Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Оптимизация экстракционного флуориметрического метода количественного определения катехоламинов и серотонина в головном мозге крыс и использование его в исследованиях функциональной роли этих соединений

Диссертация: Оптимизация экстракционного флуориметрического метода количественного определения катехоламинов и серотонина в головном мозге крыс и использование его в исследованиях функциональной роли этих соединений
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Накатикнопки «В1Ш на пускателе 2 подаётся питание на все модули комплекта. Модуль «Установка 0 «3 ставит регистр 4 и коллектор 5 в исходное положение. Пуск в работу осуществляет импульсатор 6, переключающий реле 7. Тактовые импульсы танкера 8, делённые счётчиком 9, поступают на коммутируемый вход «Ц» регистра 4. Дозатор 10 выдаёт дозу. Затем привод II опускает ииксер 12 (перенетивайщий .заданное… Читать ещё >

Оптимизация экстракционного флуориметрического метода количественного определения катехоламинов и серотонина в головном мозге крыс и использование его в исследованиях функциональной роли этих соединений (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • РАЗДЕЛ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Общие представления о катехоламинах и серотонине и их роль в ВДС
      • 1. 1. 1. Метаболизм.катехоламинов.и.серотонина в ВДС
      • 1. 1. 2. Локализация, катехоламинов и серотони-.. на в ЦНС
      • 1. 1. 3. Функциональное значение.катехоламинов. и серотонина в ЦНС
    • 1. 2. Методы анализа катехоламинов и серотонина. 21 I.2.I. Сравнительный анализ современных методов количественного определения катехол. аминов и серотонина
      • 1. 2. 1. 1. Методы выделения катехоламинов и. .. серотонина
      • 1. 2. 1. 1. 1. Экстракционный способ очистки БА
      • 1. 2. 1. 1. 2. Обычная жидкостная хроматография
      • 1. 2. 1. 1. 3. Высокоэффективная. жидаостная хро. матография
      • 1. 2. 1. 1. 4. Газовая хроматография
      • 1. 2. 1. 2. Методы специфического количественного определения катехоламинов и серо тонина
      • 1. 2. 1. 2. 1. Флуориметрические методы
      • 1. 2. 1. 2. 2. Электрохимические методы
      • 1. 2. 1. 2. 3. Радио энзиматические методы
      • 1. 2. 1. 2. 4. Масс-спектрометрические методы
      • 1. 2. 1. 3. Перспективы дальнейшего развития методов определения катехол аминов и серотонина
      • 1. 2. 2. Методы выделения и очистки биогенных аминов органическими растворителями
      • 1. 2. 3. Флуориметрические методы определения биогенных аминов
  • РАЗДМ 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
    • 2. 1. Оптимизация экстракционного флуориметрического метода определения БА
    • 2. 1. 1. Реактивы, используемые нал®- при определении биогенных аминов
    • 2. 1. 2. Выделение структур мозга и хранение выделенных проб до анализа
    • 2. 1. 3. Оптимизация количественного флуоримет. , рического определения биогенных аминов. 44 2Л.3.1. Модификация шлуориметра ЭФ-ЗМА для. определения биогенных аминов
    • 2. 1. 3. 1. 1. Абсорбционные светофильтры для флу-ориметрического.определения биогенных аминов
    • 2. 1. 3. 1. 2. Сйивная кювета и термостатировалие шоветного отсека
    • 2. 1. 3. 2. Автоматизация проведения химических процедур получения флуорофоров
    • 2. 1. 3. 3. Определение катехол аминов
    • 2. 1. 3. 4. Определение серотонина я 5-оксииндо-.. лилуксусной кислоты
    • 2. 1. 3. 5. Определение гомованилиновой кислоты
    • 2. 1. 3. 6. Математическая обработка результатов
    • 2. 1. 4. Оптимизация процедур выделения и. очистки
  • БА органическими растворителями
    • 2. 1. 4. 1. Общее описание процедур выделения и очистки биогенных аминов экстракцией органическими растворителями
      • 2. 1. 4. 2. Построение калибровочных кривых
      • 2. 1. 4. 2. 1. Основные калибровочные кривые
      • 2. 1. 4. 2. 2. Тканевые калибровочные кривые
      • 2. 1. 4. 3. Исследование наиболее общих факторов, определяющих эффективность и корректность экстракционных процедур при выделении и очистке БА органическими растворителями
      • 2. 1. 4. 4. Оптимизация экстракционных процедур при выделений и очистке БА органическими растворителями с учетом выявленных нами.. факторов
      • 2. 1. 4. 5. Спектральная характеристика специфичности экстракционного флуориметрического метода .Ib
      • 2. 1. 4. 6. Определение ДА, НА, 50 Т, 50ИУК и ГВК в «переднем мозге» и «стволе» головного.. мозга крыс
    • 2. 2. Оптимизированный экстракционный флуориметри-ческий метод в исследованиях функциональной. роли БА головного мозга крыс
      • 2. 2. 1. Влияние условий содержания крыс на. уровень ЕА головного мозга
      • 2. 2. 2. Изучение роли уровня БА. в механизмах. действия этанола

      2.2.3. Изучение влияния на уровень ЕА головного мозга крыс хронического введения ингибитора моноаминоксидазы ипрониазида, а также хронического введения предшественника ка-техоламинов L -дом в рамках комплексного исследования связи уровня БА.и.обучения с. пищевым подкреплением.

      2.2.3.1. Исследование содержания БА в головном мозге крыс при хроническом. введении ипрониазида.

      2.2.3.2. Исследование содержания ЕА в головном. мозге крыс при хроническом введении ь-ДОФА.

      2.2.4. Изучение влияния оборонительного обучения на содержания БА головного мозга в выборках крыс из общей популяции линии «Вистар» по. устойчивости к аудиогенному. раздражителю

    • Актуальность. Биогенные амины35 (катехоламины и серотонин) -широко распространенные б животном мире соединения, выполняющие медиаторные, модуляторные и гормональные функции. Принимая участие во многих сторонах. жизнедеятельности организмов, они особенно большую роль играют в интегративной деятельности ЦНС, где занимают ключевые позиции во все еще недостаточно полно понимаемых механизмах эмоций, памяти, управления поведением. Различные биогенные амины (БА) головного мозга. животных и их производные представляют в целом единую, тесно взаимосвязанную (морфологически, биохимически и функционально) систему биологических регуляторов. При биохимических исследованиях механизмов функционирования этой системы часто желательно одновременное определение в биологическом материале возможно большего числа ее элементов. Однако, высокая трудоемкость методов определения этих соединений ограничивает возможности их одновременного изучения, особенно в связи с тем, что решение многих современных задач связано с необходимостью обработки значительного объема материала.

    В ряду современных методов анализа экстракционный флуоримет-рический метод (этот метод сочетает выделение БА экстракцией органическими растворителями и их последующее флуориметрическое определение) наиболее приемлем для массового комплексного аналий Биогенные амины (БА), моноамины — синонимы, принятые в настоящее время в специальной литературе (и в настоящей. работе) обозначающие совокупность катехоламинов и серотонина. Они не строги, т.к. ряд авторов. под этими терминами подразумевает также, ацетил-холин, гаммааминомаслянную кислоту, гистамин (биогенный диамин) и другие соединения. за БА в биологических образцах, благодаря уникальному сочетанию высокой скорости анализа, возможности параллельного анализа большого числа проб, простоте и удобству выполнения процедур /24/.

    Наряду со всеми перечисленными достоинствами, существенным недостатком экстракционного флуориметрического метода определения БА’являются значительные потери последних при экстракционном очистке /141/. Имеющиеся в настоящее время в литературе данные не позволяют с уверенностью судить о факторах, влияющих на полноту выхода биогенных аминов при их очистке органическими растворителями. Кроме того, ни в одной из известных нам методических работ в этой области не приводятся полные данные о концентрационной зависимости выхода биогенных аминов при экстракционных процедурах в присутствии ткани. Таким образом, оптимизация факторов, влияющих на полноту и линейность выхода биогенных аминов при очистке органическим! растворителями является необходимым условием успешного практического использования этого метода. Кроме того, возможно повышение эффективности и йлуориглетрических процедур — за счет оптимизации условий получения флуорофоров и условий измерения флуоресценции.

    Особенно актуальными вопросам®изучения функциональной роли БА ЦНС, по нашему мнению, являются следующие: их вовлеченность в механизмы памяти, роль в механизмах действия алкоголя и патологического влечения к последнему, нейрохимические особенности животных данного вида, отличающихся по устойчивости ЦНС к сильному раздражителю.

    Цель работы: Оптимизация экстракционного флуориметрическо-го метода количественного определения норадреналина (НА), дофамина (ДА) и серотонина (5-окситриптамина — 50Т) в ткани головного мозга крыс с целью создания эффективного рутинного метода и апробирование его в исследованиях функциональной роли этих соединений в ЦНС.

    Основные задачи исследования: I. Исследовать и оптимизировать факторы, определяющие эффективность и корректность экстракционного флуориметрического метода для определения БА в ткани головного мозга. 2. Продемонстрировать возможности оптимизированного наш экстракционного флуориметрического метода для определения биогенных аминов в ткани головного мозга при: а) изучении роли уровня БА в механизмах действия этанолаб) изучении влияния на уровень БА головного мозга крыс хронического введения ингибитора моноаминоксидазы ипрониазида, а также хронического введения предшественника катехоламинов LДОМ в рамках комплексного исследования связи уровня БА и обучения с пищевым подкреплениемв) изучении влияния оборонительного обучения на содержание БА головного мозга в выборках крыс из общей популяции «Вистар», разделенных по устойчивости к аудиогенному раздражителю.

    Научная новизна. Впервые изучено влияние ряда условий процедур экстракции и очистки ЕА ткани головного мозга • юргани-ческими растворителями на величину и линейность выхода выделяемых соединений. Впервые в практику биохимического анализа внедрены автоматические дозаторы системы «С1ШШ». Это позволило увеличить эффективность анализа за счет повышения скорости, точности и простоты дозирования, а также облегчило дозирование агрессивных жидкостей.

    Модифицирован флуориметр ЭФ-ЗМА. Тщательный подбор абсорбционных светофильтров, установка сливной кварцевой кюветы и принудительное воздушное охлаждение кюветного отсека позволили обеспечить высокую чувствительность, специфичность и скорость измерений, а также повысить воспроизводимость результатов при определении БА.

    Благодаря оптимизации экстракционных процедур извлечения из ткани и очистки БА, химических процедур получения их флуорофоров и операций измерения флуоресценции нами предложено шесть новых высокоэффективных вариантов экстракционного флуориметрического метода определения в ткани головного мозга крыс норадреналина, дофамина и серотонина. Б пяти. из них возможно также определение и 5-оксииндолуксусной кислоты.

    Нагл удалось показать особую эффективность использования оптимизированного нами метода анализа БА в изучении механизмов функционирования ЦНС. при 'их использовании в сочетании с физиологическими методами. Получен ряд новых данных о роли моноаминэрги-ческих систем мозга в механизмах эмоций, памяти, управления поведением.

    Практическая ценность. Результаты изучения нами факторов определяющих эффективность экстракции БА органическими растворителями могут использоваться другими исследователями при разработке новых методов в этой области. Предложенные варианты экстракционного флуориметрического метода определения БА были успешно использованы нами в ряде экспериментов, требующих анализа БА в большом числе проб и зарекомендовали себя как простые и высокоэффективные. Они могут быть использованы также в следующих областях:

    — клинические исследования;

    — исследования механизмов действия фармакологических препаратов;

    — исследования механизмов функционирования ЦНС.

    Один из вариантов нашего метода внедон в Лаборатории нейро-медиаторных систем. Отдела проблем памяти Института биологической физики АН СССР.

    Полученные нами результаты при изучении роли БА ЦНС в механизмах поведения, действия фармакологических препаратов и этанола могут найти практическое применение в соответствующих областях.

    ВЫВОДЫ.

    1. С целью использования в массовых исследованиях разработан, обоснован и проверен на экспериментальном материале новый экстракционный флуориметрический метод количественного определения норадреналина, дофамина и серотонина в структурах головного мозга крыс. Показано, что наряду с указанными соединениями возможно определение 5-оксииндолилуксусной и гомованилиновой кислот. Одновременно возможен комплексный анализ более 100 образцов.

    2. Оптимизация и автоматизация процедур получения флуорофо-ров, а также модификация флуориметра ЭФ-ЗМА позволили:

    — определять норадреналин, дофамин, серотонин, 5-оксииндолил-уксусную и гомованилиновую кислоты с чувствительностью 7, 50, 19, 50 и 200 нг на пробу соответственно;

    — со1фатить количество операций при измерениях флуоресценции вдвое и обеспечить скорость измерений до 400 проб в час при коэффициенте вариации за 5 часов работы прибора < (Р < 0,05).

    3. Установлено, что основными условиями полноты выделения определяемых соединений экстракцией органическими растворителями являются — проведение всех экстракционных процедур при 0 °C, а также присутствие в гомогенизанионной среде метабисульфита натрия, динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и соляной кислоты в концентрациях 10, 20 и 200 мкМ на г ткани головного мозга, соответственно. Для каждого из определяемых соединений подобраны условия экстракции, обеспечивающие полноту его выхода (для дофамина и гомованилиновой кислоты — впервые).

    4. Обнаружено, что при остром отравлении этанолом уменьшается содержание норадреналина и дофамина в переднем мозге при одновременном накоплении серотонина. При изъятии этанола из употребления у крыс, подвергнутых хронической интоксикации им, наоборот, снижен уровень серотонина и повышен уровень норадреналина и дофамина в переднем мозге.

    5. Установлено, что увеличение уровня норадреналина, дофамина и серотонина в переднем мозге крыс при хроническом введении ипрониазида и увеличение уровня дофамина переднего мозга при хроническом введении lдиоксифенилаланина нарушает процессы фиксации информации, причем, ухудшение способности к обучению на пищевом подкреплении прямо зависит от увеличения содержания этих биогенных аминов.

    6. При обучении оборонительному навыку крыс, разделенных по устойчивости к аудиогенному раздражителю выявлено, что норадрена-линергическая система в большей степени, чем серотонинергическая участвует в организации оборонительного обучения. У аудиогенно-неустойчивых крыс при данном воздействии повышена реактивность моноаминергических структур головного мозга. от г^г^ ттгё! I п.

    Аз.

    В О t I /б.

    15 / сэ не" V о о.

    18 П.

    21 1 е s Т.

    22 U.

    00 2.

    I f В.

    12 ш.

    ZQ е (c)

    Рис. 35 Комплект модулей для автоматического серийного проведения многокомпонентных химических 'реакций в заданном временном режиме.

    Принцип действия.

    Накатикнопки «В1Ш на пускателе 2 подаётся питание на все модули комплекта. Модуль «Установка 0 «3 ставит регистр 4 и коллектор 5 в исходное положение. Пуск в работу осуществляет импульсатор 6, переключающий реле 7. Тактовые импульсы танкера 8, делённые счётчиком 9, поступают на коммутируемый вход «Ц» регистра 4. Дозатор 10 выдаёт дозу. Затем привод II опускает ииксер 12 (перенетивайщий .заданное время), поднимает его и коллектор 5 делает шаг. Счётчик 13 отсчитывает задаваемое число пробирок, после чего переключит регистр 4 в позицию «I» и ставит коллектор 5 вновь в исходное положение. Счётчик 14 начинает отсчёт заданной паузы. По окончании отсчета регистр 4 сдвинется в положенне,.2?Дозатор 15 выдаст дозу и т. д.

    Дозатор 19, включённый со счётчиком 20, выдаст заданную групповую дозу., По окончании запрограммированного цикла регистр 4 переключится в положение 9 и этим переключит пускатель 2. Сюаботает звуковой сигнал 23 и отключится питание на весь комплект модулей.

    Описание программы статистической обработки данных на ЭВМ «МИР-2″ вып» м." ввод" о 2 -" ввод" 34 -м1-л[1] -мм[ i]=ioof-i=?(i=i, hi, b[i, i]/b[ i, I+Hi]xKlxK2)/Nl -" для" 1=Гшлг" 1″ до" №М" вьтолнить" С" для'^=1+1″ и' а г" 1″ д0″ пм" выполнить" («вывод» 34," строка", i, «пробел» з, j — Ni-a[l]- н 2=А[Л]-" для" К=ГШАГ1″ д0″ Н1Ивш0лнить,'У1К]=в[1Д]/в[1,К+Н1]^К1><�К 2 -" для" К-1,'ШАГ, 1,'до" Н2'1вь!пол13ить" у[К]=в[ Jf к]/в[ J, K+N2]xI{ixK2-CT (N1, N2, Х[ N1 ], УС N2] -мх, МУ, EPSX, eps7, NTX, МТУ, TT, al) -" E" 1=1″ TO" (l.!M[j му/м1*100 -ep[ j>-epsy/mixioo -" выз" «зна» «стр», му, «проб» з, ерзу, «п.

    РОБ" 3, МТУ, «ПР0Б» б, !.^У/М1Х100, «ПР0Б» 3, ЕРЗУД11*100, «ПР0Б» 6, TT, «ПРОБ з, АЬ)» Ш1Ан («вь1в» «зна» мпроб,^, тт," проб" з, аь))-,'е''(1==0″ то" Сер[1] epsx/Mi*ioo-" выв" «зна» «стр», мх," пр0б" 3, epsx," пр0б" 3, нтх," проб" б, MX/Mixioo/, nPOB" 3, EPSx/Mixioo))-ocH (6,78,300,i, 6,6J6,6,i^}-i{)-r? вьш" 35″ зн" 8- «дл» 1″ до" км" бып" (граф (J-. 2, о, 78 д, о, о, ч, зч, 3) — УА=Ш[ J]- ГРАФС J-.2,уа, 78 д, о, о, ч, з-ч, э) — уа=^£ J] - графС J, уа, 78, i, 0,0, ч, э-ч, э) -увча£ J]-ep[ J] -грлфО, ув, 78, i, О, О, ч, зч, э) -уд=и. j 3+ЕР[Л]-ГРАФО, УД, 78, i, o, О, ч, э-ч, э) -уа=И? J] -ГРАФ01,уа, 78, I, O, О, ч, э-ч, э) -уа"шМграф (.т+. 2, уа, 78д, о, о, ч, э-ч, э5 -tpa§(j+.2,o, 78,.

    1,0,0гч, э-ч, э))-" выв" 35″ зн" 2-гРАФ (10/78>0,78д, 0,0,ч, э-ч, з)-ч=ху -" выв" з5″ зн" 8 -" стоп" -" на" м" где" х[ 205 -у[20 ] -м£ ш] -epl нм] -" npoirc.

    T (N1,N2, X[Nl], y[N2] -МХ, МУ, EPSX, ЕРЗУ, NTX, МТУ, TT, AL)" ПУСТ" 10О Д? Х=1 с1=1,Ml, Х[I])/N1-S=x (i=19n1,(x[l]-MX)t2)-L2=N1−1-" E" (L2>30″ H" L2< АО)" ТО" СЬ2=31-" НА" бб)-" Е" (Ь2>ад" й" Ъ2<�бО)" ТО" (Ь2=32-" НА" бб)$" Е" (Ъ 2> 60″ И" L2< 120)" TO" С L2=33 j" НА" б б)-" E" L2> 120 «ТО» L2=3 4- 66. ТХ= Т2 [ L2 ] sx=i/(s/(ni-i)) — smx=sy/i/(ni) -epsx=tx* smx — v x=sx/mx — 22. i<(S+Sl)/L)) -SI.T=sy/l/(N2) -Li= N2−1- «E» (Li>30 «Г Li<40)» TO" (Ll=31-" HA" 55) — «E» (L1> 40 T LI <60)" TO" С 71=3 2 'у" KA" 55) — «E» С Ll> 60 «й» Li< 120) «TO» (Ll=33 J" HA" 55)-" E" Ll^ 120 «T O» U=34−55.ty=T2[U]-EPSy=Ty>ад" к" 1^бо)" то" Сь.

    32-" HA" 4) j" E" (I> 6 0 «И» 120) «TO» (Ir=33 -" «A» 4) -" E" lM20″ T0″ (lf=34) — 4. TK=T4[L] -" E" 'i>TK" T0″ (AiFS9.9 -" HA" 5) -TK=T3[L] j" E" T> TK" TO" (AL~9 9 -" HA" 5) -TK-T2[L] -" Е" Т>ТК" ТО" (Л1г=95 -" KA" 5) -TK=TJ [L] -" Е" 1>ТГ TO" (A ]>9o -" нГ5)-а1р9о-тт=огз-" на" 6−5.тт=ири-6.ы=м" гд" Т1[з^>6.318 2.9 2,2.35,2.13,2.02,1.94,1.90 Д. 86,1.83,1.81,1.80 Д. 78,1.77,1.76,1. 75 Д «75 Д. 74 Д.73 Д. 73 Д.73 Д. 72 Д.72,1.71,1.71,1.71,1.71,1.70,1. 70,1.70,1.70,1.68,1.67 Д. 66 Д. 65 jT2[34]=12.71,4.30,3.18,2.78,2. 57,2.45,2.37,2.31,2.26,2.23,2.20,2.18,2.16,2.15,2.13,2.12,2.11,2 .10,2.09,2.09,2.08,2.07,2.07,2.06,2.06,2.06,2.05,2.05,2.04,2.04, 2.02,2.00 Д. 98,1.96 -т3[34>63.66,9.93,5.84,4.60,4.03,3.71,3.50,3 .36,3.25,3.17,3.11,3.06,3.01,2.98,2.95,2.92,2.90,2.88,2,86,2.65, 2.83,2.82,2.8,2.80,2.79,2.78,2.77,2.76,2.76,2.75,2.70,2.66,2.62, 2.58-Т4[34]=636.62,31.60Д2.94,8.61,6.86,5.96,5.41,5с04,4.78,4.5 9,4.4,4.32,4.22,4.4,4.07,4.02,3.97,3.92,3.88,3.85,3.82,3.79,3.77, 3.75,3.73,3.71,3e69,3.67fl3o66,3.65,3.55,3.46,3.37,3.29″ К0ь» г’К0Н «О.

    ЗАКЛЮЧЕНИЕ

    .

    Изучено влияние ряда условий выделения и очистки БА ткани головного мозга крыс экстракцией органическими растворителями на величину и линейность выхода определяемых соединений. Рекомендованы оптимальные величины ряда параметров экстракционных процедур. Благодаря оптимизации экстракционных процедур извлечения из ткани и очистки БА, а также химических процедур получения их флуорофоров и операций измерения флуоресценции наг®предложено шесть новых высокоэффективных вариантов экстракционного флуориметрического метода определения НА, ДА и 50 Т в структурах головного мозга весом 50−300 мг, удобного для использова-. ния в массовых исследованиях (методические варианты Мэ 11−15,19). В пяти из них возможно также определение и 50ИУК (MI-I3,I5,I9). В двух из пяти последних методических вариантов наряду с БА и 50НУК возможно также одновременное определение ШС (J& 15 и 19). Обеспечена возможность проведения всех процедур ограниченным (1−3) числом сотрудников за счет увеличения удобства, эффективности и надежности метода.

    Следует особо отметить высокий и линейный выход ДА в методическом варианте ЖЕ4 (101.4*9.9, 97.9+8.6 и 97.4+5.3% соответственно) для количество 200, 400 и 800 нг ДА, добавляемых к гомо-генату 300 мг ткани мозга). Нам не известны другие методы выделения ДА экстракцией органическими растворителями. со столь полным выходом этого соединения в тканевом стандарте. Благодаря оптимизации метода значительно повышен также выход ГВК. В наших методических вариантах Н5 и 1519 выход ГВК составил в среднем соответственно 95,8 и 79,5%, в то время как в исходном методе Хобрих и Дензер /82/ выход этого соединения 56%.

    Оптимизированный нами экстракционный флуориметриче с кий метод определения биогенных аминов является одним из наиболее эффективных методов изучения функциональной роли БА ЦВС, благодаря: а) возможности одновременного определения большого числа проб (>100 проб) б) высокой скорости анализа (> 100 проб/день) — в) простоте и удобству выполнения всех процедург) возможности определения в одной пробе мозга НА, ДА, 5-ОТ и 5-ОИУК.

    Достоинства оптимизированного экстракционного флуориметрического метода позволили нам использовать его при комплексном изучении ряда актуальных вопросов роли БА в функционировании ЩС в сочетании с физиологическими методами.

    Предложенный метод перспективен для использования при разработке новых высокочувствительных методов определения биогенных аминов в количествах менее I пкг — особенно в комплексе с микро-спектрофлуориметрией.

    Показать весь текст

    Список литературы

    1. О.М. Современные данные о механизмах высвобождения и захвата катехоламинов, возможности и перспективы их фармакологической регуляции. ЖВХО им. Д. И. Менделеева, 1976, т.21, № 2, с.165−17I.
    2. И.П. Нейрохимические аспекты патогенеза хронического алкоголизма. В кн.: Патогенез, клиника и лечение алкоголизма, М., 1976, с.15−19.
    3. В.И., Азарашвили А. А. Роль биогенных аминов в процессах фиксации и воспроизведения информации. В сб.: «Нейро-химия и физиология синаптических процессов», Пущино, 1976, с.157−168.
    4. И.П., Мюльберг А. А., Садикова Н. В., Сатинский И. А. «Химия белка», часть I, под ред. Ашмарина И. П., издательство Ленинградского университета, 1968, с. 185.
    5. О.Е., Калмыков B.JI. Изменение уровня биогенных аминов в мозге крыс при интоксикации этанолом. Бюл.эксперим. биологии и медицины, 1980, № 2, с.182−184.
    6. Н.В., Калмыков В. Л. и Катков Ю.А. Уровни биогенных аминов в головном мозге крыс с разной устойчивостью к аудио-генным судорогам. Физиол.ж. СССР, 1981, т.67, F 12, с.1876−1878.
    7. С.И. А.с. 570 778 (СССР). Перистальтический дозатор.-- опубл. в Б.И., 30.08.1977, № 32 (приоритет 4.02.1976).
    8. А.Ю. Моноаминэргичесйв системы мозга. М., изд. Наука, 1976, с. 192.
    9. Г. А. Низкомолекулярные регуляторы зародышевого развития. Изд. «Наука», М., 1967.
    10. Г. А. Биогенные моноамины в донервном периоде филогенеза и онтогенеза. В сб.: «Катехоламинэргические нейроны» / под ред. Турпаева Т. М. и Буданцева АЛО./, М., изд. «Наука», 1979, с.5−16.
    11. Р.Н., Крыжановский Г. Н. Функциональнальная биохимия синапсов. М.- изд. «Медицина», 1978, с. 328.
    12. В.З. Аминооксидазы и их значение в медицине. М., изд. Медицина, 1981, с. 336.
    13. Е.А. Эмоциональная память и биогенные амины. В кн.: «Структурно-функциональные основы механизмов памяти.1. М., 1976, с.98−119.
    14. . Е.А. Эмоциональная память и ее механизмы. Изд. „Наука“, М., I960, с.147−154.
    15. Е.А., Катков Ю. А., Калмыков B.JI. и Бобкова Н.В. Обучение крыс с различной эмоциональной реактивностью и ее связь с моноаминами мозга. Ж.высш.нерв.деят., 1981, т.31, № б, с.1238−1246.
    16. Е.В., Генкин А. А. Применение критериев непараметрической статистики для оценки различий двух групп наблюдений в медико-биологических исследованиях. Изд. „Медицина“, М., 1969, с.9−12.
    17. С.И., Калмыков В. Л., Буданцев АЛО. Влияние некоторых фармакологических препаратов на уровень биогенных аминов в центральной нервной системе. В сб.: „Нейрохимия и физиология синаптических процессов“, 1976, Пущино, с.101−115.
    18. fi.JI. Модификация флюориметра Эш-ЗМА для определения биогенных аминов. Лаб. дело, 1981, № II, с.695−698.
    19. В.Л. Современные методы количественного определения катехоламинов и серотонина. Лаб. дело, 1982, № 7, с.31−36.
    20. Каталог цветного стекла. М., „Машиностроение“, 1967, с. 62, с черт.
    21. А.А., Ручкина А. С. Использование приставки к флюори-метру ЭФ-ЗМА для повышения чувствительности прибора. Лабораторное дело, 1979, № 4, с. 249.
    22. .М., Нечаев Н. В. Чувствительный и быстрый метод одновременного определения дофамина, норадреналина, серотонинаи 5-оксииндолуксусной кислоты в одной пробе. Лабораторное дело, 1979, № 5, с.301−303.
    23. В.Г. Недостаточность системы моноаминооксидаз -- вероятный патогенетический фактор шизофрении (обзор).
    24. Журнал невропатологии и психиатрии имени С.С.Корсакова», 1974, т.74, № 8, с.1254−1263.
    25. П.П. Приготовление растворов для химико-аналитических работ. М., 1964, с.202−210.
    26. Л.В. Формирование поведения животных в норме и патологии, М., изд-во МГУ, I960.
    27. М.Д., Бакшеев Н. С. Биохимические основы механизма действия серотонина, изд. «Наукова думка», К., 1974.
    28. .Н., Бердышева Л. В., Волина Е. В. Одновременное определение катехоламинов и серотонина после их очистки на ионообменной смоле. Вопросы медицинской химии, 1975, т.21, с.317−321.
    29. Э.Ш., Меньшиков В. В. Клиническая биохимия катехоламинов. М., изд. «Медицина», с. 304.
    30. В.В. Методы клинической биохимии гормонов и медиаторов. М., 1969, с.87−118.
    31. В.В. Гуморальные механизмы регуляции функций организма в норме и патологии. М.: «Медицина, 1979, с. 254.
    32. Т.Г. Изменение содержания биогенных аминов у крыс при остром и хроническом отравлении алкоголем. Фармакол. и токсикол., 1978, № I, с.49−52.
    33. В.О. Исследование некоторых процессов обмена катехоламинов и их функционального значения. В сб.: „Физиология и биохимия биогенных аминов“, М., „Наука“, 1969, с.30−34.
    34. С.А., Каминский А. А. Роль ориентировочного и оборонительного компонентов в поведении белых крыс в условиях „открытого поля“. Ж.высш.нервн.деят., 1980, т.30, № 4,с.704.
    35. В.Ю. Статистический анализ в физиологических и медицинских исследованиях. М.: Наука, 1975,
    36. A.M., Осинская В. О. О природе, свойствах и значении флуоресценции продуктов, образующихся приокислении адреналина и норадреналина. Укр.биохим.журн., 1956, т.28, № 3, с.401−407.
    37. Aghajanian G.K., Roseccrans J.A., Sheard M.H. Serotonin: release in the f. orebrein by stimulation of midbrain raphe. -- Science, 1967, v.154, p.401−403.
    38. Anden U.E., Dahlstrom A., Fuxe K., Olson L., Ungerstedt H. A serending noradrenaline neurons from the pons and medulla oblongata. Experientia, 1966, Ж 33, p.44−46.
    39. Andersen P.I., D’loro K. Purification and properties of catechol-o-methyltransferase. Biochem.Pharmacol., 1968, v.17, p.1343−1349.
    40. Ansell G.B., Beeson M.F. A rapid and sensitive procedure for the combined assay of noradrenaline, dopamin and serotonin in single brain samples. — Analytical Biochemistry, 1968, v. 23, p.196.
    41. Artigas i1., Gelpi E. A new Mass fragmentagraphic method for the simultaneous analysis of tryptophan, tryptamine, indole-3--acetic acid, serotonin, and 5-hydroxyindole-3-acetic acidin the same sample of rat brain. Anal.Biochem., 1979, v.92, p.233−242.
    42. Aures D., Fleming R. and Hakanson R. Separation and detection of biogenic amines by thin- layer chromatography. J. Chroma-tog., 1968, v.33, p.480−493.
    43. Bacopoulos H.G., Blatnagar R.K., Van Orden L.S. The effects of subhyptonic doses of ethanol on regional cateholamine turnover. J.Pharmacol.Exp.Ther., 1978, v.204, И 1, p.1−10.
    44. Barbeau A. Biochimie of traitement de la maladie, de Parkinson. Laval med., 1970, v.41, p.902−905.
    45. Blashko H. Introdaction Catecholamines 1922−1971. In „Handbook of Experimental Pharmacology“, v. XXXIII, Springer--Verlag, Berlin-Heldelberg-New York, 1972, p.1−15.
    46. Borodin S.I. U.S.Patent N 4 252 447 (USA) Peristaltic Batcher and Peristaltic Batching System Realized Therewith. Printed in U.S.Patent, Feb.24, 1981.
    47. Broadhurst P.L. Methods of psychogenetic analysis. Finn. Found.Ale.Stud., 1972, v.20, p.97.
    48. Bryson G. Biogenic amines in normal and abnormal behavioral states. Glin.Chem., 1971, v.17, p.5−26.
    49. Campuzano H.C., Wilkerson J.E. and Horvath S.M. Fluorometric Analysis of Epinephrine and Norepinephrine. Analytical Biochemistry, 1975, v.64, p.578−587.
    50. Chang C.C. A sensitive method for spectrophotofluorometric assay of camecholamines. Int. J. Neuropharmacol., 1964, v.3, p.643−649.
    51. Chopole C.T., Brahmankar P.M., Shripad V.N. neurochemical aspects of ethanol dependence and withdrawal reactions in mice. J.Pharmacol.Exp.Ther., 1977, v.200, N 2, p.314−319.
    52. Ciaranello R.D., Patrick R.L. Catecholamine neuroregulators.-- In: „Psychopharmacology“, 1977, Edited by Barchas, J.D., Berger P.A., Ciaranello R.D., Oxford Univ. Press: N.Y., p.16−32.
    53. Ciarlone A.E. Further Modification of a Fluorometric Method for Analyzing Brain Amines. Microchem.J., 1978, v.23, „p.9−12.
    54. Cohen E.L. and Wurtman R.J. Nutrition and Brain Neurotransmitters. In „Nutrition“, ed. by M. Winick, Plenum Press, New York, 1979, p.103−132.
    55. Cox R.II., Jr. and Pernach J.L. A sensitive rapid and simple method for the simultaneous spectrophotofluorimetric determination of norepinephrine, dopamine, 5-hydroxytryptamine and 5-hydroxy-indoleacetic acid in directe areas of brain.
    56. J. of Neurochemistry, 1973, v.20, p.1777−1780.
    57. Crow T.J. Ueurotransmitter-related pathways: the structure and function of central monoamine neurones. In: „Biochemical correlates of brain structure and function, Academic Press, H.Y.-L., 1977, p.137−175.
    58. Cuello A.C. The Radioenzymalic Assay of Catecholamines. -- In „Neurobiology of Dopamine“ (Eds. A.S.Horn, J. Korf, B.H.C.Wosterink). Academic Press Inc. London and New York, 1979, p.77−88.
    59. Curzon G., GremA. „Rapid method for the determination of 5-Hydroxytryptamine and 5-hydroxyindoleacetic acid in small regions of rat brain“. Brit.J.Pharmacol., 1970, v.39,p.653−656.
    60. Dahlstrom A., Fuxe K. Evidence for the existence of mono-amine-contaning neurons in the central nervous system. I. Demonstration of monoamines in the cell bodies of brain stem neurons. Acta physiol.scand., 1965“ v.62, suppl.232, p.1−55.
    61. Elliott G.R., Edelman A.M., Renson J.F., Berger Ph.A. Indoleamines and other neuroregulators. In: „Psychophar-macology“, 1977“ Edited by Barchas J.D., Berger Ph.A., Ciaranello R.D., Oxford Univ. Press, N.Y., p.33−50.
    62. Falk В., HiHarp Ж.Е., Thieme G., Torp A. Fluorescence of catecholamines and related compounds condensed with formaldehyde. -,"J.Histochem.Cytochem.», 1962, v.10, p.348−554.
    63. Pike, К.R., and Curran, D.J. Determination of catecholamines by thin-layer linear sweep-voltampimetry. Anal.Chem., 1977, v.49, p.1205−1210.
    64. Platmork Т., Jacobsen S.IV. and Haavik J. Pluorometric Detection of Tryptophan, 5-Hydroxytryptophan, and 5-Hydro-xytryptamine (Serotonin) in High-Performance Liquid Chromatography. Analytical Biochemistry, 1980, v.107, p.71−74.
    65. Puxe K., Hokfelt Т., Ungerstedt U. Localization of indoleal-kylamines in CITS. Adv.Pharmacol., 1968, v.6, p.236−251.
    66. Glowinski J. and Iversen L.L. Regional studies of catechola3mines in the rat brain. I. The disposition of H -noretof the brain. J. Neurоchemistry, 1966, v.13, N 8, p.655−671.
    67. Graham L.T. and Aprison M.H. Distribution of some enzymes associated with the metabolism of glutamate, aspartate,
    68. Y-aminobutyrate and glutamine in cat spinal cord. J. Neurochem., 1969, v.16, p.559−566.
    69. Graham-Smith D.G. The metabolic compartmentation of brain monoamines. In: «Metabolic compartmentation in the brain», Mecmillan, 1973, p.47−56.
    70. Hamaji Ы., Seki Т. Estimation of catecholamines in human plasma by ion-exchange chromatography coupled with fluoro-metry. tT.Chromatogr. — Bioraed.Appl., 1979, v.163, P"329--336.
    71. Hamon Ы., Glowinski J. Regulation of serotonin synthesis.- In: «Minireviews of the Ueurosciencesl', Pergamon Press, Oxford etc.: 1975, p.275−290.
    72. Hansson C., Rosengren E. Quantitative analysis of 5-hydroxy-tryptamine in biological material by high performance liquid chromatography and electrochemical detection. Anal.Lett., 1978, v.B.11, p.901−912.
    73. Haubrich D.R. and Denzer J.S. Simultaneous Extraction and Fluorometric Measurement of Brain Serotonin, Catecholamines, 5-Hydroxyindoleacetic Acid and Homovanillic Acid. Analyt. Biochem., 1973, v.55, p.306−312.i
    74. Haushalter J., Morris M.D. Catecholamine assay by coherent Raman spectroscopy. „29th Pittsburg Conf. State Art.Anal. Chem. and Appl.Spectrosc., Cleveland, Ohio, 1978, Abstr.“, Monroeville, Pa, s.a., p.304.
    75. Himms-Hagen J. Effect of catecholamines on metabolism. In: „Catecholamines“ (H.Blaschko and E. Muscholl, eds.), Springer--Verlag, Berlin, 1972, p.363−462.
    76. Hoffer A. Adrenochrome in blood plasma. Am.J.Psychiat., 1958, v.114, p.752−753.
    77. Hoffer A., H. Osmond (with a contribution by T. Weckowicz).- The Hallucinogens, Academic Press, H.Y.-L., 1967, p.267−442.
    78. Imai K. and Tamura Z. Liquid chromatographic determination of urinary gopamine and norepinephrine as fluorescamine derivatives.-Clinica Chimica Acta, 1978, v.85, p.1−6.
    79. Israel J., Kalant H., Le Blanc A.E. Effects of lower alcohols on potassium transport and microsomal adenosine-triphosphatase activity of rat cerebral cortex. Biochem.J., 1966, v.100, p.27−33.
    80. Jacob K., Vogt W., Knedel M. and Schwertfeger G. Quantitation of adrenaline and noradrenaline from human plasma by combined gas chromatography-high resolution mass fragmento-graphy. J.Chromatogr. — Biomed.Appl., 1978, v.146, p.221--226.
    81. Karoum P. and Heff N.H. Analysis of Dopamine and its Metabolites in Biological Materials by Mass Fragmentography, -In: Neurobiology of Dopamine (Eds. A.S.Horn, J. Korf, B.H.C.Westerink) Academic Press Inc., London and Hew York, 1979, p.63−76.
    82. R., Mefford I., Оке A., Strope E., Conti J.,
    83. Wightman R.M., Plotsky P. and Adams R.N. Electrochemical methods to measure catecholamines in brain. Structure and function of monoamine enzymes (E.Usdin, H. Weiner, M.B.H.Youdim ed.) Marcel Dekker, Hew York, 1977, p.741−760.
    84. Lahti R.A. Alcohol, aldehydes and biogenic amines. Adv. Exp.Med.Biol., 1975, v.56 (Biochem.Pharmacol. Ethanol.), p.239−253.97» Lamy M. Les maladies hereditaires du metabolisme. «Annee biol.1970, v.9, N 11−12, p.603−617.
    85. Levin J.A. Separation of horepinephrine and its five major metabolites by paper chromatography. J.Chromatogr., 1972, v.67, p.129−138.
    86. Lindvall 0. and Bjorlund A. The organization of the ascendr-ing catecholamine neuron systems in the rat brain as revealed by glyoxylic acid fluorescence method. Acta Physiol. Scand., Suppl., 1974, v.412, p.1−18.
    87. Lyness W.H., Friedle N.M. and Moore K.E. II. Measurement of 5-hydroxytryptamine and 5-hydroxyindoleacetic acid in discrete brain nuclei using reverse phase liquid chromatography with electrochemical detection. Life Sci., 1980, v.26, p.1109−1114.
    88. Maickel R.P., Miller P.P. Fluorescent products formed by-reaction of indole derivatives and O-phtalaldehide. Anal. Chem. 1966, v.38, p.1937−1938.
    89. Maickel R.P., Raymond H., Cox J.R., Saillant J., Miller P.P. A method for the determination of serotonin and norepinephrine in discrete areas of rat brain. In t .J. ITeur о Pharmacol., 1968, v.7, p.275−281.
    90. Mandell A.J., Knapp S., Hsu L.L. Regulation of central serotoninergic synapses. Life Sci. 1974, v.14, N 1, p.1−17.
    91. Maruyama J., Oshima Т., and Nakajima E. III. Simultaneous determination of catecholamines in rat brain by reversed--phase liquid chromatography with electrochemical detection. Life Sci., 1980, v.26, p.1115−1120.
    92. Metcalf G. A Repid Method for the Simultaneous Determination of noradrenaline Dopamine and 5HT in Small Samples of Brain Tissue. Analytical Biochemistry 1974, v.57,p.316−320.
    93. Montagu K.A. Adrenaline and noradrenaline concentrations in rat tissues. Biochem.J., 1956, v.63, p.559−565.
    94. Moya J., Julian-Ramo R. Estudio sobre las aminoacidopatias. I. La fenilcetonurice (enfermedad de Polling idiotez fenil-piruvica), aminoacidopatia clave. Rev. sanid e hig. publica, 1970, v.44, p.225−257.
    95. Mroz E.A. and Lechene G. Fluorescence Analysis of Picoliter Samples. Anal.Biochem., 1980, v.102, p.90−96.
    96. Nieoullon A., Cheramy A., Glowinski J. Release of dopamine in vivo from cat substantia nigra. Nature (London), 1977, v.266, N 5600, p.375−377.
    97. Payza A.N. and Manon M. Modification of Spectrofluorometric Determination of Aminochromes in Human Plasma. Analitical Chemistry, 1960, v.32, p.17−19.
    98. Peuler J. D- and Jonson G.A. Simultaneous single isotoperadioenzimatic assay of plasma norepinephrine, epinephrine and dopamine. Life Sci., 1977, v.21, p.625−636.
    99. Plaitakis A., Van Woert M.H., Hwang E.C., Berl S. The effect of acute thiamine deficiency on brain tryptophan serotonin and 5-hydroxyindoleacetic acid. J.Neurochem., 1978, v.31, p.1087-Ю89.
    100. Ponzio F. and Jonsson G. A rapid and simple method for the determination of picogram levels of serotonin in brain tissue using liquid chromatography with electrochemical detection. J.Neurochem., 1979, v.32, p.129−132.
    101. Reisch J., Alfes H., Jantos N. und Mollmann H. Mass spectra of 1-dimethlaminonphthalene-5-sulphonyl derivatives of biogenic amines. Acta Pharm. Succica, 1968, v.5, p.393−397.
    102. Ruffolo R.R., McGreery R.L., Patil P.N. A kinetic analysis of acatecol-specific binding site in microsomal fraction from the rabbit aorta. Eur.J.Pharmacol., 1976, v.38, N 2, p.221−232.
    103. Saavedra J.LI., Brownstein M., Axelrod J. A specific and sensitive enzymatic-isotopic microassay for serotonin in tissues. J. Pharmacol, and Exp.Ther., 1973> v.186, H 3″ p.505−575.
    104. Saavedra J.M. Microquantitation of neurotransmitters in specific areas of the central nervous system. International review of Neurobiology, 1979, v.21, p.259−274.
    105. Sadavongvivad C. Pharmacological significance of biogenic amines in the lungs: 5-hydroxytryptamine. Br.J.Pharmac., 1970, v.38, p.353−365.
    106. Scott R.P.Y/. Microbore Columns in Liquid Chromatography. -- J.Chromatogr.Sci., 1980, v.18, p.97−115.
    107. Sheard M.H. and Zolovick A.J. Serotonin: Release in cat brain and cerebrospinal fluid on stimulation of midbrain raphe. Brain Res., 1971, v.26, p.455−458.
    108. Shellenberger IvI.K. and Gordon J.H. A rapid, Simplitied Procedure for simultaneous Assay of Norepinephrine Dopamine and 5-Hydroxy-tryptamine from Discrete Brain Areas. Analytical Biochemistry, 1971, v.39, p.356−372.
    109. Shore P.A. and Olin J.S. Identification and Chemical assay of Norepinephrine in brain and other tissues. J.Pharmacol. Exptl.Therap. 1958, v.122, p.295−300.
    110. Snyder L.R., Kirkland J.J. Introduction to modern liquid chromatography. V/iley-Interscience publication, II.Y., 1974.
    111. Sole M.J., Van Loon G.R., Shum A., Lixfield M., MacGregor D.C. Left Ventricular Receptors Inhibit Brain Serotonin Heurones During Coronary Artery Occlusion. Science, 1978, v.201, IT 18, p.620−622.
    112. Spann W.J., Mousa J.J., Aaron J.J. and Winefordner J.D. An Analytical study of Catecholamine Metabolites by Phosphori-metry. Anal.Biochem., 1973, v.53, p.154−167.
    113. Spa no P.P. and Ueff 1T.H. Procedure for the Simultaneous Determination of Dopamine, 3-Methoxy-4-hidroxyphenylacetic Acid and 3,4-Dihydroxyphenylacetic Acid in Brain. Anal. Biochem., 1971, v.42, p.113−118.
    114. Spector S., Shore P.A. and Brodie B.B. Biochemical and pharmacological effects of the Monoamine oxidase inhibitors iproniazid, 1-phenyl-2-hydrazinopropane (JB 516) and 1-phe» nyl-3-hydrazinobutane (IB 835). J.Pharmacol., 1960, v.128, II 1, p.15−21.
    115. Sutherland E.W. and Robinson G.A. The role of cyclic-3', 5'--АЫР in responses to catecholamines and othez- hormones. -Pharmacological Reviews, 1966, v.18, II 1, Part I, p. 145−161.
    116. Szara S., J. Axelrod and S.Perlin. Is adrenochrome presentin the blood? Am.J.Psychiat., 1958, v.115, N 2, p.162−163.
    117. Takeuchi T. and Ishii D. Ultra-micro high-performance liquid chromatography. J.Chromatogr., 1980, v.190, p.150−155.
    118. Taylor K.M. Classical Fluorimetry. In: «The neurobiology of Dopamine», /eds. Horn A.S., ICorf J., V/esterink В.Н.С./, -Academic Press, L.-N.Y., 1979, p.31−40.
    119. Yersteeg D.H.G. and V/urtman R.J. Synthesis and release of monoamine neurotransmitters: regulatory mechanisms. In: «Molecular and functional Neurobiology. Ed. Gispen. Elsevier scientific publishing company, Amsterdam ets., 1976, p.201−234.
    120. Weenshilboum R.M. Serum dopamine- В-hydroxylase. Pharmacol.Rev., 1979, v-.30, N 2, p. 133.
    121. V/eil-Malherbe H. and Bone A.D. On the occurence of adrenaline and noradrenaline in blood. Biochem.J., 1954, v.58, p.132−141.
    122. Westerink B.H.C. Semiautomatea Fluorimetry. In: «Neurobiology of Dopamine» (Eds. A.S.Horn, J. Korf, B.H.C.V/esterink), Academic Press Inc., London and New York, 1979, p.41−52.
    123. Wise D.C. An improved and simplified method for the fluoro-г metric determination of brain serotonin. Anal.Biochem., 1967, v.18, p.94−101.
    124. Young J.В., Landsberg L. Catecholamines and the sympathoadrenal system: the regulation of Metabolism. In: «Contemporary Endocrinology», vol.1, ed. by S.H.Ingbar, Plenum Medical Book Company, New York and London, 1979, p.245−303.
    Заполнить форму текущей работой

    Сессия? Спокойно!