Материалы и методы исследования вируса гриппа

Материалы исследования

Выпускная квалификационная (дипломная) работа выполнена на базе вирусологической лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Тульской области». Исследования проводились с сентября 2014 года по февраль 2015 года в период сезонного подъема гриппа и ОРВИ. Мною была изучена литература по структуре вирусов, этиологии современного гриппа, методы лабораторной диагностики острых респираторных и других вирусных инфекций.

Вирусологическая лаборатория имеет право на работу с микроорганизмами 3−4 группы патогенности и поэтому является закрытым режимным подразделением. Мне была предоставлена возможность ознакомиться с методами лабораторной диагностики, проводимыми на базе данной лаборатории, работой оборудования, провести анализ заболеваемости гриппом и ОРВИ населения Тульской области, используя материалы Государственного доклада «О санитарно-эпидемиологической обстановке в Тульской области», а так же данные Национальных Центров по гриппу ВОЗ в России. Результаты проведенных исследований представлены в главе 3.

Получение и доставка клинических материалов Материалом для изоляции вирусов служит отделяемое из глубоких отделов носовой полости, зева, а также секционные ткани легкого, бронхов и мозга (рис. 7).

Рис. 7. Взятие материала из носовой полости для диагностики гриппа (фото Лисицына Д.И.)

Материал отбирают в разгар заболевания (первые 3 дня болезни) в период вспышек гриппоподобных заболеваний в коллективах детей или взрослых, а также от амбулаторных или госпитализированных больных. С наибольшей частотой вирусы выделяются от детей младшего возраста, у которых вирус находится в свободном состоянии (вне иммунных комплексов)[3].

Секционные материалы Фрагменты легкого, бронхов или мозга в день смерти больного помещают в стерильные флаконы и доставляют в холодовом режиме в лабораторию.

Из полученных материалов готовят 10% суспензию, растерев фрагменты ткани со стерильным стеклянным песком в фарфоровой ступке, после чего к суспензии добавляют транспортную среду в соотношении 1: 9, которую после перемешивания и освобождения от осадка отстаиванием (0,5 ч при 4°С) или центрифугирования в течение 10 мин при 1000 об/мин отбирают и используют для последующего заражения клеток.

Исследование крови.

Для определения уровня коллективного гуморального иммунитета применяются серологические реакции такие, как реакция торможения гемагглютинации (РТГА), иммуноферментный анализ (ИФА). Они применяются для определения уровня специфических антител в сыворотках больных ОРВИ с целью ретроспективного подтверждения диагноза[3].