Способы хранения культур микроорганизмов

Способы длительного хранения культур основаны на свойствах микроорганизмов ограничивать или даже прекращать клеточный обмен веществ при изменении внешних условий. Так, при охлаждении процессы жизнедеятельности клеток резко замедляются, а при замораживании и обезвоживании клетки приходят в состояние анабиоза и преданабиоза. Однако такие клетки сохраняют жизнеспособность и при создании нормальных условий полностью восстанавливают присущие им свойства.

Наиболее распространены следующие способы хранения культур.

Хранение в холодильнике. Это самый простой способ, заключающийся в том, что готовую культуру на агаризованной среде в пробирках помещают в холодильник и хранят при температуре + 4 — 4 °C в течение 1 — 2 мес. Для более длительного хранения культуру необходимо пересевать, чтобы сохранить ее физиолого-биохимические свойства. Длительные промежутки между пересевами недопустимы, так как микроорганизмы в процессе хранения потребляют из среды питательные вещества и накапливают продукты обмена, вредно влияющие на их свойства. Кроме того, в процессе хранения среда обезвоживается, что может привести не только к изменению свойств культуры, но и к ее гибели.

Хранение под слоем минерального масла. На твердых средах под слоем стерильного вазелинового масла или парафина можно хранить культуру несколько месяцев. Толщина слоя масла над поверхностью агар-агара должна быть не менее 1 см, чтобы предохранить среду от высыхания. При большей толщине слоя масла может произойти гибель аэробной культуры из-за недостатка кислорода. Культуру заливают стерильным маслом после того, как она достигнет полной физиологической зрелости.

Хранение в сыпучих материалах. Этот способ нашел широкое применение, благодаря простоте и надежности. Заключается он в том, что суспензию микроорганизмов или спор наносят на предварительно простерилизованный сыпучий материал (почву, песок, глину, зерно), высушивают при комнатной температуре и хранят в стеклянной посуде, закрытой ватной пробкой. Чтобы возобновить культуру с сыпучего материала делают смыв на чашки Петри и высевают на питательный агар-агар. Срок хранения культуры в зависимости от вида микроорганизмов может достигать нескольких месяцев.

Замораживание и хранение при температуре ниже — 20 °C.

При таком способе культура сохраняется несколько месяцев, однако следует избегать многократных оттаиваний и замораживаний. Некоторые культуры можно хранить в замороженном состоянии при температурах—165−196°С (температура жидкого азота). Культуру замораживают в 10%-ном водном растворе глицерина и помещают в ампулы, которые запаивают. Ампулы хранят в контейнере с жидким азотом. В этих условиях некоторые микроорганизмы сохраняют все физиолого-био-химические свойства в течение нескольких лет. посевной культивирование микроорганизм почва Сублимационная сушка. В настоящее время сублимационная сушка считается наиболее перспективным способом длительного хранения микроорганизмов. Этот способ отличается сложностью и проводится в несколько этапов. Вначале в культуру микроорганизмов добавляют так называемую защитную среду (сахарозу, бульон и др.), которая предохраняет клетки от инактивации за счет снижения лиофильного взаимодействия воды с клетками, разливают в стерильные ампулы и закрывают стерильными ватными тампонами.. Затем проводят быстрое замораживание при температуре —35-;—78 °С. Ампулы с замороженной культурой переносят в вакуум-сушильный аппарат и подвергают сублимационной (из твердой фазы в газообразную) сушке при комнатной температуре и остаточном давлении 1 —10 кПа в течение 25—30 ч.

Сублимационно высушенные культуры могут сохраняться 5—6 лет без потери физиологических особенностей и способности к быстрому росту.

Этот способ называют также хранением культур в лиофилизованном состоянии.

В заводских условиях чаще всего используют способы хранения культур в холодильнике или под слоем вазелинового масла.