Позиционирование нестероидных противовосполительных средств

Опыты по изучению специфической активности проводили на 18 беспородных лабораторных крысах массой 165−193 г ной от шерсти.

К очищенной от шерсти коже размером 2×2 см в течение 10 минут прикладывали стеклянный цилиндр, внутри которой находилась кипящая вода (100°С±1,5°С). Через 60 минут на месте прикладывания стеклянного цилиндра появилась ожоговая рана с явными признаками воспаления: отек, покраснение, местные боли и повышение температуры. Через сутки эти признаки воспаления стали еще ярче и выраженнее. Затем животных разделили на 3 группы по 6 особей в каждой.

Первая группа животных — контрольная, у которых поверхностные ожоговые язвы обрабатывали вазелином 1 раз в сутки в дозе 0,25 г в течение 3-х дней.

Вторая и третья группа — опытные, которым поверхностные ожоговые язвы обрабатывали 2,5% мазью мелоксикама и 10% мазью индометацина 1 раз в день в дозе 0,25 г, соответственно, в течение 3-х дней.

РЕЗ УЛЬ ТА ТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Результаты изучения фармакологической активности таблеток «Мелоксикам» приведены в таблице и наглядно отображены на рис. 3 и 4. Опыты показали, что изучаемые таблетированные лекарственные средства в дозе 25мг/кг и 50 мг/кг оказывают выраженное противовоспалительное действие при формалиновом артрите-воспалении (таблица).

Рисунок 3. Результаты изучения противовоспалительного эффекта лекарственных средств «Мелбек» и «Мелоксикам» через 4 часа после введения формалина

Рисунок 4. Результаты изучения противовоспалительного эффекта лекарственных средств «Мелбек» и «Мелоксикам» через 24 часа после введения формалина Согласно методическим рекомендациям [9] измерения прироста объема лапок лабораторных крыс проводили до начала опыта и в момент максимального развития отека: в данном случае через 4 часа после введения формалина. Так, если у крыс контрольной группы, которым была вве-дена вода очищенная, средний прирост объема лапок по отношению к исходному уровню на высоте формалинового воспа-ления составлял 0,65 мл, что приняли за 100%, то в опытных группах под влиянием исследуемых средств в дозе 25мг/кг и 50 мг/кг этот показатель равнялся 35,38%, 53,85% и 36,92% и 52,31%, соответственно. Данные, полученные после 6-ти часов проведения эксперимента, были схожи.

С целью выявления продолжительности противовоспалительного эффекта испытуемых средств, объем лапок крыс измеряли и через 24 часа после введения формалина. При этом определяемые показатели равнялись в контрольной группе 92,3%, а в опытных группах — 29,53%, 46,80%, 30,11% и 46,59%, соответственно.

При проведении исследований по определению токсичности изучаемой мазевой лекарственной формы мелоксикама было выявлено, что ЛС не вызывало отрицательного влияния на кожный покров в виде эритемы, шелушения, отеков и др. на протяжении всего периода наблюдения. Также не было отмечено случаев гибели животных.

Следовательно, изучаемая мазь мелоксикама при однократном втирании оказалась нетоксичной и не обладала местно-раздражающим действием.

Изучение специфической активности исследуемой мази показало, что признаки заживления экспериментальной язвы в опытной группе животных проявились уже на 4-ый день лечения, а у контрольных животных — только на 6−7 сутки проведения опыта.

Полное отторжение сухого язвенного струпа у животных опытных групп, у которых использовали исследуемую мазь мелоксикама и мазь индометацина, произошло на 7−8 день лечения, по ходу отторжения наблюдалась активная краевая эпигелизация. Данный факт указывает на усиление регенеративных процессов при лечении как мазью индометацина, так и изучаемой мазью мелоксикама. Раны под струпом были покрыты ярко-красными грануляциями.

В то же время в ранах животных контрольной группы частичное отторжение струпа наступило лишь на 9−11 день лечения. Наряду с отторжением струпа, наблюдалось высушивание раны.

2.

2. Изучение мази мелоксикама

Мелоксикам — селективный ингибитор ЦОГ-2, что подтверждено исследованиями in vitro и in vivo. Данные более чем 230 клинических исследований во всем мире у больных ревматоидным артритом, остеоартрозом свидетельствуют, что по эффективности данное лекарственное средство (ЛС) не уступает другим, ставшим уже традиционными, нестероидным противовоспалительным ЛС, при этом наблюдался меньший процент возникновения побочных реакций [1−4].

В настоящее время разработаны и внедрены в производство таблетированная, суппозиториальная и инъекционная лекарственные формы мелоксикама. Были проведены исследования по подбору состава, разработке технологии и изучению структурно-механических характеристик мази мелоксикама [5].

Целью очередных исследований явилось дальнейшее изучение разработанной мази с целью ее внедрения в клиническую практику.

Действующим веществом разработанной мазевой лекарственной формы явился мелоксикам, а в качестве вспомогательных веществ использовали диметилсульфоксид и эмульсионную основу вода/вазелин.

Определение количественного содержания мелоксикама в разработанной мази: исследования проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. При этом использовали следующую методику: 0,75 г (точная навеска) мази мелоксикама помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл метанола, 2 мл 0,2 моль/л раствора натрия гидроксида и растворяли в ультразвуковой ванне в течение 10 мин, доводили объем раствора водой до метки, перемешивали и фильтровали через фильтр «Синяя лента», отбрасывая первые 10−15 мл фильтрата.

4 мл полученного фильтрата помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объем раствора смесью метанол/вода (1:1) до метки, перемешивали и фильтровали через фильтр типа «Миллипор» с величиной пор 0,45 мкм, отбрасывая первые 10−15 мл фильтрата (0,015 мг/мл).

Попеременно хроматографировали по 10 мкл испытуемого раствора и раствора рабочего стандартного образца (РСО) мелоксикама на высокоэффективном жидкостном хроматографе с УФ-детектором на колонке Thermo Hypersil-Keystone размером 150×4,6 мм, заполненной сорбенхом Hypersil ODS С-18 с размером частиц 5,0 мкм, получая по 5 хроматограмм для каждого из растворов, в следующих условиях:

— подвижная фаза — смесь метанол / 0,1% раствор ацетата аммония с рН 9,1 в соотношении 42:58, соответственно, дегазированная любым удобным способом;

— скорость потока — 1 мл/мин;

— детектирование — 362 нм;

— температура колонки — комнатная.

Содержание мелоксикама (X, мг) в 1 г мази вычисляли по формуле:

где Sо — среднее значение площадей пиков РСО мелоксикама, вычисленное из хроматограмм стандартного раствора;

S1 — среднее значение площадей пиков, вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора;

астнавеска РСО мелоксикама, в мг;

аисп — навеска мази мелоксикама, в мг;

Р — фактическое содержание мелоксикама в стандартном образце, в %.

Содержание мелоксикама в 1 г мази должно быть от 22,5 до 27,5 мг.

Результаты считаются достоверными, если выполняются следующие требования:

• эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику на хроматограммах раствора РСО мелоксикама, должна быть не менее 2000 теоретических тарелок;

• относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади основного пика, на хроматограммах раствора РСО мелоксикама должно быть не более 2%.

Приготовление раствора РСО мелоксикама. Около 0,075 г (точная навеска) РСО мелоксикама помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл метанола, 2 мл 0,2 моль/л раствора натрия гидроксида и растворяли в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Доводили раствор водой до метки и перемешивали.

1 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объем раствора смесью метанол/вода (1:1) до метки и перемешивали (0,015 мг/мл).

Биофармацевтическая оценка разработанной мази мелоксикама по кинетике высвобождения действующего вещества была проведена методом равновесного диализа по Л. Крувчинскому [6].

В качестве полупроницаемой мембраны использовали целлофан толщиной 50 мкм. Диализной средой в объеме 50 мл служил фосфатный буферный раствор с рН 7,5. Исследования проводили в условиях термостатирования 37 °C ±2°С.

Навеску мазей (0,5г) с помощью шпателя наносили равномерным слоем на поверхность выбранной мембраны, которую далее закрепляли неподвижно на конце диализной трубки. В химический стакан, содержащий соответствующую среду, укрепляли диализную трубку, погружая ее на 2 мм в среду. Через каждые 1, 3, 5, 7 и 9 часов производили отбор проб, после каждого отбора объем диализной среды восполняли. Количество мелоксикама, перешедшее в диализат, определяли вышеприведенным методом.

Изучение стабильности разработанной мази проводили в естественных условиях, а также методом «ускоренного старения» при температуре 30 °C. При этом образцы анализируемой мази хранили в тубах алюминиевых для медицинских мазей по ТУ У 28.7−25 463 020−006−2003 с бушонами и в банках БМС по Т8Ь 64−17 490 735−01:2001 с крышками натягиваемыми по ОСТ 64−2-87−81.

Критериями качества лекарственных форм (ЛФ) служили следующие показатели: органолептические свойства, однородность, значение рН водных растворов, устойчивость при термостатировании (40±2°С) в течение 6-ти часов, стабильность при центрифугировании 1500 об/мин в течение 5-ти мин и количественное содержание действующих веществ.

Результаты количественного определения мелоксикама в анализируемой мази и их метрологическая характеристика приведены в таблице 8.

Таблица 8

Результаты количественного определения мелоксикама в мази Навеска, г Найденное количество мелоксикама Метрологические характеристики г % 0,7496 0,2 409 96,36 Хср=97,80

f=4 Т (95%, 4)=2,78

S2=2,77

S=1,66

Sх=0,74

еср=2,11% 0,7516 0,2 443 97,72 0,7490 0,2 447 97,88 0,7481 0,2 513 100,52 0,7513 0,2 414 96,54

Как видно из приведенных данных, средняя ошибка эксперимента составляет 2,11%, что подтверждают специфичность, точность и чувствительность использованной методики, а также соответствие разработанной мази предъявляемым требованиям к данному показателю. Кинетика высвобождения мелоксикама из мази наглядно отражена на рисунке 5.

Рисунок 5. Степень высвобождения действующего вещества из мази мелоксикама Согласно полученным результатам, степень высвобождения мелоксикама из анализируемой мази за период времени от 1 до 9-ти часов составила, соответственно, от 12,8 до 56,4%. Результаты исследований по изучению стабильности разработанной мази свидетельствуют о том, что при использовании обоих методов хранения и вышеуказанных контейнеров анализируемая ЛФ сохраняла постоянство качественных и количественных показателей в течение 1,5 лет (срок наблюдения).

1. Модифицирована методика количественного определения мелоксикама для изучаемой мазевой ЛФ. Доказана специфичность, точность и чувствительность использованной методики.

2. Биофармацевтические исследования мази проведены методом равновесного диализа по Л. Крувчинскому: при этом за 9 часов проведения эксперимента в диализат перешло 56,4% мелоксикама.

3. Изучение стабильности анализируемой мази мелоксикама свидетельствует о постоянстве качественных и количественных характеристик в течение 1,5 лет (срок наблюдения).

Заключение

Группа нестероидных противовоспалительных средств является одной из наиболее широко назначаемых групп лекарственных средств во всем мире. В настоящее время имеется большой арсенал НПВС (более 25 наименований), а в практической медицине для лечения используется более 1000 созданных на их основе лекарственных средств. Однако со второй половины прошлого столетия участились сообщения о развитии побочных эффектов при систематическом использовании НПВС.

В процессе многочисленных клинических исследований было показано, что селективные ингибиторы ЦОГ-2 (целекоксиб, рофекоксиб, мелоксикам, нимесулид, этодолак) столь же эффективны, как и «неселективные» НПВС, но реже вызывают побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта.

Являясь одним из селективных ингибиторов ЦОГ-2, мелоксикам по эффективности не уступает традиционным НПВС, однако, по опубликованным данным, данное лекарственное средство реже вызывает побочные эффекты.

На основании результатов изучения фармакологической активности сравниваемых таолетированных лекарственных форм мелоксикама можно заключить, что разработанные таблетки «Мелоксиам» в изучаемых дозах проявляют выраженное противовоспалительное действие и в этом отношении они не уступают известному лекарственному средству «Мелбек».

Разработанная мазь мелоксикама в ходе экспериментов не проявила токсичных свойств. Изучением специфической эффективности доказано выраженное противовоспалительное и ранозаживляющее действие 2,5% мази мелоксикама. Согласно полученным данным, изучаемая мазь мелоксикама не уступает давно известному в медицине лекарственному средству — мази индометацина.

Дидковский Н.А., Малашенкова И. К., Тарасова А. Н. Ацетилсалициловая кислота и синдром Рея// Русский медицинский журнал. — 2004. -Том 12, № 4 (204). — С. 222−224.

Исаков В. А. Гастропатия, связанная с приемом нестероидных противовоспалительных препаратов: патогенез, лечение и профилактика// Клиническая фармакология и терапия. — 2005. — № 2. -С. 34−38.

Клинические рекомендации. Ревматология// Под ред. Е. Л. Насонова. -М.: ГЭОТАР — Медиа, 2005. — 288 с.

Насонов Е. Л. Применение нестероидных противовоспалительных препаратов: терапевтические перспективы// Русский медицинский журнал. — 2002. -Т. 10, № 4(148).-С. 206−212.

Насонов Е. Л. Применение нестероидных противовоспалительных препаратов и ингибиторов циклооксигена-зы-2 в начале XXI века.// Русский медицинский журнал.

Том 11, № 7 (179). -2003г.-С. 375−378.

Насонов Е. Л. Нестероидные противовоспалительные средства. (Перспективы применения в медицине). — М., 2000;143с.

Рациональная фармакотерапия ревматических заболеваний: Рук. для практикующих врачей /В.А.Насонова, Е. Л. Насонова, Р. Т. Алекперов, Л. И. Алексеева и др. — М.: Литтерра, 2003. — С.22−33.

Страчунский Л.С., Козлов С. Н. Нестероидные противовоспалительные средства. — Смоленск. — 1997. — 70 с.

Чичасова Н. В. Симптоматическая терапия заболеваний суставов — новые возможности эффективного и безопасного лечения с применением раптена рапида// Фарматека. — 2004. № 2 (81). — С. 48−51.