Методы диагностики вирусов гриппа и ОРВИ

Исследования по диагностике гриппа и ОРВИ проводились по нескольким направлениям:

— вирусологический (выделение и идентификация вирусов гриппа на культуре клеток МДСК);

серологический (иммунофлуоресценция, ИФА, РТГА);

полимеразная цепная реакции (ПЦР).

Выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и их идентификация

Метод выделения вирусов гриппа человека и животных, включая высоко патогенные штаммы вирусов гриппа птиц, в клеточных культурах является высоко чувствительным тестом при использовании клинических образцов высокого качества. Его использование позволяет, в первую очередь, значительно повысить эффективность изоляции эпидемических штаммов из клинических материалов (смывы, аспираты, секционный материал), а также расширить число выделяемых возбудителей с составлением более полной картины о природе вирусных популяций, циркулирующих среди людей, что необходимо для более полного понимания закономерностей распространения и эволюции возбудителей, прогнозирования эпидемий, а также быстрого распознавания появления нового пандемического вируса гриппа типа А.

Важным преимуществом метода изоляции перед другими тестами является получение инфекционного вируса, который может быть далее использован для антигенного и генетического анализа, а также выяснения таких важнейших свойств возбудителя, как чувствительность к химиопрепаратам, неспецифическим ингибиторам, тропизм к разным системам хозяина и др. Ряд факторов (трудоемкость, необходимость использования высоко чувствительных клеточных линий, длительность анализа, высокая стоимость) ограничивает использование метода выделения вирусов гриппа в качестве диагностического теста. В прошлые годы для этих целей, как правило, использовали куриные эмбрионы, однако изменение тропизма современных вирусов с резким снижением частоты изоляции в них возбудителей гриппа обусловило необходимость широкого лабораторного применения клеточных культур (рис. 8). Одной из таких линий, которая была рекомендована экспертами ВОЗ, является перевиваемая культура клеток, полученная из почек собаки породы спаниель — MDCK.

Вместе с тем, поскольку кандидаты в вакцинные штаммы должны быть изолированы на куриных эмбрионах, лабораториям, располагающим такими возможностями рекомендуется использовать для выделения вирусов гриппа обе системы. В любом случае исходные клинические материалы необходимо хранить до начала следующего эпидемического сезона принизкой температуре (-70°С) для обеспечения возможностей выделения наиболее перспективных вантигеном отношении штаммов в куриных эмбрионах в специализированных лабораториях научно-исследовательских институтов[14].

Направление выделенных вирусов Все выделенные вирусы гриппа и нетипируемые гемагглютинирующие агенты для последующего изучения их антигенной принадлежности немедленно пересылали авиатранспортом в холодовом режиме в Федеральный центр по гриппу и другим ОРВИ при НИИ гриппа РАМН или в Центр экологии и эпидемиологии гриппа при НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского.

В Центрах проводят восстановление вирусов, детальное изучение антигенных и биологических свойств возбудителей, после чего они депонируются в Музейных коллекциях институтов, а также направляются в Сотрудничающие референс-центры Всемирной организации здравоохранения для изучения особенностей глобального распространения антигенных вариантов вирусов гриппа[35].