Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Рекомбинантные антигены в развитии иммуноферментного анализа для диагностики сифилиса

Диссертация: Рекомбинантные антигены в развитии иммуноферментного анализа для диагностики сифилиса
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

При выявлении сифилиса определяющую роль играет лабораторная диагностика. С 1985 г. практически не изменялся как комплекс стандартных серологических реакций (КСР), применяемый в медицинских учреждениях нашей страны, так и используемые в качестве отборочных тестов реакция микропреципитации и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). КСР включает реакцию связывания комплемента с кардиолипиновым… Читать ещё >

Рекомбинантные антигены в развитии иммуноферментного анализа для диагностики сифилиса (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • Список используемых сокращений

Глава 1. Обзор литературы. Сифилис: характеристика инфекции и проблемы ее диагностики.

1.1. Этиология сифилиса

1.2. Патогенез, патанатомия и клинические формы заболевания.

1.3. Лабораторная диагностика сифилиса

1.3.1. Серологические методы диагностики сифилиса с использованием неспецифического антигена.

1.3.2. Серологические методы диагностики сифилиса с использованием специфических антигенов.

1.3.3. Рекомбинантные белки Treponema pallidum в диагностике сифилиса.

Антигенный состав Treponema pallidum.

В России после продолжительного периода относительно низкой и стабильной заболеваемости сифилисом отмечается устойчивая тенденция ее роста с 4,3 в 1989 году до 277,3 в 1997 году (заболеваемость на 100 тыс. населения). Несмотря на некоторое снижение в 1998 заболеваемости сифилисом, ее уровень по-прежнему остается высоким и составляет 155,6. Вследствие увеличения в 1997 году числа выявленных беременных женщин, больных сифилисом, в 10 раз по сравнению с 1993 годом значительно чаще стали регистрироваться случаи врожденного сифилиса. Показатель числа случаев врожденного сифилиса на 10 000 родившихся возрос с 0,3 в 1993 году до 5,6 в 1997 году [40]. Вызывает большую тревогу то, что этот подъем заболеваемости имеет некоторые признаки эпидемического характера: подавляющее преобладание в структуре заболеваемости заразных форм сифилиса (98%) — высокий процент среди заразных форм первичного и вторичного свежего сифилиса (60%) — снижение соотношения вторичных рецидивных и свежих форм — 1:1,6 в 1990 г., 1:2,2 — в 1994 г.- резкое увеличение числа больных сифилисом детей в возрасте до 14 лет, включая врожденный сифилис: в 1990 г. — 38 (до 14 лет) и 10 (врожденный), в 1997 г. — 2703 (до 14 лет) и 513 (врожденный) [1, 40]- выраженные различия уровня заболеваемости в отдельных регионах страны как друг от друга, так и от среднего показателя по России [1]. Наиболее значимыми причинами такого высокого уровня заболеваемости сифилисом являются изменения в социальной сфере и экономические факторы: военные, гражданские и национальные конфликты, падение уровня жизни населения, проституция и т. д. В сложившейся ситуации преодоление социального и экономического кризиса имеет большое значение, но при этом значительную роль играет и совершенствование современных методов диагностики заболевания, которые бы позволили обследовать в короткие сроки значительные группы населения с целью выявления сифилиса и проведения системы лечебных и профилактических мероприятий.

При выявлении сифилиса определяющую роль играет лабораторная диагностика. С 1985 г. практически не изменялся как комплекс стандартных серологических реакций (КСР), применяемый в медицинских учреждениях нашей страны [35], так и используемые в качестве отборочных тестов реакция микропреципитации и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). КСР включает реакцию связывания комплемента с кардиолипиновым и трепонемным антигенами (РСК), реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) [34, 75]. Следует подчеркнуть, что пока ни один из этих тестов не является идеальным диагностическим методом и не может удовлетворить полностью практическую медицину. Одни из них сложны при постановке и являются дорогостоящими, другие достаточно часто дают ложноположительные результаты [13, 14, 27].

Так, реакция микропреципитации, которая применяется в основном при массовых обследованиях, является быстрой, простой в исполнении, но может давать ложноположительные, а в отдельных случаях и отрицательные результаты при активных формах сифилиса [27]. Ложноположительные ответы могут иметь место при постановке РСК с кардиолипиновым антигеном (реакция Вассермана) в случае болезней печени, желудка, желез внутренней секреции, а в РСК с трепонемным антигеном — при системной красной волчанке, болезни Лайма [22, 71]. В пожилом возрасте стандартные серологические реакции на сифилис могут быть ложнопозитивными у 60% лиц. При беременности ложнопозитивные реакции составляют 2% [25].

Реакции РИФ и РИБТ, несмотря на свою специфичность, являются сложными в постановке и дорогостоящими, поэтому они применяются в основном при диагностике латентного сифилиса и верификации ложноположительных результатов после скрининговых обследований [27].

Недостатки этих классических методов, а также успехи научно-технических разработок заставляют вводить в практику новые методы диагностики, более удобные в постановке, позволяющие обследовать в короткие сроки большое количество людей и в то же время обладающие достаточной чувствительностью и специфичностью. Одним из таких перспективных методов серодиагностики является иммуноферментный анализ (ИФА). В конце 70-х годов в работах зарубежных авторов появляются сообщения о возможности применения ИФА для определения антител к Treponema pallidum [34, 74]. В ряде работ в последующие годы содержатся данные по использованию рекомбинантных антигенов Treponema pallidum для выявления сифилиса [87,91,106].

В России кроме обязательного комплекса серологических реакций в некоторых лабораториях в последние десять лет применяется ИФА с использованием антигена из непатогенных и «культуральных» трепонем [34], позволяющего определить антитела лишь к группоспецифическим антигенам спирохет. Для определения антител к видоспецифическим антигенам Treponema pallidum необходимо применять в качестве антигена патогенную трепонему — Treponema pallidum. Однако, при ее культивировании возникает ряд серьезных трудностей: необходимость пассирования трепонемы на животных (кроликах), вероятность заражения персонала, сложность стандартизации антигена, его дороговизна. Перечисленные выше недостатки ставят вопрос о разработке новых методов получения антигена. Одним из наиболее перспективных путей совершенствования диагностических тест-систем является использование в качестве антитело-связывающего субстрата рекомбинантных аналогов белков Treponema pallidum, синтезированных в экспрессирующей системе E.coli. Получению некоторых рекомбинантных белков Treponema pallidum и применению их в качестве антигена в иммуноферментном анализе и посвящена данная работа.

Цели и задачи исследования.

Целью настоящей работы является получение и сравнительное исследование природных и рекомбинантных антигенов Treponema pallidum для иммуноферментной диагностики сифилисаизучение спектра антител к антигенам 15 kDa, 17 kDa, TmpA, 47 kDa Tr. pallidum на разных стадиях заболевания методом ИФА с помощью рекомбинантных белков.

Решение поставленной задачи включало следующие этапы:

• культивирование бледной спирохеты Treponema pallidum на кроликах;

• получение природного антигена Treponema pallidum для ИФА;

• литературно-теоретический анализ с целью выбора наиболее антигеннозначимых белков, видоспецифичных для Treponema pallidum;

• выделение ДНК Treponema pallidum;

• получение методом ПЦР генов рекомбинантных белков;

• определение структуры генов;

• клонирование генов в экспрессирующий вектор;

• наработка рекомбинантных белков в E. coli и их выделение;

• изучение возможности использования рекомбинантных белков в качестве антигена в ИФА;

• получение экспериментальных партий тест-систем;

• исследование сывороток больных сифилисом с помощью опытных партий тест-систем.

• анализ результатов использования отдельных рекомбинантных белков и их комбинации при выявлении антител при различных стадиях инфекции.

Научная новизна и практическая ценность работы.

Выбрана комбинация белков Treponema pallidum для использования в качестве антигена в твердофазном ИФА.

Сконструированы четыре бактериальных штамма-продуцента, экспрессирующие белки Treponema pallidum: 15 kDa, 17 kDa, TmpA и 47 kDa.

С использованием как отдельных, так и суммарных рекомбинантных белков проведено исследование сывороток больных сифилисом на разных стадиях заболевания. Показано преимущество использования набора четырех рекомбинантных белков по сравнению с использованием отдельных рекомбинантных белков в качестве антигена для лабораторной диагностики заболевания.

На основе рекомбинантных белков выпускаются диагностические наборы для определения антител к бледной спирохете (ТОО «Биосервис», г. Москва).

Получен патент на изобретение «Набор для обнаружения антител к бледной спирохете Treponema pallidum» (RU 2 103 362, см. Приложение).

Благодарности. Автор благодарен научным руководителям Звереву В. В. и Серпинскому О. И. за их постоянное внимание и помощь в ходе выполнения диссертационной работы. Автор выражает глубокую благодарность Сиволобовой Г. Ф., Кочневой Г. В., Урманову И. Х., в соавторстве с которыми были получены основные результаты работыКурлаевой Т.Б. и Судариковой Е. Г. за оказанную помощь в сборе образцов сывороток и тестировании их стандартными лабораторными методами. и.

Публикации по теме диссертации:

1. Гражданцева A.A., Сиволобова Г. Ф., Кочнева Г. В., Урманов И. Х. и др. Клонирование и экспрессия в E. coli основных антигенов Treponema pallidum и исследование их иммунохимических свойств. // Иммунология, 1998, № 4, с. 17−20.

2. Гражданцева A.A., Кочнева Г. В., Сиволобова Г. Ф., Цивковский Р. Ю., Серпинский О. И. и др. Исследование сывороток больных сифилисом методом иммуноферментного анализа с использованием рекомбинантных антигенов. // Иммунология, 1998, № 4, с. 20−23.

3. Сиволобова Г. Ф., Кочнева Г. В., Гражданцева A.A., Урманов И. Х., Серпинский О. И., Блинов В. М. и др. Набор для обнаружения антител к бледной спирохете Treponema Pallidum, рекомбинантный полипептидный антиген Treponema Pallidum 15 kDa, рекомбинантный полипептидный антиген Treponema Pallidum 17 kDa, рекомбинантный полипептидный антиген Treponema Pallidum TMP А. // Патент RU 2 103 362. Бюл. № 3, 1998.

4. Гражданцева A.A., Кочнева Г. В., Сиволобова Г. Ф., Серпинский О. И., Цивковский Р. Ю. и др. Исследование сывороток больных сифилисом методом иммуноферментного анализа с использованием рекомбинантных антигенов. // Конференция «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера», Новосибирск, 1998 г., с. 133.

Выводы.

1. Разработана экспериментальная иммуноферментная тест-система для лабораторной диагностики сифилиса на основе антигена Treponema pallidum. Выпущено четыре серии экспериментальных тест-систем для выявления IgG человека к Treponema pallidum.

2. Получены бактериальные штаммы-продуценты E. coli, экспрессирующие белки 15 kDa, 17 kDa, TmpA, 47 kDa Treponema pallidum в виде химер с р-галактозидазой.

3. Разработана экспериментальная иммуноферментная тест-система для лабораторной диагностики сифилиса, основанная на рекомбинантных белках 15 kDa, 17 kDa, TmpA и 47 kDa. Получен патент на изобретение «Набор для обнаружения антител к бледной спирохете Treponema pallidum» (RU 2 103 362). Выпущено четырнадцать серий экспериментальных тест-систем для выявления IgG человека к Treponema pallidum.

4. Проведено сравнительное изучение ИФА тест-систем: а) на основе анализа 824 сывороток, полученных от больных с разными стадиями сифилиса, и 54 сывороток здоровых людей показано, что диагностикум на основе рекомбинантного антигена обладает более высокими чувствительностью и специфичностью (99,5 и 100%) по сравнению с тест-системой на основе природного антигена (96,9 и 92, 6%) — б) показано, что тест-системы на основе рекомбинантных белков при хранении при 4 °C обладают большей стабильностью (9 месяцев) по сравнению с тест-системами на основе природного антигена Treponema pallidum (4 месяца). V.

5. Показаны особенности накопления IgG и IgM к четырем рекомбинантным белкам в группах пациентов с различными стадиями сифилиса: а) первичный сифилис — антитела класса IgM были обнаружены у 92% пациентов, в основном, к белкам TmpA и 17 kDaIgG определяются у всех пациентов к белку TmpA;

87 б) вторичный свежий сифилис — антитела классаМ регистрируются в 72% случаеврегистрируются у всех больных к белкам ТтрА и 17 кСав) вторичный рецидивный сифилис — не определяютсяМ к белку 15 кБа, а к остальным белкам определяются в 20−50%-О определяются у всех пациентов на все четыре белкаг) леченый сифилис —М к данным белкам не определяются-О регистрируются у всех пациентов этой группы, причем наиболее часто к белку 17 Ша — 86,3%, а в 13% — только к этому белку.

Заключение

.

В России за последнее десятилетие наблюдается устойчивая тенденция роста инфекционных заболеваний, в том числе и сифилиса. По данным Министерства здравоохранения Российской Федерации [40] рост заболеваемости сифилисом составил с 4,3 в 1989 году до 277,3 в 1997 году (заболеваемость на ЮОтыс. нас). В связи с этим возникла острая необходимость в создании новых методов диагностики, позволяющих одновременно обследовать большие группы населения, недорогих и удобных в практическом применении. До начала настоящей работы (1995 г.) в медицинских учреждениях применялся комплекс стандартных серологических реакций, который не изменялся с 1985 г. Эти методы не удовлетворяли практическую медицину: одни из них сложны при постановке и являются дорогостоящими, другие достаточно часто дают ложноположительные результаты. Сложившаяся ситуация требовала более совершенных методов лабораторной диагностики.

Одним из таких методов, получившим широкое применение за последнее десятилетие, стал иммуноферментный анализ. В настоящее время ИФА широко используется как при детекции антител и антигенов при вирусных, бактериальных, паразитарных заболеваниях, так и при определении белковых компонентов крови (гормоны, цитокины, онкогены) и других биологических жидкостей. Данная работа посвящена постановке и усовершенствованию иммуноферментных методов диагностики сифилиса.

На пути к достижению этой цели были оптимизированы параметры культивирования Treponema pallidum, шт. Nichols, установлена оптимальная инфицирующая доза (4±-1)х107 трепонем/мл и время забора инфицированных тестикул — 2 день после появления первых симптомов орхитаполучен природный антиген Treponema pallidumсконструирована на его основе экспериментальная тест-система и выпущно 4 серии, включающие по 30 тест-систем каждая (Заключение Отдела биотехнологического контроля ГНЦ ВБ «Вектор» о качестве тест-систем).

Однако, использование в ИФА антигенов из патогенных трепонем сопряжено с рядом очевидных трудностей — необходимостью культивирования на животных активного возбудителя сифилиса и, в связи с этим, высокая вероятность заражения персонала, невозможность получения больших количеств антигена, высокая себестоимость и проблема его стандартизации. Учитывая все эти недостатки, была поставлена задача создания рекомбинантных аналогов антигенов бледной спирохеты.

На основе анализа данных литературы и GenBank был осуществлен выбор белков Тг. pallidum, видоспецифичных, обладающих выраженными антигенными свойствами. Дальнейшие исследования подтвердили, что рекомбинантные аналоги выбранных липопротеинов 15 kDa, 17 kDa, TmpA и 47 kDa в комплексе позволяют определить антитела практически во всех сыворотках больных первичным, вторичным сифилисом и лиц, наблюдаемых 1−2 года после лечения.

Полученные на основе комбинации рекомбинантных белков диагностические наборы превышали по чувствительности и специфичности существовавшие в то время отечественные иммуноферментные системы на основе природного антигена (в том числе и разработанные нами) и были более стабильны, удобны и безопасны в работе.

При сравнении срока хранения нативного и рекомбинантного антигенов, сорбированных на планшетах, при одинаковых условиях рекомбинантный антиген оказался более стабилен, что позволяет увеличить длительность срока хранения тест-систем.

На основании выявляемое&tradeантител к отдельным рекомбинантным белкам и их комплексу было установлено, что для серологической диагностики важно применять комбинацию антигенов, так как использование отдельных белков не позволяет определять антитела во всех сыворотках пациентов с первичным, вторичным и леченым сифилисом.

Можно предположить, что при диагностике поздних форм сифилиса (третичный и сифилис нервной системы), отличающихся слабой сероконверсией, комплексное использование рекомбинантных антигенов будет особенно необходимым.

Проведенные нами исследования появления антител к индивидуальным белкам позволили определить напряженность гуморального иммунного ответа к каждому белку на разных стадиях сифилиса, а также судить о роли полученных антигенов для серологической диагностики. Выявленная нами особая значимость 17 kDa и ТтрА антигенов была впоследствии подтверждена японскими и немецкими исследователями [61, 62].

С использованием в качестве антигена набора сконструированных нами рекомбинантных белков было выпущено 14 серий экспериментальных тест-систем по 100−200 наборов в каждой серии, чувствительность и специфичность которых составляла 98−100% (см.

Заключение

Отдела биотехнологического контроля ГНЦ ВБ «Вектор»). При помощи разработанной тест-системы исследовано более 800 образцов крови. Получен патент на изобретение «Набор для обнаружения антител к бледной спирохете Treponema pallidum» (RU 2 103 362), основанный на рекомбинантных антигенах 15 kDa, TmpA, 47 kDa и 17 kDa.

Данная работа была выполнена при финансовой поддержке ТОО «Биосервис» .

Показать весь текст

Список литературы

  1. В.А., Тихонова Л. И., Машкиллейсон А. Д., Борисенко К. К., Прохоренко В. И. Заболеваемость сифилисом в России: опыт истории, эпидемиологический анализ, прогнозы. // ЗППП, 1995, № 4, с. 22−25.
  2. Антитела. Методы. Кн.2. // под ред. Кетти Д., М.: «Мир», 1991, с. 152−238.
  3. И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. JL: «Ленмедгиз», 1962.
  4. В.Н., Дмитриев Г. А. и др. Новая тест-система иммуноферментного анализа для серодиагностики сифилиса. //Вестн. дерматол. венерол. 1995, № 1, с. 19−20.
  5. Г. Б. Реакция иммобилизации бледных трепонем. М.: «Медгиз», 1964.
  6. К.К., Тимченко Г. Ф., Дмитриев Г. А. и др. Первый опыт применения в России тест-системы «TPHA-NOSTICON» фирмы «Органон-Техника БВ» (Голландия) для диагностики сифилиса. // ЗППП, 1995, № 1, с. 33−34.
  7. БСЭ. 1984, Т.23, с. 326−327.
  8. Вектор pEL5c. // Заявка на получение патента N5027679/13/7 659 от 18.02.1992 г.
  9. В.Н., Золотухин В. А., Шутова О. В., и др. Модификация иммуноферментной тест-системы для серодиагностики описторхоза. // Мед. паразитол. и паразитар. бол., 1990, № 2, с. 9−11.
  10. A.A., Быков A.C., Пашков Е. П., Рыбакова A.M. Микробиология. М.: «Медицина», 1998, с. 297−298.
  11. Г. А., Нгуен Тхи Хой, Баллад Н.Е., и др. Эффективность иммуно-ферментного теста с гомологичным и гетерологичными антигенами при клонорхозе. // Мед. паразитол. и паразит, бол., 1991, № 4, с. 20−23.
  12. Г. А., Брагина Е. Е. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса. Часть 1. // Вест. Дерматол. Венерол., 1996, № 2, с. 29−32.
  13. Г. А., Брагина Е. Е. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса. Часть 2. // Вест. Дерматол. Венерол., 1996, № 3, с. 33−38.
  14. С.А., Ивлева Е. А., Эрдман Ю. С. Значение ТРНА теста в подтверждении ложноположительных реакций на сифилис. // Вопр. диагностики, лечения и профилактики ЗГТПП и дерматозов. Сб. н.-практ. конф., Рязань, 1995, с. 25.
  15. С., Сильм X., Виндиревских Г., Шевчук О. Усовершенствование методов диагностики сифилиса при помощи определения антител к специфическим белкам возбудителя. // ЗППП, 1998, № 4, с. 21 -22.
  16. В.Д., Фриго Н. В. Результаты апробации иммуноферментной тест-системы Lues Screen для серодиагностики сифилиса. // Вопр. диагностики, лечения и профилактики ЗППП и дерматозов. Сб. н.-практ. конф., Рязань, 1995, с. 29.
  17. С.Е., Каштанова М. Г., Милонова Т. И. Фильтруемость бледных трепонем через стерилизующие фильтры с различной величиной пор.// Вестн. Дерматол., 1979, № 1, с. 70−77.
  18. Котровский А. В. Разработка и клиническая оценка методики постановки иммуноферментного анализа на поверхности твердофазного носителя для серодиагностики сифилиса. //Дисс. канд. мед. наук. М, 1986.
  19. А.П. Микробиологический словарь справочник. «Беларусь», 1986, с. 274−275.
  20. Краткий определитель бактерий Берги. // под ред. Хоулта Д. Г., М.: «Мир», 1980, с. 93−97.
  21. В.Г., Данилова О. П. Ложно-положительные реакции в диагностике сифилиса. // Материалы XXXIII Научно-практ. конф. дерматологов, акушер-гинекологов и урологов Санкт-Петербурга, С-Пб, 1998, с. 27−28.
  22. O.K., Котровская Л. Г., Максудов Ф. М. и др. Клиническая оценка осадочных реакций Кана и Закса-Витебского. // Вестн. Дерматол., 1985, № 7, с. 69−74.
  23. В.Ф., Борисенко К. К., Потекаев Н. С., Борисова Т. К., Сидорова Е. В. Динамика трепонемоспецифической иммуноглобулинемии при ранних формах сифилиса. // Вестн. Дерматол. Венерол., 1990, № 8, с. 39−42.
  24. И.И. и др. Контактные инфекции, передающиеся половым путем. Киев: «Здоровье», 1989, с. 90−94.
  25. Т.М., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: «Мир», 1984.
  26. М.В. Эволюция сифилиса. М.: «Медицина», 1987, с. 4−120.
  27. Новое в клонировании ДНК. Методы. // под ред. Гловера Д. М., М.: «Мир», 1989, с. 95−137.
  28. А.П., Фриго Н. В., Комарова В. Д., Чепурченко Н. В., Абалкина Л. М. Бурков А.Н. Ультраозвученные белки Treponema pallidum и их рекомбинантные аналоги в иммуноферментной диагностике сифилиса. // ИППП, 1999, № 1, с. 25−28.
  29. Н.М. Экспериментальный сифилис. М.: «Медгиз», 1955.
  30. Н.М., Делекторский В. В. Ультраструктура бледной трепонемы и механизмы клеточной защиты до и в процессе лечения сифилиса. // Вестн. Дерматол., 1981, № 12, с. 37−40.
  31. Н.М., Резникова Л. С., Милонова Т. И. и др. Результаты комплексного изучения ускоренного метода для серодиагностики сифилиса. // Вестн. Дерматол., 1978, № 5, с. 28−33.
  32. Н.М., Милонова Т. И., Тимченко Г. Ф. и др. Сравнительное изучение реакции пассивной гемагглютинации, иммунофлюоресценции с адсорбцией и микропреципитации с активной сывороткой крови на сифилис. // Вестн. Дерматол., 1983, № 5, с. 17−20.
  33. Н.М., Беднова В. Н., Делекторский В. В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающимхся половым путем. М.: «Медицина», 1987.
  34. О совершенствовании серодиагностики сифилиса. Приказ N 1161 от 2 сентября 1985 г., МЗ СССР.
  35. Р. К. Методы очистки белков. М.: «Мир», 1985, с. 341−342.
  36. Ю.К. Кожные и венерические болезни. М.: «Медицина», 1980, с. 417−424.
  37. Е.В., Ляхов В. Ф. Значение определения противотрепонемных IgM-антител в серодиагностике сифилиса. // ЗППП, 1995, № 4, с. 11−14.
  38. К.Н. Современный аспект неведомого сифилиса. // Вестн. Дерматол., 1969, № 3, с. 70−73.
  39. . Л.И. Обзор ситуации с ИППП. Анализ заболеваемости врожденным сифилисом в Российской Федерации. // ИППП, 1999, № 1, с. 15−19.
  40. Н.З., Сосновский А. Т., Качук М. В., Белугина И. Н. Венерические болезни. Минск: «Беларусская наука», 1997, с. 7−36.
  41. Akins D.R., Purcell В.К., Mitra М.М., Norgard M.V., Radolf J.D. Lipid modification of the 17-kilodalton membrane immunogen of Treponema pallidum determines macrophage activation as well as amphiphilicity. // Infect. Immun., 1993, V. 61, p. 1202−1210.
  42. Baker-Zander S.A., Hook E.W., Handsfield H.H., Lukehart S.A. Antigens of Treponema pallidum recognized by IgG and IgM antibodies during syphilis in humans. // J. Infect. Dis., 1985, V. 151, p. 264−272.
  43. Baker-Zander S.A., Lukehart S.A. Antigenic cross-reactivity between Treponema pallidum and other patogenic memberrs of the family Spirochaetaceae. // Infect. Immun., 1984, V. 46, p. 116−121.
  44. Baseman J.B., Hayes E.C. Molecular characterization of receptor binding proteins and immunogens of virulent Treponema pallidum. // J. Exp. Med., 1980, V. 151, p. 573−586.
  45. Blanco D.R., Lovett M.A., Miller J.N. Surface antigens of the syphilis spirochete and their potential as virulence determinants. // Emerg. Infect. Dis., 1997, V. 3, p. 11−20.
  46. Catteral R.D. Presidental address to the M.S.S.V.D.: systemic disease and the biological false-positive reaction. // Br. J. Vener. Dis., 1972, N 48, p. 1−12.
  47. Chamberlain N.R., Brandt M.E., Erwin A.L., Radolf J.D., Norgard M.V. Major integral membrane protein immunogens of Treponema pallidum are proteolipids. // Infect. Immun., 1989, V. 57, p. 2872−2877.
  48. Codd A.A., Sprott M.S., Narang H.K. Competitive enzyme-linked immunosorbent assay for Treponema pallidum antibodies. // J. Med. Microbiol., 1988, V. 26, p. 153−157.
  49. Cunningham T.M., Walker E.M., Miller J.N., Lovett M.A. Selective release of the Treponema palidum outer membrane and associated polypeptides with Triton X-l 14. // J. Bacteriol., 1988, V. 170, p. 5789−5796.
  50. Dallas W. S., Ray P.H., Leong J., Benedict C.D., Stamm L. V., Bassford P.J. Identification and purification of a recombinant Treponema pallidum basic membrane protein antigen expressed in Escherichia coli. // Infect. Immun., 1987, V. 55, p. 1106−1115.
  51. Database GeneBank. rel.96. 1996
  52. Fehniger T.E., Walfield A.M., Cunningham T.M., Radolf J.D., Miller J.N., Lovett M.A. Purification and characterization of cloned protease-resistent Treponema pallidum-specific antigen. // Infect. Immun., 1984, V. 46, p. 598−607.
  53. Fehniger T.E., Radolf J.D., Lovett M.A. Properties of an ordered ring structure formed by recombinant Treponema pallidum surface antigen 4D. // J. Bacteriol., 1986, V. 165, p. 732−739.
  54. Farshy C.E., Hunter E.F., Hensel L.O., Larsen S.A. Four-step enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Treponema pallidum antibody. // J. Clin. Microbiol., 1985, V. 21, p. 387 389.
  55. Farshy C.E., Hunter E.F., Larsen S.A., Gerni E.N. Double-conjugate enzyme-linked immunosorbent assay for immunoglobulins G and M against Treponema pallidum. // J. Clin. Microbiol., 1984, Y. 20, p. 1109−1113.
  56. Fieldsteel O.H., Cox D.L., Moeckli R.A. Further studies on replication of virulent Treponema pallidum in tissue cultures of sflEp cells. // Infect. Immun., 1982, V. 35, p. 449−455.
  57. Fraser C.M., Norris S.J., Weinstock C.M. Complete genome sequence of Treponema pallidum, the syphilis spirochete. // Science, 1998, V. 281, p. 375−388.
  58. Fujimura K., Ise N., Ueno E. et al. Reactiviti of recombinant Treponema pallidum (r-Tp) antigens with anti-Tp antibodies in human syphilitic sera evaluated by ELISA. // J. Clin. Lab. Anal., 1997, V 11, N 6, p. 315−322.
  59. Gerber A., Krell S., Morenz J. Recombinant Treponema pallidum Antigens in Syphilis Serology. // Immunobiol. 1996−1997, V. 196, p. 535−549.
  60. Gershoni J.M., Palade G.E. Protein blotting: principles and applications. // Anal. Biochem., 1983, V. 131, p. 95 — 137.
  61. Hanff P.A., Fehniger T.E., Miller J. N., Lovett M.A. Humoral immune response in human syphilis to polipeptitdes of Treponema pallidum. // J. Immunol., 1982, V. 129, p. 1287−1291.
  62. Hay P.E., Clarke J.R., Strugnell R.A. et al. Use of the polymerase chain reaction to detect DNA sequences specific to pathogenic treponemes in cerebrospinal fluid. // FEMS Microbiol. Lett., 1990, V. 68, p. 233−238.
  63. Hay P.E., Clarke J.R., Taylor-Robinson D., Goldmeier D. Detection of treponemal DNA in the CSF of patients with syphilis and HIV infection using the polymerase chain reaction. // Genitour. Med. 1990, V. 66, p. 428−432.
  64. Kraus S.J., Haserick J.R., Logan L.C., Bullard J.C. Atipical fluorescence in the fluorescent treponemal antibody-absorbtion (FTA-ABS) test related to dezoxyribonucleic acid (DNA) antibodies. // J. Immunol., 1971, V. 106, p. 1665−1669.
  65. Kox D.L., Moockli R.A., Keoney K.M. Enumeration of Treponema pallidum cell cultivated in vitro by an Enzime-Linked Immunosorbent Assay. // Infect. Immun., 1984, V. 44, p. 103−106.
  66. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. // Nature. 1970, V. 227, p. 680−685.
  67. Larcen S.A., Steiner B.M., Rudolph A.H. Laboratory diagnosis and interpretation of test for syphilis. // Clin. Microbiol. Rev., 1995, V. 8, p. 1−21.
  68. Larcen S.A. Siphilis. // Clin. Lab. Med., 1989, V. 9, p. 545−557.
  69. Lefevre J.C., Bertrand M.A., Bauriaud R. Evaluation of the Captia enzyme immunoassays for detection immunoglobulins G and M to Treponema pallidum in syphilis. // J. Clin. Microbiol., 1990, V. 28, p. 1704−1707.
  70. Liu Wei, Cai Rui-kang, Zhao qing-li. Clinical evaluation of western blot assay as specific test for syphilis. // World STD/AIDS Congress 1995, 19th-23rd March 1995, Singapore 1995, p.85.
  71. Lukehart S.A., Baker-Zander S.A., Gubish E.R. Identification Treponema pallidum antigens: comparison with a nonpatogenic treponeme. // J. Immunol., 1982, V 129, p. 833−838.
  72. Lukehart S.A., Baker-Zander S.A., Sell S. Characterization of the humoral immune response of the rabbit to antigens of Treponema pallidum after experimental infection and therapy. // Sex. Trans. Dis., 1986, V. 13, p. 9−15.
  73. McPherson M.J., Quirke P., Taylor G.R. PCR. A Practical Approach. New York: «Oxford University Press», 1991.
  74. Magnuson H.J., Rosenau B.J. The rate of development and degree of acquired immunity in experimental syphilis. // Am. J. Syph., 1948, V. 32, p. 418−436.
  75. Magnuson H.J., Thomas E.W., Olansky S., Kaplan B.I., DeMello L., Cutler J.C. Inoculation syphilis in human volunteers. // Medicine, 1956, V. 35, p. 33.
  76. Marchito K.S., Jones S.A., Schell R.F., Holmans P.L., Norgard M.V. Monoclonal antibody analisis of specific antigenic similarities among pathogenic Treponema pallidum subspecies. // Infect. Immun., 1984, V. 45, p. 660−666.
  77. Marchito K. S., Selland-Grossing C.K., Norgard M.V. Molecular speciflties of monoclonal antibodies directed against virulent Treponema pallidum. // Infect. Immun., 1986, V. 51, p. 168−176.
  78. Maxam A.M., Gilbert W. A new method for sequencing DNA. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA., 1977, V. 74, p. 560−564
  79. Meyer M.P., EddyT., Baughn R.E. Analysis of western blotting (immunoblotting) technique in diagnosis of congenital syphilis. // J. Clin. Microbiol., 1994, V. 32, p. 629−633.
  80. Miller J.N., De Bruijn J.H., Bekker J.H., Onvlee P.C. The antigenic structure of Treponema pallidum, Nichols strain. // J. Immunol., 1966, V. 96, p. 450−456.
  81. Moskophidis M., Muller F. Molecular analysis of immunoglobulins M and G immune response to protein antigens of Treponema pallidum in human suphilis. // Infect. Immun., 1984, V. 43, p.127−132.
  82. Moskophidis M., Muller F. Molecular characterization of glycoprotein antigens on surface of Treponema pallidum. Comparison with nonpathogenic Treponema phagedenis byotype Reiter. // Infect. Immun., 1984, V. 46, p. 867−869.
  83. Norgard M.V. Clinical and diagnosis issues of acquired and congenital syphilis encompassed in the current syphilis epidemic. // Curr. Opin. Infect. Dis., 1993, V. 6, p. 9−16.
  84. Norgard M.V., Chamberlain N.R., Swancutt M.A., Goldberg M.S. Cloning and expression of the major 47-kilodalton surface immunogen of Treponema pallidum in Escherichia coli. // Infect. Immun., 1986, V. 54, p. 500−506.
  85. Norrander J., Kempe T., Messing J. Construction of improved M13 vectors using oligodeoxynucleotide-directed mutagenesis. // Gene. 1983, V. 26, p. 101−106.
  86. Norris S.J. Sell S. Antigenic complexity of Treponema pallidum: antigenicity and surface localization of major polypeptides. // J. Immunol., 1984, V. 133, p. 2686−2692.
  87. Pedersen N.S., Petersen C.S., Wejtorp M., Axelsen N.H. Serodiagnosis of syphilis by an enzime-linked immunosorbent assay for IgG antibodies against the Reiter treponema flagellum. // Scand. J. Immunol., 1982, V. 15, p. 341−348.
  88. Pedersen N.S., Oram O., Mouritsen. Enzime-linked immunosorbent assay for detection of antibodies to veneral disease research laboratory (VDRL) antigen in syphilis. // J. Clin. Microbiol., 1987, V. 25, p. 1711−1716.
  89. Peterson K.M., Baseman J.B., Alderete J.F. Treponema pallidum receptor binding proteins interact with fibronectin. // J. Exp. Med., 1983, V. 157, p. 1958−1970.
  90. Porcella S.F., Popova T.G., Hagman K.E., Penn C.W., Radolf J.D., Norgard M.Y. A mgl-like operon in Treponema pallidum, the syphilis spirochete. // Gene, 1996, V. 177, p. 115−21.
  91. Purcell B.K., Chamberlain N.R., Golberg M.S., Andrews L.P., Robinson E.J., Norgard M.V., Radolf J.D. Molecular cloning and characterization of the 15-kilodalton major immunogen of Treponema pallidum. // Infect. Immun., 1989, V. 57, p. 3708−3714.
  92. Purcell B.K., Swancutt M.A., Radolf J.D. Lipid modification of the 15- kilodalton major membrane immunogen of Treponema pallidum. // Mol. Microbiol. 1990, V. 4, p. 1371−1379.
  93. Rockwell D.H. The tuskegle study of untreated syphilis- the 30th year of observation. // Arch. Intern. Med., 1964, V. 114, p. 792−798.
  94. RodgersG.C., Laird W.J., Coates S.R., Mack D.H., Huston M., Sninsky J.J. Serological characterization and gene localisation of an Escherichia coli-expressed 37-kilodalton Treponema pallidum antigen. // Infect. Immun., 1986, V. 53, p. 16−25.
  95. Roy W.S., Schenectedy N.Y. Serological test for syphilis. // U.S. Patent 4.288.426, Sep. 8, 1981.
  96. Stamm L. V, Greene S. R, Bergen H. L, Hardham J. M, Barnes N.Y. Identification and sequence analysis of Treponema pallidum tprJ, a member of a polymorphic multigene family. // Microbiol. Lett., 1998, V. 169, p. 155−63.
  97. Strungell R.A., Cockayne A., Penn C.W. Molecular and antigenic analysis of treponemes. // Crit. Rev. Microbiol., 1990, V. 17, p. 231−250.
  98. Thornburg R.W., Baseman J.B. Comparison of major protein antigens and protein profiles of Treponema pallidum and Treponema pertenue. // Infect. Immun., 1983, V. 42, p. 623−627.
  99. Veldkamp J., Visser A.V. Application of the enzime-linked immunosorbent assay (ELISA) in the serodiagnosis of syphilis. // Br. J. Vener. Dis., 1975, V. 51, p. 227−231.
  100. Walfield A.M., Hanff P.A., Lovett M.A. Expression of Treponema pallidum antigens in E.coli. // Science, 1982, V. 216, p. 522−523.
  101. Weigel L.M., Brandt M.E., Norgard M.V. Analisis of the N-terminal region of the 47— kilodalton integral membrane lipoprotein of Treponema pallidum. // Infect. Immun., 1992, V. 60, p. 1568−1576.
  102. Wicher V., Zabec J., Wicher K. Phatogen-specific humoral response in Treponema Pallidum -infected humans, rabbits and guinea pigs. // Infect. Dis., 1991, V. 163, p. 830−836.
  103. Wilcox R.R. Textbook of veneral diseases and treponematoses. London, 1964.
  104. White T.J., Fuller S.A. Visu Well Reagin, a nontreponemal enzime-linked immunosorbent assay for the serodiagnosis of syphilis. // J. Clin. Microbiol., 1989, V. 27, p. 2300−2304.
  105. Yelton D.B., Limberger R.J., Curci K. et al. Treponema phagedenis encodes and expresses homologs of Treponema pallidum TmpA and TmpB proteins. // Infect. Immun., 1991, V. 59, p. 3685.
  106. Young H., Moyes A., Seagar L., Mcmillan, A. Novel recombinant-antigen enzyme immunoassay for serological diagnosis of syphilis. // J. Clin. Microbiol., 1998, V. 36, p. 913 917.
  107. Young H., Moyes A., de Ste Croix I., McMillan A. A new recombinant antigen latex agglutination test (Syphilis Fast) for the rapid serological diagnosis of syphilis. // Int. J. STD. AIDS, 1998, V. 9, p. 196−200.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!