Токсичность папаверина

Константа скорости элиминации.

Время полуэлиминации В понятие элиминации включаются все процессы, приводящие к снижению содержания чужеродного вещества в организме.

Для количественной характеристики элиминации прибегают к проведению основного (базисного) токсикокинетического эксперимента.

Мерой скорости элиминации вещества является величина угла наклона касательной к кривой, проведенной в интересующей исследователя точке, или величина дифференциала. Скорость элиминации уменьшается с течением времени, поскольку уменьшается величина C. Однако неизменной характеристикой процесса остается коэффициент пропорциональности КЕ.

Представление зависимости концентрации вещества в крови от времени в полулогарифмических координатах позволяет расширить информацию об особенностях токсикокинетики вещества, введенного внутривенно.

Начальная концентрация вещества СО в плазме крови не доступна для непосредственного измерения, поскольку необходимо время перемешивания ксенобиотика в крови (этап конвекции).

Однако как условная величина СО имеет токсикокинетическое значение. Она может быть определена путем экстраполяции прямой зависимости lnC от времени к моменту t = 0. Значение С0 и величина введенной дозы Д позволяют рассчитать объем распределения вещества Vd до того, как начался процесс элиминации ксенобиотика.

Для разработки высокоэффективных средств лечения и профилактики острых и хронических отравлений ксенобиотиками различного химического строения важное значение имеют токсикокинетические исследования, направленные прежде всего на оценку содержания токсических веществ в различных биосредах организма. Это в полной мере относится и к динитрофенольным пестицидам, среди которых особую опасность в плане развития острых смертельных отравлений представляет динитроортокрезол (ДНОК).

В литературе описан метод количественного определения ДНОК только в крови. Однако для более полного суждения о судьбе ксенобиотика в организме необходимо располагать сведениями о характере распределения яда в различных органах и тканях. В связи с этим, целью настоящей работы была разработка высокочувствительного метода количественной индикации ДНОК в различных органах и тканях.

Существующий метод идентификации ДНОК в крови основан на его экстракции из плазмы крови метилэтилкетоном с последующим определением концентрации фотоэлектрокалориметрическим методом, однако он не пригоден для индикации соединения в органах и тканях. Это, может быть объяснено связыванием ДНОК (как биполярного соединения) с высокомолекулярными биомолекулами и прежде всего с тканевыми белками, что является главным препятствием для проведения необходимой экстракции вещества метилэтилкетоном.

С целью расщепления высокомолекулярных белков и липопротеидов, составляющих основу клеточных и субклеточных мембран органов и тканей, нами был использован фармакопейный препарат из группы протеолитических ферментов — химопсин, который содержит комбинацию альфа-химотрипсина и трипсина.

Трипсин, как известно, весьма активно гидролизует как низко-, так и высокомолекулярные белки. Он особенно легко расщепляет связи, в образовании которых участвуют карбоксильные группы аргинина и лизина.

Если трипсин расщепляет только 1/3 всех пептидных связей в белковой молекуле, то химотрипсин гидролизует также и пептоны с образованием относительно низкомолекулярных пептидов, при этом химотрипсин расщепляет преимущественно те пептидные связи, на которые трипсин не действует.

Химотрипсин ускоряет гидролиз связей, образованных остатками триптофана, тирозина и фенилаланина, он обладает более широкой (по сравнению с трипсином) субстратной специфичностью, катализируя гидролиз не только пептидов, но и эфиров, гидроксаматов, амидов и других ацилпроизводных.

Предлагаемый нами метод основан на экстракции ДНОК метилэтилкетоном из органов и тканей, предварительно обработанных протеолитическим ферментом.

Ход количественного определения ДНОК в органах и тканях:

Навеска анализируемой биосреды массой 0,5 г подвергается гомогенизации с использованием кварцевого песка. К полученному гомогенату добавляют 1 мл фосфатного буфера с рН 7,6−7,8 (при данных значениях рН реализуется наиболее высокая активность протеолитических ферментов), 0,1 мл 1% раствора химопсина; интенсивно встряхивают в течение 3 мин, затем инкубируют в термостате при температуре 37±0,5 °С в течение 8−12 ч, после чего добавляют 1 мл метилэтилкетона (х. ч.).

Для предупреждения испарения метилэтилкетона пробирки закрывают притертыми пробками, встряхивают на протяжении 5−8 мин. Затем пробы центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5−6 мин.

Надосадочную жидкость (раствор ДНОК в метилэтилкетоне) переносят в кювету толщиной 0,8 мм и спектрофотометрируют при длине волны 440 нм.

Концентрацию ДНОК (мг/мл) определяют по калибровочному графику, который строится на результатах спектрофотометрирования различных концентраций ДНОК с использованием общепринятых приемов. Затем концентрацию ксенобиотика © в мг/г вычисляют по формуле:

C =C1•1 мл / 0,5 г, где С1 — концентрация ДНОК в мг/мл; 1 мл — количество метилэтилкетона, применяемого для экстракции ДНОК в одной пробе; 0,5 г — масса исследуемого биоматериала.

Чувствительность разработанного метода составляет 3,85•10−3 мг/г. Экспериментальная апробация разработанного нами метода проведена в лаборатории кафедры фармакологии ЛГМУ на модели острой интоксикации, развивающейся у белых нелинейных крыс обоего пола массой 170−220 г при однократном пероральном введении 1% раствора аммонийной соли ДНОК в дозе 40 мг/кг (LD50).

Контролем служила группа интактных животных, которым вводили аналогичный объем питьевой воды. Содержание ДНОК определяли через 6 ч после введения яда в следующих органах: почки, сердце, легкие, печень, мышечная ткань.

Заключение

Метаболизм ксенобиотиков происходит в любой клетке и реализуется обычно в две фазы:

образование или освобождение функциональных групп, конъюгация этих групп с другими группами или молекулами.

В первой фазе наибольшую роль играет система цитохрома Р-450 (микросомальный метаболизм), для которой характерно многообразие реализуемых реакций.

Однако существуют и внемикросомальные реакции первой фазы. Во второй фазе наиболее важны реакции конъюгации, осуществляемые различными трансферазами. Обе фазы имеют свои достоинства и недостатки; их совместное функционирование особенно эффективно и в большинстве случаев приводит к превращению многих тысяч ксенобиотиков в более гидрофильные и менее токсичные метаболиты.

Процессы связывания и выведения также защищают от ксенобиотиков. В результате устойчивость организма к химическому загрязнению среды значительно возрастает. Все основные системы обезвреживания ксенобиотиков индуцибельны, что имеет важное значение в биологии и медицине.

Наука о воздействии ксенобиотиков на организм человека прошла многочисленные этапы. Важнейший из них — теоретическое обоснование вероятностной связи между опасностью химических веществ для человека и данными на лабораторных моделях.

Активные поиски количественных критериев, отражающих возможную опасность химических веществ для здоровья человека, начинались со второй половины 19-го столетия. С этой целью использовали материалы эпидемиологических исследований, а также данные о случайных и преднамеренных отравлениях, опыты на добровольцах.

Параллельно начинаются широкие исследования выявления действия химических веществ на лабораторных моделях. Показано, что в определенной мере параметры токсикометрии, полученные в экспериментах на лабораторных животных, позволяют судить о токсичности веществ для человека.

При этом токсикологи заимствуют методы смежных наук — физиологические, биохимические, гистохимические, химические, статистические, патоморфологические, математические, а также тесты, характеризующие специфические эффекты — гонадотоксичность, эмбриотоксичность, мутагенность, бластомогенность, аллергенность, репродуктивную токсичность и др. Это позволило принять для оценки опасности ксенобиотиков для человека ряд параметров, полученных на лабораторных моделях.

По мере роста знаний становится очевидным, что наряду с исследованием токсикокинетики, токсикодинамики, необходимо изучить поведение заданных веществ в системе ксенобиотик — окружающая среда — человек.

Список использованной литературы Куценко С. А., Основы Токсикологии, Санкт-Петербург, 2002, 569стр.

Кулинский В.И. // СОЖ, 1999, No 1, с. 8−12.

Лоуренс Д.Р., Бенитт П. Н. Клиническая фармакология. М.: Медицина, 1993. Т. 1. С. 185−253.

Ляхович В.В., Цырлов И. Б. Индукция ферментов метаболизма ксенобиотиков. Новосибирск: Наука, 1981. 240 с.

Машковский М. Д. Лекарственные средства, Пособие по фармокопии, Часть 1, Вильнюс, 1993, 542стр.

Отто М. Современные методы аналитической химии; изд-во Техносфера: М.: 2006 — 416стр.

Парк Д. Б. Биохимия чужеродных соединений. М.: Медицина, 1973. 288 с.

Плетнёва Т. В, Токсикологическая химия, Изд-во: М.: 2005, 512стр.

Фланаган Р.Дж. и др Основы аналитической токсикологии /. — Женева: ВОЗ; М.: Медицина, 1997. — 363стр.

Харитонов Ю. Я Аналитическая химия Количественный анализ. Физико-химические (инструментальные) методы анализа Том2. Учебник для вузов. 3-е изд., испр.. Изд-во: Высш. шк., М.: 2005 — 559стр.

Лоуренс Д.Р., Бенитт П. Н. Клиническая фармакология. М.: Медицина, 1993. Т. 1. С. 185−253.

Лоуренс Д.Р., Бенитт П. Н. Клиническая фармакология. М.: Медицина, 1993. Т. 1. С. 185−253.

С. А. Куценко Основы Токсикологии, Санкт-Петербург, 2002

www.medline.ru

www.medline.ru

С. А. Куценко Основы Токсикологии, Санкт-Петербург, 2002

www.medline.ru

С. А. Куценко Основы Токсикологии, Санкт-Петербург, 2002

www.medline.ru

www.medline.ru

www.medline.ru

Кулинский В.И. // СОЖ, 1999, No 1, с. 8−12.

www.medline.ru

Кулинский В.И. // СОЖ, 1999, No 1, с. 8−12.

www.medline.ru

Кулинский В.И. // СОЖ, 1999, No 1, с. 8−12.

Кулинский В.И. // СОЖ, 1999, No 1, с. 8−12.

Ляхович В.В., Цырлов И. Б. Индукция ферментов метаболизма ксенобиотиков. Новосибирск: Наука, 1981.

Кулинский В.И. // СОЖ, 1999, No 1, с. 8−12.

www.medline.ru

Ляхович В.В., Цырлов И. Б. Индукция ферментов метаболизма ксенобиотиков. Новосибирск: Наука, 1981.

www.medline.ru

www.medline.ru

www.medline.ru

www.medline.ru

Кулинский В.И. // СОЖ, 1999, No 1, с. 8−12

Куценко С. А., Основы Токсикологии, Санкт-Петербург, 2002, 569стр.