Забор материала для гистологического и бактериологического исследования

Пробы от каждого органа следует брать стерильно, в отдельную банку. Особенное внимание должно быть обращено на недопустимость попадания дезраствора (а при подозрении на холеру и его следов) на инструменты, перчатки и в склянку, куда помещают пробы органов.

Чума. Для постановки бактериологического диагноза у подозрительных на чуму трупов берут увеличенные лимфатических узлы, печень, легкие, селезенку, кишечник, кровь (из сердца или крупных вен), костный мозг из трубчатой кости и грудины. У разложившихся и эксгумированных трупов берут кусок (4−5 см длиной) трубчатой кости вместе с костным мозгом (технически удобнее брать большеберцовую или бедренную кость). При взятии материала из органов выбирают наиболее измененные участки. Кусочки помещают в заранее приготовленные стерильные широкогорлые банки в 100−300 мл. Лучше всего каждый кусочек помещать в отдельную банку. Кусочки легкого и кишечника во всех случаях помещают в отдельные банки. Особенно это важно, если материал берут от загнившего трупа. В жаркое время года при дальности расстояния от места вскрытия до лаборатории кусочки органов рекомендуется помещать в одну из следующих консервирующих жидкостей:

• 1. Жидкость Броке: глицерин — 20 г, вода — 80 г, углекислый кальций — 2 г. Кусочки размерами 1−2 см помещают в банку с 5−10 мл жидкости. В жидкости Броке материал сохраняется несколько дней.
• 2. Консервант Берлина и Башевой: парафиновое масло — 3 г, вазелин — 1 г, ланолин — 1,5 г. Смесь подогревают до 450, хорошо смешивают. Кусочки размерами 2−3 см закладывают в смесь, расплавленную при температуре 35−450С. На кусочек требуется 30−40г консерванта. Материал может храниться несколько месяцев. Для гистологических исследований лучше всего брать кусочки от всех органов, а также кусочки тканей из места введения лекарственных препаратов размерами не более 1 см³. Для полного обеззараживания материала достаточно фиксации в 10−30% формалине или в 700 спирте.

Холера. Для бактериологического исследования во время вскрытия берут три отрезка тонкого кишечника (верхняя, средняя и нижняя части) длиной около 10 см каждый. Кишку берут невскрытой (после наложения двойных лигатур) и помещают в стерильную широкогорлую баку с притертой пробкой.

Желчный пузырь после перевязки пузырного протока извлекают целиком и, не вскрывая, помещают в стерильную широкогорлую банку. Учитывая, что холерный вибрион не стоек, материал для бактериологического исследования необходимо доставить в лабораторию как можно быстрее.

Для сохранения холерного вибриона в испражнениях можно использовать консервант Венкатрамена и Рамакиришана: борную кислоту 12,405 г, хлористый калий 14,919 г растворяют в 800 мл горячей дистиллированной воды, по охлаждении доводят количество раствора дистиллированной водой до 1 литра. Из основного раствора берут 250 мл и смешивают с 133,5мл 0,8% едкого натрия, доводят дистиллированной водой до 1 литра и добавляют 20 г поваренной соли. Фильтруют через бумажный фильтр, разливают по 10 мл в широкогорлые стеклянные баночки и стерилизуют в автоклаве. Стерильный раствор должен иметь рН 8,6−9,0. Консервант может сохраняться несколько месяцев. Содержимое кишечника в количестве 1−3 г смешивают с консервантом. Не рекомендуется брать комочки слизи более 3 г, так как при этом снижается рН, что ведет гибели холерных вибрионов. В качестве консерванта может быть предложен также 2% раствор поваренной соли, который разливают в пробирки по 10 мл, стерилизуют автоклавированием при 1200С. Перед внесением материала в консервант нужно добавить 4−5 капель 0,4% раствора едкого натрия.

Для гистологического исследования лучше брать кусочки от всех органов. Если это не представляется возможным, забор ограничивают кусочками тонкого и толстого кишечника, брыжеечных лимфоузлов, печени, поджелудочной железы и почек.

Натуральная оспа. Существующие методы лабораторной диагностики натуральной оспы разнообразны. Продолжительность вирусологических исследований — до недели, что в значительной мере снижает практическую ценность.

Материал для исследований: содержимое высыпаний на коже и слизистых оболочках (папулы, везикулы, пустулы, корочки и чешуйки), кровь и отделяемое слизистой носоглотки, лимфатические узлы, кусочки печени, селезенки, легких.

Для вирусологических исследований берут кожу с подкожной клетчатки и кусочки слизистой оболочки (полости рта, носоглотки, гортани, верхних дыхательных путей или влагалища) с наиболее выраженными изменениями. Размеры кусочков 7−8 см. Кровь берут во время вскрытия из сердца или крупных сосудов. Отделяемое слизистой носоглотки лучше брать до начала вскрытия с помощью стерильных ватных тампонов, помещенных в стерильную пробирку.

Морфологический метод используют для обнаружения элементарных телец и внутриклеточных включений (телец Пашена). Мазок фиксируют жидкостью Руге (1 мг ледяной уксусной кислоты, 2 мг 40% формальдегида, 100 мг дистиллированной воды) — 1 мин; промывка дистиллированной водой; протравка реактивом (5 г танина, 100 мг дистиллированной воды, 1 мг жид-кой карболовой кислоты) до появления паров. Тщательно промывают водой. Обрабатывают азотнокислым серебром с подогреванием, до получения темно-коричневой окраски. Приготовление раствора азотнокислого серебра: 5 г кристаллического азотнокислого серебра в 100 мг дистиллированной воды; по каплям добавляют 25% раствора аммиака до исчезновения осадка. При окраске серебром разводят дистиллированной водой в 10 раз. Промывка дистиллированной водой. Сушат на воздухе.

При микроскопии (иммерсия) элементарные тельца Пашена имеют вид мелких (200−300 миллимикрон) округлых образований темно-коричневатого или черного цвета, расположенных поодиночке, парами, короткими цепочками или в виде скоплений. Результат считается положительным только при обнаружении характерных телец в массовом количестве.

Тельца Гварниери (цитоплазматические включения) обнаруживаются в клетках зараженной культуры тканей.

При культивирования вируса из кожных высыпаний на куриных эмбрионах положительный результат получается в 90%.

Биологическая проба Пауля ускоряет дифференциальную диагностику натуральной оспы от сходных заболеваний. На роговице кролика делают три насечки, в каждую из них наносят по капле испытуемого материала. При наличии оспы спустя 36−48 часов на месте насечек появляются с мелкие прозрачные узелки, которые становятся белыми при погружении экс-тирпированного глаза в сублимат-алкоголь.Выявление вируса оспы возможно также с помощью люминесцентного микроскопа. Мазки и отпечатки из кожных поражений фиксируют 10 минут в безводном ацетоне, обрабатывают конъюгированным гамма-глобулином (30 мин), затем тщательно промывают и исследуют. При наличии вируса наблюдается яркое свечение клеток и обрывок тканей. Метод позволяет обнаружить вирус спустя 2 часа после начала исследований. Для гистологического исследования берут кусочки всех органов. Посев материала на месте вскрытия трупа производит только бактериолог, владеющий методами диагностики особо опасных инфекции. При отсутствии врача-бактериолога материал для бактериологических и вирусологических исследований направляется патологоанатом в лабораторию, предусмотренную планом противоэпидемических мероприятий.

СПИД. Порядок фиксации материала для гистологического исследования следующий: вырезанные кусочки органов размерами не более 1?1?0,5 см помещают в фиксирующую жидкость, находящуюся в чистой посуде. На дно ее предварительно помещают кусочек ваты (марли). Объем фиксирующей жидкости должен в 7−10 раз превышать объем исследуемого материала. Время фиксации: 1−2 суток и более при комнатной температуре. Материал хранить в специально отведенном месте под замком.

Для патологогистологического исследования в случаях, подозрительных на СПИД, следует брать головной мозг (обязательно из области подкорковых ганглиев и белого вещества полушарий), спинной мозг, легкие (даже при отсутствии макроскопически видимых воспалительных изменений), органы желудочно-кишечного тракта (кусочки из всех отделов кишечника должны быть исследованы микроскопически после тщательной макроскопии), органы иммуногенеза (костный мозг, вилочковая железа, лимфоузлы, селезенка), печень, почки, сердце, при показаниях — сетчатку глаза, кожу, слизистую полость рта, наружных гениталий. Кусочки помещают в обычные фиксаторы (формалин, жидкость Карнуа, 800 спирт и др.).

Во всех случаях прижизненно подтвержденного СПИДа или при подозрении на СПИД, следует направлять кровь из полости сердца на бактериологическое исследование.

При обнаружении в биоптате инфекций и (или) опухолей, характерных для СПИДа у лиц до 60 лет, патологоанатом обязан отразить в своем заключении необходимость обследования больного на антитела к ВИЧ или непосредственно сообщить об этом лечащему врачу. При составлении заключения следует проявлять осторожность и избегать необоснованной излишней диагностики СПИДа, учитывая, что это может вызвать серьезные этические проблемы для родственников умершего и всех лиц, находившихся с ним в контакте.

В патологоанатомическом диагнозе, в качестве основного заболевания указывают: (положительная реакция на антитела ВИЧ в сыворотке крови). Далее перечисляют инфекции (опухоли). В справке о смерти первоначальной причиной смерти указывают СПИД, непосредственной — наиболее тяжелую оппортунистическую инфекцию.