19 мертворожденных поросят, из которых 5 были мумифицированными Оставшиеся 5 свиноматок опоросились на 113−115-и дн супоросности без репродуктивных нарушений. В пометах было 58 поросят, многие из которых были слаборазвитыми и 26 из них (40%) пали в течение 1-й нед жизни Вирус РРСС был выделен от 31 поросенка (30% инфицированности). При интратрахеальном и внутримышечном заражениях на 2−5-е сут у инфицированных подсвинков отмечалось незначительное (на 0,5−1,5°С) повышение температуры тела. У 2-х животных на 10−12-й день после заражения отмечен кашель. Других клинических признаков болезни не выявлено. Повышение количества лейкоцитов в крови было установлено через сутки после заражения животных и к 4-му дню их уровень достигал 28−30 тыс/мл и сохранялся в течение 2−3 нед. У подсвинка, находившегося в контакте с зараженными животными, повышение температуры тела отмечено на 18−19-е, а увеличение числа лейкоцитов на 6-е сутки после совместного содержания. На 5 и 14 день после заражения было убито по одному животному. При патологоанатомическом исследовании у них отмечали единичные очажки острой бронхопневмонии [21]. В обоих случаях из легких и легочных альвеолярных макрофагов выделен вирус РРСС. В остальных внутренних органах подопытных животных видимых изменений не обнаружено. При интраназальном заражении вируссодержащей суспензией поросят 4-нед возраста температура тела их повышалась до 40,5°С, удерживаясь на этом уровне 3 дн, отмечалось учащенное дыхание, отказ от корма и общее угнетение Подкожное и внутримышечное введение вируссодержащего материала не вызывало у взрослых белых мышей никакой видимой реакции. Однако та же суспензия после внутримозгового введения белым мышам вызывала появление нервнопаралитических признаков и их гибель. С 3-го пассажа гибель мышей наступала через 24 ч Вирус № 9−181−93, адаптированный к белым мышам, вызывал специфическое ЦПД. В 1995 г. в Курской области был выделен вирус РРСС, который не вызывал ГА эритроцитов и Гад. У животных, зараженных европейским стандартным штаммом «Лелистад» вируса РРСС, клинических признаков не отмечалось.

С эпизоотической точки зрения важен путь распространения инфекции. В частности, в декабре 1990 г. болезнь зарегистрирована в Нидерландах. Свиноводство в этой стране — одно из наиболее концентрированных в мире, и естественно, болезнь очень быстро распространилась респираторным путём, весьма возможно, аэрозольно. Предположительно, факторами передачи возбудителя могли быть и птицы, а также люди и автомобили (если эти объекты были в контакте с инфекционным агентом) [40].

Большинство сельскохозяйственных выставок и ярмарок по продаже свинопоголовья в 1991 г. в Великобритании были запрещены. По данным госветслужбы этой страны в настоящее время нет доказательств распространения болезни воздушным путём, и все случаи заноса возбудителя связаны с передвижением поросят. Вирус может персистировать в заражённых стадах свиней до полугода. Это может быть связано с отсутствием сероконверсии у отдельных явно инфицированных животных. Отдельные заражённые свиноматки могут быть источником заражения для здоровых животных в течение 99 дней. Английские исследователи считают, что стада свиней остаются заражёнными в течение 2-х мес после прекращения появления явных клинических признаков болезни. Отмеченное прямо связанно с производственными показателями поражённых РРСС племенных ферм свиней. На небольших фермах на 50−200 свиноматок в период острого течения болезни недополучают более 50% поросят.

В 1993 г. в Голландию [были направлены 40 проб сывороток крови от свиноматок с нарушениями репродуктивной функции из 10 хозяйств для исследования на наличие AT к вирусу репродуктивного и респираторного синдрома. Во всех 10 обследованных хозяйствах обнаружены положительно реагирующие свиноматки. Из 40 исследованных проб сывороток крови 38 оказались положительными, причем большая часть сывороток (72,5%) содержала специфические AT в высоких титрах (1:640 и выше). Высокий процент положительных сывороток свидетельствует о широкой циркуляции вируса в исследуемых свиноводческих хозяйствах. Вирус РРСС, вероятно, обладает иммунодепрессивными свойствами. Американскими исследователями [52] установлено уменьшение числа альвеолярных макрофагов и нарушение их функции у инфицированных поросят. Макрофаги играют важную роль в индукции AT образования — они передают агент Ти В-лимфоцитам. Развитие респираторного синдрома, по-видимому, обусловлено вторичными бактериальными инфекциями после размножения вируса в альвеолярных макрофагах и нарушения иммунной системы лёгких [22].

Диагноз на РРСС ставят на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований [16,17,19,30,31]. Для выделения вируса используют сыворотку или плазму крови больных и павших поросят, пробы лёгких, селезёнки, плевральной и перикардиальной жидкости [4,5,24]. Выделение вируса проводят в культурах альвеолярных макрофагов, полученных от молодых (6−8 недель) СПФ-поросят. Успех голландских учёных [22,53] объясняется прежде всего тем, что они использовали эту культуру, в то время как культуры клеток РК-2, РК-15 и К-6 оказались не чувствительными для выделения возбудителя. Идентификацию возбудителя проводят по физико-химическим и серологическим свойствам. Из серологических методов используют вначале непрямой метод ИФ и прямой метод ИФА В США для идентификации возбудителя использовали РН, разработанную с этим вирусом в университете штата Миннесота, а также ИФ и ИФА, разработанные в национальной лаборатории Ames в шт. Айова. Во Франции разработан непрямой метод ИФА для обнаружения специфических AT [1,2,14,20. Сероконверсия в диагностических титрах (1:20 и выше) развивается к 14-му да после экспериментального инфицирования, а к 28-му дн титры антител накапливаются до 1:1280. Разработана методика очистки и концентрирования культурального вируса РРСС, репродуцированного в культуре клеток МАРС-145 и FL [32]. Предварительно вируссодержащая суспензия очищается от балластных белков низкоскоростным центрифугированием, затем концентрируется 2-кратным осаждением ПЭГ мол м. 6000 и очищается высокоскоростным центрифугированием (70 000 мин-1 в течение 6 ч). В градиенте плотности CsCl-сахарозы материал концентрировали в 100 раз. Очистка составляла 96,5%. Все этапы подготовки препаратов контролировали по активности в ИФА. Высокоспецифичные активные препараты АГ вируса РРСС используют для изготовления AT диагностикумов для ИФА [23]. Метод непрямой ИФА более простой и его можно использовать в полевых условиях. Достаточно исследовать из стада 10 проб сывороток, (лучше парных), чтобы с уверенностью поставить лабораторный диагноз [31].

В Англии практикуется сбор из 12−15 пар сывороток от подозреваемого стада. Служба диагностики на РРСС в этой стране действует с апреля 1992 г. Исследовано уже 118 стад и было выявлено 31 стадо, положительно реагирующее на РРСС. При серологическом исследовании ложноположительные реакции, как правило, отсутствуют, хотя ложноотрицательные являются обычными и достигают 25%. В РФ разработан твердофазный ИФА, для проведения диагностики РРСС, составлены наборы диагностикумов для выявления вируса РРСС и специфических AT [31,41,50,51]. МонАТ к вирусу РРСС могут быть использованы как для выявления АГ вируса РРСС в патологическом материале, так и для определения AT в сыворотках крови свиней, так как они дают более специфическую реакцию по сравнению с полиАТ [23].

При дифференциальной диагностике необходимо исключить вирусные и бактериальные болезни, протекающие с нарушениями в репродуктивных системах, а также отравления. Исключают прежде всего АЧС, КЧС, БА, грипп свиней, ЭМК, парвовирусную болезнь, ТГЭ, лептоспироз и хламидиоз [9,39]. Характерной особенностью этой болезни является обострение вторичных и хронически протекающих инфекций, возбудители которых могут скрытно циркулировать в пораженных стадах свиней. Это ещё более усложняет проведение лабораторной дифференциальной диагностики [42,43,44].

После переболевания большая часть свиноматок оказываются иммунными к повторному инфицированию. AT к вирусу РРСС, выявляемые в ИФА, могут персистировать в течение года. При достаточно пессимистичном отношении к созданию средств специфической профилактики РРСС появляются предпосылки решения данного вопроса [15,27,28,49]. Так выдан патент ЕРА 95 200 877.9 Akzo Nobel (Нидерланды) на европейские штаммы вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней, используемые для создания вакцин. О механизме развития иммунитета известно крайне мало. В Англии также ведется разработка вакцин.

Меры борьбы. Специфических средств лечения при РРСС нет. Отсутствуют также средства специфической профилактики. Лабораторная диагностика болезни затруднена прежде всего из-за необходимости проведения большого спектра дифференциальных диагностических исследований. Поэтому при возникновении болезни в ранее благополучной стране необходимо принятие решений проблемы в национальном масштабе: полностью запретить вывоз свиней, туш и навоза из подозрительных ферм и свинохозяйств; наложить ограничения по передвижению свинопоголовья в течение 8 нед после последнего случая выздоровления. Свинопоголовье, предназначенное на экспорт, надо перевозить в специально оборудованных транспортных средствах. Подозрительный инфицированный материал (плаценту, плоды и мертворождённых поросят) необходимо уничтожать. Убирать, дезинфицировать помещения и места опороса свиноматок. Обязательно должны быть дезинфицированы коврики на входе свиноводческих помещений.

Парвовирусная инфекция свиней (ПВИС) является одной из причин наносящих большой ущерб свиноводству [39]. Она рассматривается как болезнь, которой подвержены только супоросные свиноматки, в период до 60 дней супоросности. ПВИС является одной из основных причин появления свиноматок, неоднократно приходящих в охоту. Вирус вызывает гибель эмбрионов и появление в опоросах мумифицированных плодов различного возраста. Заболевание вызывается ДНК вирусом, относящимся к семейству Parvoviridae [34]. Вирус содержит одноцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты. Для репродукции этого вируса требуется наличие высокого уровня митотического деления. Первый представитель семейства Parvoviridae был описан Килхэмом и Оливьером [34,36] в 1959 году и получил название латентный вирус Килхэма. Вирионы парвовирусов представляют собой мелкие безоболочечные икосаэдрические частицы диаметр которых варьирует от 17 до 28 нм, состоящие из 32 капсомеров диаметром 2−4 нм. Поверхность вирионов гладкая — без углублений и выростов. Плавучая плотность в хлориде цезия составляет 1,38 — 1,45 г./см3. Геном парвовирусов — односпиральная ДНК размером 1,4−1,7×106 Да. Репродукция парвовирусных нуклеиновых кислот происходит в ядре, фабрики сборки вирионов могут располагаться как в ядре, так и в цитоплазме зараженных клеток. Парвовирусы термостабильны, устойчивы к действию липидораствори-телей и кислой среде.

В состав вирусной частицы входят три полипептида — VP1, VP2, VP3 c молекулярными массами 83×103, 65×103 и 60−62×103 Да.

В состав вирионов парвовирусов входят одноцепочечные молекулы ДНК, но в различных вирионах могут присутствовать нити разной полярности — как «+», так и" -«. В относительном составе популяции «-» — цепь может отсутствовать или иметься в количестве не превышающем таковое «+» — цепи. При выделении ДНК одноцепочечные молекулы могут спонтанно гибридизоваться, давая двуспиральные молекулы. ДНК аденонезависимых парвовирусов неинфекционна, но нуклеиновой кислотой аденосателлитных парвовирусов можно трансфецировать клетки, зараженные аденовирусом — помощником, в результате чего образуется полноценное потомство аденосателлита. Парвовирусы для которых совершенно четко установлен вид животного-хозяина могут вызывать переболевание той или иной тяжести у других родственных или не родственных видов, например вирусы мышей и крыс (Н1, Н3, RV, Х14 и МВМ) при введении их хомякам вызывают видимую патологию. Характер ее зависит от возраста зараженного животного: у новорожденных хомяков болезнь протекает молниеносно с уровнем летальности близким к 100%.

Парвовирусы, поражающие один какой-либо вид животных, либо близкие виды, могут иметь серологическое родство, как например, парвовирусы грызунов, обнаруживающие родство в реакциях нейтрализации и иммунофлуоресценции, либо не обладать никаким серологическим родством, как например вирус Алеутской болезни норок и вирус инфекционного энтерита норок. Парвовирусы для которых совершенно четко установлен вид животного-хозяина могут вызывать переболевание той или иной тяжести у других родственных или не родственных видов, например вирусы мышей и крыс (Н1, Н3, RV, Х14 и МВМ) при введении их хомякам вызывают видимую патологию. Характер ее зависит от возраста зараженного животного: у новорожденных хомяков болезнь протекает молниеносно с уровнем летальности близким к 100%.

Парвовирусная болезнь свиней (ПВБС) — контагиозное вирусное заболевание, которое клинически проявляется только у супоросных свиноматок и характеризуется гибелью эмбрионов и плодов, рождением мумифицированных плодов, мертвых и слабых поросят и уменьшением числа поросят в помете.

Аборты у зараженных свиноматок наблюдаются редко и они не характерны для данной болезни. У животных других половозрастных групп заболевание протекает в латентной форме, хотя вирус у них активно размножается во многих тканях и органах. У хряков-производителей парвовирус не нарушает спермиогенез и функции репродуктивных органов.

Источником возбудителя инфекции являются больные и переболевшие свиньи, выделяющие вирус с фекалиями, мочой, носовыми и вагинальными секретами, плацентой и мертворожденными плодами. Здоровые животные, как правило, заражаются пероральным и аэрогенным путями.

С экскретами и секретами вирус выделяется до 2 недель после заражения свиней и в животноводческих помещениях сохраняет инфекционность до 100−135 дней. В распространении парвовируса определенную роль играют хряки, выделяющие вирус со спермой, при этом на качество спермы вирус существенного влияния не оказывает.

Диагноз на наличие в хозяйстве ПВБС ставят по результатам лабораторных исследований. В лабораторию доставляют пробы сывороток крови свиноматок и новорожденных поросят до приема молозива, абортированные плоды и мертворожденных поросят.

Специфические антитела в сыворотке крови определяют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с эритроцитами морской свинки. При обнаружении в испытуемых сыворотках специфических антител в разведении 1:64 и выше реакцию считают положительной. В РТГА можно исследовать не только сыворотку крови, но и транссудат из грудной и брюшной полостей абортированных плодов старше 70-дневного возраста (длиной более 17 см) и мертворожденных поросят. Обнаружение антител к парвовирусу в сыворотке крови новорожденных поросят до приема молозива или в транссудате абортированных плодов и мертворожденных поросят свидетельствует о заражении их в матке, поскольку материнские антитела не проходят через плаценту. Выявление антител в сыворотке крови только свиноматок недостаточно для постановки диагноза на парвовирусную болезнь и говорит лишь о циркуляции вируса в хозяйстве.

Абортированные плоды до 60−65-дневного возраста (длиной менее 15 см) используют для обнаружения парвовирусного антигена в реакции гемагглютинации (РГА). Для этого из внутренних органов плодов готовят 10% суспензию на фосфатно-буферном растворе и исследуют ее в реакции. Плоды старше 70-дневного возраста (длиной более 17 см) непригодны для обнаружения вирусного антигена, поскольку в тканевой жидкости у них содержатся специфические антитела, которые связываются с антигеном и препятствуют его выявлению. В мумифицированных плодах парвовирусный антиген может содержаться в очень большом количестве — в разведении до 1:16 384. В России набор компонентов для диагностики ПВБС в РТГА впервые разработан в 1986 г. и с 1989 г. налажено его производство и применение в ветеринарной практике. Для специфической профилактики ПВБС во многих странах мира с развитым свиноводством используют инактивированные вакцины, которые обладают выраженной иммуногенной активностью и предохраняют свиноматок от заболевания и трансплацентарной передачи вируса плодам. Основную роль в защите против парвовируса свиней играет гуморальный иммунитет. Для изготовления инактивированных вакцин используют штаммы парвовируса свиней, выращенные в перевиваемых культурах клеток свиного происхождения. В нашей стране наличие ПВБС впервые было установлено в 1988 г. путем выделения вируса из плодов абортировавших свиноматок. Были отработаны условия массового культивирования парвовируса свиней в перевиваемой культуре клеток почек поросят, обеспечивающие стабильное накопление вируса в высоких титрах. Разработана инактивированная эмульгированная вакцина против ПВБС, методы ее контроля и технология промышленного производства. Вакцина широко применяется в ветеринарной практике страны с 1987 г. Применение вакцины в хозяйствах, неблагополучных по парвовирусной болезни, показало ее эффективность в профилактике нарушений воспроизводительной функции свиноматок парвовирусной этиологии.