Лабораторная работа № 4. Получение элективных накопительных культур сенной и картофельной палочек (Bac. 
subtilis и Bac. 
Mesentericus)

Цель работы? изучить получение накопительных культур Bac. subtilis и Bac. Mesentericus.

Материалы и оборудование: клубни картофеля, сено, ножи, ножницы, чашки Петри, конические колбы, мел, вата? электрические плитки, термостат, дистиллированная вода, сушильный шкаф, микроскоп, иммерсионное масло.

Ход работы:

Элективными культурами называют такие, в которых создаются условия для роста микроорганизмов одного вида и подавляется рост других видов. В данной работе кипячение является фактором, убивающим неспороносные формы, вследствие чего Bac. subtilis и Bac. Mesentericus, имеющие устойчивые споры, получают преимущественные условия для размножения. Этому способствует и специфика используемых сред.

Получение культуры сенной палочки.

Сено из разнотравья мелко нарезают ножницами и помещают в конические колбы, заливают водой, добавляют щепотку мела и кипятят в течение 15 мин. Колбу закрывают ватной пробкой и помещают в термостат при температуре 25 °C на 2−3 суток. На поверхности сенного отвара образуется сероватая пленка, состоящая из особей грамотрицательной сенной палочки. В сене всегда присутствуют споры Bac. subtilis, так как они не гибнут при кипячении и дают рост вегетативным формам бактерии. Другие микроорганизмы при этом вырастают редко и в не больших количествах [3].

Получение культуры картофельной палочки.

Промывают клубень картофеля и, не снимая кожуры, нарезают ломтики. Их поверхность натирают мелом и кладут в чашки Петри. Выдерживают чашки с ломтиками картофеля 10 мин в сушильном шкафу при 100 °C. После этого чашки помещают в термостат при 27−30°С на 2−3суток. Оптимальная температура для развития Bac. Mesentericus несколько выше, чем для Bac. subtilis, в связи с этим культуры ставят в разные термостаты.

На поверхности ломтиков картофеля образуется плотная морщинистая пленка, состоящая из особей картофельной палочки. Она движется при помощи жгутиков, размеры клеток 4−5 мкм, грамположительна. Накопительные культуры микроорганизмов, разрушающих целлюлозу.

Цель работы: Освоить метод получения накопительнойкультуры микроорганизмов, разрушающих целлюлозу.

Оборудование: микроскоп, предметные стекла, покровные стекла, стерильная фитровальная бумага, стерильные стеклянные палочки, бактериологические петли, спиртовка, пинцет, скальпель, стерильные чашки Петри, компоненты для среды Гетчинсона или готовая среда, почва [1].

Ход работы:

• 1. Приготовление среды Гетчинсона, выглядещего следующим образом, г/л: 0,1; NaCl — 0,1; CaCl2 — 0,1; TeCl3 — 0,1; MgSO4 .7Н2О — 0,3; NaNO3 — 2,5; агар — агар — 20 г (2%).
• 2. Среду разливаем по чашкам Петри и на всю поверхность раскладываем стерильную фильтровальную бумагу, соответствующую размеру все чашки в форме круга.
• 3. Почву разложили сверху фильтра, путем применения стерильной палочки параллельными рядами на расстоянии 1 см друг от друга.
• 4. Далее чашку Петри разместили в термостате при температуре 370С и проинкубировали на протяжении 10 суток.
• 5. Затем после образования целлюлозоразлагающих колоний бактерий, при этом бумага становится прозрачной, появляется слизь, желтые, зеленые, оранжевые и коричневые пятна. И был произведен подсчет коллоний целлюлозоразлагающих бактерий.
• 6. На завершающем этапе была сделана фотография, описана морфология целлюлозоразрушающих бактерий.

Результат работы:

По результатам исследования получение накопительной сенной палочки было произведено в соответствие с предписаниями и в чашки Петри была выращена именно сенная палочка. На рисунке 7 представлен мазок, полученный из образца взятого с поверхности сенного отвара (пленка).

Рис. 7 — Микрофотография сенной палочки.

Во второй этап проведения лабораторной работы входило определение получения накопительной картофельной палочки. Работа была выполнена в полном объеме и результат был получен как в методическом указании (рисунок 8).

Рис. 8. — Микрофотография картофельной палочки.

Рис. 9. — Микрофотография целлюлозоразрушающая палочка

На поверхности картофельных ломтиков после прошествии времени выросла пленка с движущимися грамположительными картофельными палочками.

При изготовления препарата для изучения целлюлозоразрушающих бактерий был поставлен опыт в соответствие с изложенной методикой и в результате на поверхности на бумаге в чашке Петри была получена целлюлозоразрушающая палочка.