Борьба с инфекционной бурсальной болезнью кур

Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь

Витебская государственная академия ветеринарной медицины

Курсовая работа

Борьба с инфекционной бурсальной болезнью кур

Витебск — 2011 г.

Общие сведения о болезни Инфекционная бурсальная болезнь (ИББ, болезнь Гамборо, инфекционный бурсит кур) — высококонтагиозная вирусная малоизученная болезнь цыплят 2−15-недельного возраста, характеризующаяся поражением бурсы Фабрициуса, явлениями нефрозо-нефрита, внутримышечными геморрагиями и диареей. Болезнь, впервые зарегистрированная в округе Гамборо (шт. Делавэр, США) в 1957 году, получило широкое распространение во многих странах Америки, Азии, Африки, в том числе и в странах СНГ. С 1991 года заболевание регистрируется и в Республике Беларусь.

Инфекционная бурсальная болезнь распространена преимущественно в птицеводческих хозяйствах промышленного типа. Причиной этому считают постоянный импорт птицы. Чаще поражаются птицы 3−6-недельного возраста. Сообщалось о самых ранних ее вспышках среди 11-дневных цыплят и самых поздних — в возрасте 84 дней. Заболеваемоть достигает 100%, летальность в среднем составляет 20−40%. Источником заражения служит больная и переболевшая птица, основной путь распространения вируса — аэрогенный. Факторы передачи: продукты убоя птицы, загрязненные корма, вода, одежда и обувь обслуживающего персонала. Различают острое, подострое и хроническое течение болезни. При заражении цыплят 3−6-недельного возраста болезнь, как правило, протекает остро и подостро. При заболевании цыплят до 3-недельного возраста, не содержащих материнских антител, развивается латентная (субклиническая) форма болезни.

Экономический ущерб, наносимый болезнью, обусловлен гибелью цыплят, снижением прироста массы тела, возрастанием процента браковки птиц и тушек. Вирус обладает выраженным иммунодепрессивным действием, избирательно поражающим один из центральных органов иммунной системы птиц — Фабрициеву бурсу. В результате снижается эффективность проводимых вакцинаций против инфекционного ларинготрахеита, ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита, болезни Марека, активизируются секундарные инфекции.

У большинства цыплят, зараженных вирусом инфекционной бурсальной болезни, отмечаются признаки поражения печени, а при бактериологическом исследовании органа выделяют возбудителя сальмонеллеза. Экономические потери в неблагополучных по ИББ хозяйствах значительно увеличиваются из-за проявления осложнений: нередко наблюдают дерматит с обширными некротическими поражения перьевых фолликулов и кожного покрова в области спины и крыльев, гепатит и некротический энтерит, повышается заболеваемость цыплят колибактериозом, болезнью Марека, эймериозом. Опасность иммунодеппрессии данного вируса состоит не только в снижении иммунной реакции организма птиц, но и в том, что вырабатывающиеся к разным антигенам антитела в период болезни и после нее в функциональном отношении неполноценны.

Вирус инфекционной бурсальной болезни

Вирус впервые открыт и описан как самостоятельный возбудитель в 1962 году. По современной классификации его относят к семейству Birnaviridae.

Устойчивость. Вирус устойчив к эфиру, хлороформу и УФ — облучению. При температуре +56°С сохраняется 5 ч., при +60°С — 30 мин., а при 30 °C в присутствии 0,5% фенола — в течение 1 ч. При воздействии 0,5% раствора формалина инактивируется за 6 ч., препаратами йода — за 2 мин., 0,5% хлорамином — за 10 мин.

Антигенные вариабельность и родство. Выявлено 2 серотипа вируса: Сu- 1 (содержит белки VP- 1, VP- 2, VP- 3, VP- 4 и VPX), выделенный от цыплят, и 23/82 (содержит белки VP- 1, VPX, VP- 3 и VP- 4), выделенный от индюшат. Антигенное родство этих серотипов не превышает 10−30%.

Спектр патогенности. В естественных условиях вирусом ИББ поражаются куры всех пород, но наиболее тяжело переболевают цыплята породы белый леггорн. Наиболее чувствительна птица в возрасте 3−6 нед. При заражении кур-несушек, а таже 1−10-дневных цыплят не отмечается симптомов болезни.

Локализация вируса. На 3- й день после экспериментального заражения 3- 5- недельных цыплят вирус накапливается в Фабрициевой бурсе, селезенке и в более низкой концентрации — в мозгу и крови. У однодневных цыплят через 3 дня после инокуляции вируса отмечена его высокая концентрация в бурсе Фабрициуса, печени и почках. При экспериметальном заражении цыплят вирус удается выделять в течение 10 дней, однако патоморфологические изменения в бурсе Фабрициуса сохраняются в течение 10 недель после заражения.

Антигенная активность. Уже на 21-й день после заражении вирусом цыплят 3−5-недельного возраста в сыворотке крови обнаруживают вируснейтрализующие (в титрах до 1:718) и преципитирующие антитела (в титрах до 1:640). Антитела у кур-несушек передаются потомству трансовариально. В сыворотке крови цыплят, полученных от иммунных кур, специфические противовирусные антитела обнаруживаются в течение 3−4 недель после вылупления.

Экспериментальная инфекция. Экспериментальное заражение производят на 20−30-дневных цыплятах инокуляцией вирусного материала на коньюнктиву, а также перорально. Заражение сопровождается развитием у птиц клинических признаков и патомофологических изменений, характерных для этой болезни.

При интраперитонеальном и интрацеребральном заражении 1−3-дневных белых мышей штаммом Becht отмечали зуд, атаксию, кому, а в головном мозгу — негнойный лимфоцитарный энцефалит. Возможно интрацеребральное заражение крыс и хомяков.

Заражение вирусом индеек сопровождается образованием вируснейтрализующих и преципитирующих антител при отсутствии клинических признаков болезни. Голуби, гуси, перепела и утки не восприимчивы к данной инфекции.

Культивирование. Вирус культивируют в куриных эмбрионах (КЭ), свободных от материнских антител, при заражении их в аллантоисную полость или на хорион-аллантоисную оболочку. Гибель эмбрионов наступает на 3−8-й день после заражения.

Вирус хорошо репродуцируется в культуре почечных клеток куриного эмбриона, вызывая на 3−5-й день после заражения ЦПД. В культуре фибробластов КЭ вирус образует бляшки. Показана возможность культивирования вируса в перевиваемой культуре клеток МА-104, Vero.

Гемагглютинирующие свойства. В обычных условиях, без предварительной специальной обработки, вирус не обладает гемагглютинирующими свойствами.

Патогенез

Патогенез инфекционной бурсальной болезни изучен недостаточно полно. Установлено, что клетками-мишенями для репродукции вируса являются лимфоциты Фабрициевой бурсы цыплят. Высокочувствительными к вирусу оказались В-лимфоциты, несущие на поверхности иммуноглобулины класса М. Вирус обладает выраженным цитопатическим действием, вызывая некроз лимфоидных узелков и воспалительные процессы в интерстициальной ткани бурсы Фабрициуса. Гибель большого количества лимфоидных элементов обуславливает развитие вторичного иммунодефицита у переболевшей птицы.

Показано также, что латентное течение ИББ сопровождается явлениями атрофии и делимфатизации бурсы Фабрициуса на фоне отсутствия или очень слабого проявления воспалительной микрои макрофагальной реакции в интерстиции органа. Эта форма болезни также характеризуется развитием иммунодепрессивного состояния у цыплят, связанного с явлениями некроза В-лимфоцитов.

Морфологически некроз лимфоцитов выявляется явлениями кариопикноза, кариорексиса, вакуолизации цитоплазмы с формированием апоптотических телец. Апоптоз, в отличие от некроза, не вызывает выраженной воспалительной реакции. Явления некроза В-лимфоцитов у цыплят при субклинической форме болезни Гамборо обнаруживаются не только в бурсе Фабрициуса, но и в селезенке, цекальных миндалинах и периферической крови.

Патогенез болезни также зависит от воздействия иммунных комплексов, циркулирующих инфицированных лимфоцитов. Кровоизлияния в скелетных мышцах, печени и других органах обусловлены повреждением стенки кровеносных сосудов. Присутствие уратов в почках и увеличение содержания в крови мочевой кислоты свидетельствуют о поражении почек. Повышение активности лактатдегидрогеназы и глутаматооксалаттрансаминазы сыворотки крови подтверждают поражение печени.

Клинические признаки Инкубационный период инфекционной бурсальной болезни короткий. При экспериментальном заражении цыплят клинические признаки появляются через 2−3 дня. Болезнь может протекать остро, подостро и латентно, в зависимости от иммунного статуса поголовья. В чувствительных к болезни группах, как правило, уровень заболеваемости может достигать 100%. При остром течении болезнь длится обычно 4−8 дней.

Характерным симптомом ИББ является диарея, сопровождающаяся выделением водянистого беловато-желтого помета. У больных цыплят наблюдают депрессию, а в более поздней стадии — дрожание головы и шеи, коматозное состояние. Заболеваемость и смертельность быстро нарастают и достигают максимума на 3−4-й день болезни. Отличительными признаками болезни являются внезапность и высокая заболеваемость, быстрое выздоровление поголовья. Летальность может достигать 20−40%. В последующих выводах цыплят повторяющиеся время от времени вспышки протекают менее тяжело и часто проходят незамеченными.

В последние годы значительно увеличилось число вспышек болезни Гамборо, протекающей латентно. При этом инфицирование цыплят ведет к развитию иммунодефицитного состояния у птиц вследствие некроза В-лимфоцитов. В результате снижается эффективность проводимых вакцинаций против ряда вирусных болезней. Отмечаются вспышки хронических респираторных болезней, приводящих к развитию синдрома опухания головы. Из пораженных тканей часто выделяют сапрофитную микрофлору: кокки, псевдомонады и др.

Патоморфологические изменения Трупы павших цыплят обычно хорошо упитаны. При вскрытии отмечают признаки обезвоживания и анемии. Зоб пустой. Ярко выражены и весьма закономерны изменения в бурсе Фабрициуса, поражения которой обнаруживаются и в случаях бессимптомной инфекции. Орган увеличен в 1,5−2,5 раза. Серозная оболочка серо-желтого цвета. Слизистая оболочка отечна, покрасневшая, с кровоизлияниями. В просвете бурсы между складками слизистой оболочки обнаруживают серозно-фибринозный экссудат, в тяжелых случаях — геморрагический экссудат и сыроподобные сгустки фибрина. Отмечают атрофию тимуса, аплазию красного костного мозга, пищеводной и слепокишечных миндалин, серозногеморрагическое воспаление селезенки.

В грудных мышцах, с медиальной стороны бедер и крыльев обнаруживают точечные и пятнистые кровоизлияния. Печень может быть слегка увеличена, на поверхности видны следы от ребер. Почки увеличены, от светло-серого до темно-коричневого цвета, с четким рисунком канальцев и мочеточников, заполненных уратами. Кроме того, отмечают катаральный энтерит, геморрагии в слизистой оболочке железистого желудка и в цекальных миндалинах.

При гистологическом исследовании Фабрициевой бурсы в начальный период отмечают некроз лимфоцитов, а затем и ретикулярной стромы с образованием в большинстве лимфоидных узелков некротического детрита. Могут выявляться атрофированные узелки, железистые структуры и кисты. В тимусе в начале болезни наблюдают делимфотизацию коркового слоя, обеднение лимфоцитами мозговой зоны с одновременным увеличением в ней числа и размеров телец Гассаля и гиперплазией ретикулярных клеток. В красном костном мозге обнаруживается уменьшение общего числа клеточных элементов, активизация макрофагальной реакции. В селезенке больных цыплят выявляют некроз отдельных лимфоцитов в периартериальных муфтах (Т-лимфоциты) и лимфоидных узелках (В-лимфоциты), гиперемию сосудов красной пульпы, микрои макрофагальную реакции. Аналогичные изменения обнаруживаются в эзофагальной и слепокишечных миндалинах.

Патологоанатомический диагноз:

Серозно-геморрагическое или фибринозно-некротическое воспаление бурсы Фабрициуса.

Серозно-геморрагическое воспаление селезенки.

Атрофия тимуса, костного мозга, пищеводной и слепокишечных миндалин.

Точечные и пятнистые кровоизлияния в мышцах бедер и крыльев (с медиальной стороны), в серозных покровах.

Зернистая дистрофия печени и почек, переполнение уратами мочеточников.

Серозно-фибринозный перикардит, аэросаккулит, плевроперитонит, перигепатит (осложнение).

Гисто: тотальный некроз лимфоцитов в бурсе Фабрициуса, тимусе и селезенке, серозно-воспалительный отек интерстициальной ткани, инфильтрация гистиоцитами и псевдоэозинофилами при остром и подостром течении; атрофия и обеднение лимфоцитами бурсы Фабрициуса, тимуса, селезенки, эзофагальной и цекальных миндалин, отсутствие микрои макрофагальной реакции при латентном течении болезни.

Диагностика Диагностика инфекционной бурсальной болезни осуществляется с учетом эпизоотологических данных, клинических симптомов, патоморфологических изменений, а также комплекса лабораторных исследований. Следует учитывать, что данная болезнь трудно выявляется, маскируется другими инфекциями и лишь при типичном течении диагностируется по клиническим признакам и данным патологоанатомического вскрытия. Поэтому на ранней стадии болезни и при латентном течении необходимо проведение лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика ИББ включает выделение вируса на развивающихся SPF-куриных эмбрионах (КЭ) или в культуре фибробластов эмбрионов кур (ФЭК), его идентификацию в реакции нейтрализации (РН) и реакции иммунодиффузии (РИД), постановку биопробы на чувствительных цыплятах, выявление вирусного антигена реакцией иммунофлюористенции (РИФ), реакцией торможения непрямой гемагглютинации (РТНГА), реакцией агглютинации латекса (РАЛ), электронной микроскопией, реакцией встречного иммуноэлектрофореза, а также обнаружение специфических антител в РН, РИД, ВИЭФ, реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), иммуноферментном анализе (ИФА) и проведение гистологических исследований.

Отбор патологического материала. От 5−10-ти трупов павших или убитых с диагностической целью больных цыплят отбирают бурсу Фабрициуса, селезенку, печень, почки. Органы помещают в чистые, сухие, стерильные пенициллиновые флаконы. Материал помещают в термос со льдом и хранят его до отправки в лабораторию.

Для серологического исследования отправляют парные пробы (25−30) сывороток крови больных птиц, взятые с интервалом в 21 день. Полученные сыворотки помещают в чистые, сухие, стерильные пенициллиновые флаконы под резиновыми пробками, помещают в термос со льдом.

Направляемый в лабораторию материал снабжается сопроводительным письмом. В лаборатории материал хранят в замороженном состоянии или заливают 50%- ным водным раствором глицерина.

В лаборатории кусочки патологического материала гомогенизируют на 0,01 М фосфатно-солевом буфере (рН=7,2) или мясопептонном бульоне в соотношении 1:10, трижды замораживают и оттаивают с последующим центрифугированием в течение 30 минут при 5000 об./мин. К надосадочной жидкости добавляют 100 ЕД/мл пенициллина и 0,1 мг/мл стрептомицина, выдерживают в течение 12 часов при 4 °C, проверяют на стерильность.

Выделение вируса на куриных эмбрионах. Для выделения и титрации возбудителя используют SPF-эмбрионы 9-суточного возраста в количестве не менее 10. Приготовленный гомогенат в количестве 0,2 мл наносят на хорион-аллантоисную оболочку или в аллантоисную полость эмбриона. В контроле оставляют 5- 10 незараженных эмбрионов.

Гибель куриных эмбрионов в течение первых суток считают неспецифичной. При наличии в исследуемом материале вируса гибель КЭ наступает на 3−5 сутки. Погибшие эмбрионы вскрывают для обнаружения специфических патологоанатомических изменений. Хорион-аллантоисная оболочка (ХАО) отечная. Отмечают отставание в росте и развитии, наличие серозногеморрагических отеков кожного покрова в области головы, шеи, конечностей и брюшной стенки. В легких обнаруживают застойную гиперемию и отек легких, некротический нефроз, зернистую дистрофию миокарда, увеличение печени и селезенки. Фабрициева бурса обычно не поражается.

От павших эмбрионов с задержкой в росте и выраженными патоморфологическими изменениями отбирают аллантоисную жидкость и ХАО в стерильные пробирки и проверяют на стерильность путем посева 0,2 мл жикости на МПА и МПБ. Принадлежность выделенного агента к вирусу болезни Гамборо определяют путем постановки РН и РИД.

Заражение культур клеток. Для изоляции вируса используют 24−48-часовые культуры фибробластов КЭ. Срок наступления ЦПД зависит от дозы вируса и числа пассажей. При первичном его выделении специфические изменения наблюдаются после 2−3 пассажей вируссодержащего материала. ЦПД проявляется через 48−72 часа после заражения культуры клеток и характеризуется вакуолизацией и округлением клеток, явлениями кариопикноза и кариолизиса. Специфичность цитопатических изменений подтверждают постановкой РН.

Биопроба на цыплятах. Для заражения используют 21-дневных SPFцыплят или 35−40-дневную птицу из промышленного стада с хорошо развитыми Фабрициевыми бурсами. Для этого из общего количества цыплят, предназначенных для биопробы, произвольно вылавливают 5−10 голов, убивают, определяют индивидуальные абсолютные массы тела и бурсы, выводят бурсальный индекс (БИ) по формуле:

БИ =? 1000,

где Мс — масса Фабрициевой бурсы (г),

Мт — масса тела птиц Цыплят, в стаде которых индекс бурсы 4 и выше, используют для постановки биопробы. Заражение цыплят с индексом ниже 4 не вызывает острого течения болезни. Определение бурсального индекса имеет важное диагностическое значение, так как у зараженных цыплят отмечается снижение данного показателя в 3- 9 раз.

Перед заражением у отобранных для биопробы 10−20 птиц отбирают пробы сыворотки крови для серологического исследования (РИД, РН, РНГА, ИФА) на наличие антител к вирусу болезни Гамборо. Исследуемый материал вводят интраназально в дозе 0,5 мл.

Биопробу считают положительной, если у зараженных цыплят через 2−5 суток развиваются характерные клинические признаки болезни (диарея, обезвоживание, общее угнетение, грязно-серый перьевой покров). При вскрытии больной и переболевшей птицы отмечают характерные патологоанатомические изменения.

Через 15 дней после заражения у оставшихся в живых цыплят проводят повторное серологическое исследование сыворотки крови для выделения диагностического (4-кратного) увеличения титра специфических антител и затем их убивают с целью установления патологоанатомических изменений.

Реакция нейтрализации. Ее используют для идентификации вируса болезни Гамборо и для обнаружения специфических противовирусных антител. Реакцию ставят на куриных эмбрионах. В ней используют нормальную и специфическую гипериммунную сыворотки, а в качестве антигена выделенный на КЭ вирус. Перед постановкой реакции сыворотки инактивируют в водяной бане при +56°С (30 мин), после чего в них добавляют пенициллин (1000 ЕД/ мл) и стрептомицин (1мг/мл).

Гипериммунную и нормальную сыворотки разливают сухими стерильными пипетками по 0,5 мл в стерильные пробирки. Затем в каждую из них по 0,5 мл испытуемого антигена в разведениях от 10^-1 до 10^-9. После встряхивания пробирки выдерживают при +37°С в течение 30 минут. Полученные смеси в дозе 0,2 мл вводят в аллантоисную полость 9- суточных эмбрионов. Дважды в сутки проводят овоскопию. Павшие эмбрионы вскрывают. На 10-й день для выявления специфических изменений в органах и тканях все эмбрионы вскрывают. Результаты РН выражают индексом нейтрализации, который определяют по общепринятой методике. Реакция считается положительной, если разница в титрах с нормальной и гипериммунной сыворотками составляет 2 lg и более.

Реакция иммунофлюоресценции. Является методом экспрессдиагностики, так как позволяет установить диагноз в течение 2−3 часов с момента доставки патологического материала.

Из бурсы Фабрициуса павших или убитых с диагностической целью птиц на тонких, сухих, обезжиренных предметных стеклах готовят мазки-отпечатки (не менее 3), фиксируют 10−20 минут в ацетоне, дважды отмывают в двух сменах 0,01 М фосфатносолевого буфера (рН=7,2−7,4), затем высушивают и окрашивают по общепринятой методике. Контрольные мазкиотпечатки готовят из бурсы здоровых цыплят.

Реакцию считают положительной, если на всех препаратах обнаружено не менее 3-х лимфоцитов со специфическим яркозеленым свечением антигена в цитоплазме (мелкие гранулы или диффузный ореол вокруг ядра).

Кроме мазковотпечатков для РИФ можно исследовать криосрезы бурсы Фабрициуса. Для этого орган замораживают в петролейном эфире, охлажденном до минус 76 °C в смеси ацетона и сухого льда. Затем их примораживают к блоку микротома. Срезы готовят толщиной 4−5 мкм.

Реакция торможения непрямой гемагглютинации. Данная методика может применяться для индикации вирусного антигена в патологическом материале, а также идентификации вируса, выделенного в КЭ и КК.

Из патологического материала от больных и павших птиц, хорион-аллантоисных оболочек павших после заражения КЭ готовят гомогенат на стерильном 0,85%-ном растворе натрия хлорида (рН=7,2−7,4) в соотношении 1:1. После трехкратного замораживания и оттаивания гомогенат центрифугируют при 5000 об./мин. в течение 25 минут. Надосадочную жидкость сливают для исследования в РТНГА. Пробы аллантоисных жидкостей используются в нативном виде после центрифугирования 15−20 минут при 3000 об./мин. Таким же способом готовят суспензии от контрольных птиц и КЭ. Кроме того, используют специфическую иммунную сыворотку к вирусу болезни Гамборо и положительный эритроцитарный антиген из набора диагностикумов БелНИИЭВ для серологической диагностики данной болезни в РНГА.

РТНГА ставят микрометодом с использованием микротитратора Такачи. При этом, в первый ряд лунок панели готовят в объеме 0,025 мл двукратное разведение испытуемого материала от 1:2 до 1:128. Для этого в каждую лунку вносят 0,025 мл 0,85%-ного раствора натрия хлорида, содержащего 0,5% глицерина. В первую лунку вносят 0,025 мл испытуемого материала и, перемешивая, 0,025 мл переносят в другую лунку и т. д. (до разведения 1:128. Во втором ряду таким же образом готовят безвирусную суспензию. К каждому разведению обоих рядов добавляют 0,025 мл иммунной сыворотки, разведенной на 1−2-кратных разведений меньше, чем ее предельный титр в РНГА. Панель со смесями встряхивают и помещают в термостат на 60 мин. при 37 °C. Учет реакции осуществляют после оседания эритроцитов.

Реакция считается положительной, если в первом ряду с испытуемым материалом произойдет торможение агглютинации в первых двух-трех лунках при условии полной агглютинации второго ряда.

Реакция агглютинации латекса используется для индикации вирусного антигена. Патологический материал гомогенизируют в 0,01 М фосфатносолевом буфере (рН=7,2) в соотношении 1:1, трижды замораживают и оттаивают. Вируссодержащую суспензию центрифугируют при 3000 об./мин. 30 минут. Надосадочную жидкость сливают для постановки РАЛ.

Гипериммунную сыворотку к вирусу ИББ получают иммунизацией цыплят инактивированной масляно-эмульсионной вакциной. Из сыворотки выделяют гамма-глобулиновую фракцию осаждением сульфатом аммония.

Латексный антительный диагностикум готовят, смешивая суспензию латекса (2%-ная концентрация частиц) с равным объемом гаммаглобулиновой фракции в соответствующем буферном растворе. Смесь инкубируют 16−18 часов при 4 °C, затем центрифугируют 30 минут при 3000 об./мин. и трижды промывают осадок буферным раствором. Сенсибилизированный латекс ресуспендируют в этом же растворе до конечной концентрации частиц (0,5- 2,0%) и добавляют 0,05% азида натрия. Готовый диагностикум хранят в холодильнике при 4 °C.

Реакцию агглютинации латекса ставят на предметном стекле. На него наносят дозатором 25 мкл антигена в разведении от 1:2 до 1:512, добавляют 25 мкл латексного антительного диагностикума и смешивают, плавно поворачивая. Результаты реакции учитывают через 2−5-минут по трехбалльной системе: резко положительная реакция (+++) — четкая агглютинация, крупные хлопья в прозрачной жидкости; положительная (++) — агглютинация видна, однако фон полностью не просветляется; отрицательная (-) — мутная гомогенная жидкость. Контролем служат смесь латекса с 0,85%-ным раствором натрия хлорида (контроль диагностикума), с положительным и отрицательным антигенами (положительный и отрицательный контроль).

Реакция иммунодиффузии (РИД). Данная методика широко используется как с целью индикации и идентификации вируса болезни Гамборо, так и для определения специфических антител. При постановке РИД используют наборы для диагностики болезни Гамборо ВНИВИП или ВНИИЗЖ.

В лаборатории патологический материал взвешивают, добавляют эквивалентное количество 0,85%-ного раствора натрия хлорида или дистиллированной воды, гомогенизируют, промораживают и центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 10 минут. Надосадочную жидкость сливают и используют для исследования в РИД.

Для постановки реакции используют 1,25%-ный агар с 8% натрия хлорида и 0,5% фенола. Чашки Петри заполняют за 24−72 часа до использования, предварительно растворяя агар на пару и заливают по 20 мл в чашки. Слой агара должен быть не менее 3 мм.

Для исследования проб используют линейный порядок расположения лунок. Делают 3 ряда вертикальных лунок диаметром 5 мм, на расстоянии 5 мм. Агаровые пробки удаляют иглой или пинцетом.

Каждую пробу испытуемой диагностической сыворотки разводят физиологическим раствором (0,85% раствор натрия хлорида) сначала 1:2, а затем последовательно двукратным шагом до 1:256.

Сухие эталонные антигены перед использованием растворяют дистиллированной водой или 0,85%-ным раствором натрия хлорида до объема 0,5 мл. Сухие диагностические сыворотки сначала разводят дистиллированной водой в объеме, указанном на этикетке, а затем готовят ряд последовательных двукратных разведений.

При исследовании патологических материалов в центральный ряд лунок вносят положительную сыворотку в рабочем разведении в 0,05 мл, а в периферические ряды — нормальный, положительный (по 1 лунке) и исследуемые антигены в объеме 0,05 мл. При исследовании сывороток крови птиц, в центральный ряд лунок вносят положительный антиген в рабочем разведении в объеме 0,05 мл, а в периферические ряды — нормальный, положительный (по 1 лунке) и исследуемые сыворотки в разведениях в объеме 0,05 мл.

После заполнения лунок, чашки Петри помещают в термостат при температуре 37 °C. Учет реакции проводят через 24 и 48 часов после постановки реакции. Чашки просматривают на темном фоне в направленном луче света. Реакцию учитывают только при наличии линий преципитации между положительным антигеном и положительной сывороткой в контроле и отсутствии линий преципитации между положительным антигеном и нормальной сывороткой кур, а также положительной сывороткой и нормальным антигеном.

За положительный результат при исследовании патологических материалов на выявление вирусного антигена принимают образование 1−2-х линий преципитации между лунками с исследуемым материалом и положительной сывороткой, а при выявлении противовирусных антител — наличие линий преципитации между лунками с исследуемой сывороткой и положительным антигеном.

Встречный иммуноэлектрофорез используют как с целью индикации и идентификации вируса болезни Гамборо, так и для определения специфических антител. Сущность методики заключается в одновременном движении в агаре белковых молекул с различной электрофоретической подвижностью с образованием преципитата из гомологичных антигенов и антител. Для постановки ВИЭФ используют приборы ПЭФ-3, ЭФ-2 или аналогичных марок и набор диагностикумов для постановки РИД. Реакцию ставят на стеклянных пластинах, покрытых 1%-ным раствором агара на 0,85 М веронал-мединаловом буфере (рН=8,6). В агаре вырезают лунки диаметром 4 мм, на расстоянии 4 мм друг от друга.

В лунки у анода вносят положительный антиген и исследуемые сыворотки, а у катода — положительный антиген и исследуемый патологичекий материал. Электрофорез проводят 1,5 ч при силе тока 4 мА/ см. Контролями служат отрицательные антиген и сыворотка Пластины просматривают в косо проходящем свете на темном фоне. Реакцию считают положительной, если между лунками с испытуемым антигеном или сывороткой и положительной сывороткой или антигеном образуются одна или две линии преципитации.

Реакция непрямой гемагглютинации основана на способности антител агглютинировать эритроциты, сенсибилизированные специфическим антигеном. РНГА может применяться как для серологической диагностики, так и для изучения серологической эпизоотологии болезни Гамборо.

При постановке РНГА используют эритроцитарный антиген и контрольные (положительная и отрицательная) сыворотки из диагностического набора БелНИИЭВ для диагностики инфекционного бурсита (болезни Гамборо).

Реакцию ставят микрометодом в микротитраторе Такачи. В лунках горизонтальных рядов плексигласовых пластинок из исследуемых пластинок готовят последовательные двукратные разведения (от 1:2 до 1:1024) на 0,85%- ном растворе натрия хлорида, содержащем 1% глицерина, в объеме 0,025 мл (1 капля). В первые лунки вносят 0,025 мл исследуемой сыворотки, перемешивают, и 0,025 мл смеси переносят в следующие лунки и т. д. Из последних лунок после перемешивания 0,025 мл содержимого удаляют в дезинфицирующий раствор. В каждую лунку с соответствующим разведением сыворотки добавляют 0,025 мл 1%-ной взвеси сенсибилизированных вирусом эритроцитов и встряхивают.

Одновременно готовят: контроль эритроцитарного антигена на спонтанную агглютинацию (в 2−3 лунках вносят 0,025 мл отрицательной сыворотки и 0,025 мл эритроцитарного антигена); положительный контроль (в 2−3 лунках вносят 0,025 мл положительной сыворотки и 0,025 мл эритроцитарного антигена); отрицательный контроль (в 2−3 лунки вносят 0,025 мл отрицательной сыворотки и 0,025 мл эритроцитарного антигена).

Плексигласовые пластинки с компонентами помещают в термостат на 1- 1,5 часа при t=37°С до оседания эритроцитов.

Учет реакции ведут только в том случае, когда контроль эритроцитарного антигена на спонтанную агглютинацию и с заведомо отрицательной сывороткой отрицательные, а контроль с положительной сывороткой —положительный.

Положительная реакция характеризуется появлением осадка эритроцитов в виде зонтика на дне лунки. Отрицательная реакция проявляется выпадением эритроцитов в осадок в виде точки или колечка с ровными краями.

При агглютинации эритроцитов испытуемыми сыворотками в разведении 1:8 и выше РНГА считают положительной, а 1:4 и ниже — отрицательной.

Иммуноферментный анализ широко применяют в качестве наиболее специфичного теста для выявления в сыворотке крови иммунной птицы специфических противовирусных антител. Для постановки данной реакции используют набор диагностикумов ВНИИЗЖ для определения антител к вирусу инфекционной бурсальной болезни (болезни Гамборо) методом ИФА. Сущность данной методики заключается в выявлении комплекса антигенантитело на поверхности лунок полистиролового планшета. Образовавшийся специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным коньюгатом против Ig G кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета.

Перед приготовлением рабочих растворов набор с компонентами выдерживают 30 мин. при комнатной температуре (18−20°С).

Раствор № 1. В 1000 см³ дистиллированной воды растворяют 0,97 г трис (оксиметил) аминометана (флакон 5.1), 6,61 г трис (оксиметил) аминометана гидрохлорида (флакон 5.2) и 11,7 г хлорида натрия (флакон 5.3). После измерения рН полученного раствора (которое должно быть в пределах 7,4−7,6), к нему добавляют 1,0 мл жидкого детергента твин-20 (флакон 7). Данный раствор используют для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб, антивидового коньюгата и межэтапной промывки.

Раствор № 2. Для приготовления субстратного буфера 5,37 г дигидрофосфата натрия (флакон 6.1) растворяют в 50 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона 6.2 (1,51 г лимонной кислоты) также растворяют в 50 мл дистиллированной воды. Затем смешивают 224,3 мл раствора натрия дигидрофосфата с 25,7 мл раствора лимонной кислоты, добавляют 50 мл дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН=4,9−5,0. При необходимости добавляют кислый или щелочной компоненты.

Раствор № 3. В 0,5 мл раствора № 1 растворяют 1,0 см³ цельной леофилизированной положительной сыворотки против болезни Гамборо (флакон 1). Допускается хранение полученного раствора в течение 3 суток при 4 °C.

Раствор № 4. В 0,5 мл раствора № 1 растворяют 1,0 см³ цельной леофилизированной отрицательной сыворотки против болезни Гамборо (флакон 1). Допускается хранение полученного раствора в течение 3 суток при 4 °C.

Раствор № 5 Содержимое раствора 4 с антивидовым коньюгатом растворяют в 0,5 мл раствора № 1. Для получения рабочего разведения 1:200 из этого флакона отбирают 0,05 см³ на 10,0 мл раствора № 1 (на 1 планшет). Готовят перед употреблением. Хранению не подлежит.

Раствор № 6. Одну таблетку гидроперита растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Хранят в защищенном от света месте при 4 °C не более 20 суток.

Раствор № 7. Субстратно-индикаторная смесь. Таблетку ортофенилендиамина (субстрата) растворяют в 20 мл раствора № 2, встряхивают до полного растворения и добавляют на каждые 20 мл этого раствора по 0,4 мл раствора № 6. Хранению не подлежит.

Из комплекта набора берут планшет, в лунках которого адсорбирован очищенный антиген вируса болезни Гамборо. Образцы исследуемых проб сывороток крови разводят 1:100 раствором № 1. С этой целью к 0,01 мл сыворотки добавляют 1 мл раствора № 1.

В лунки рядов планшета В1−12…Н1−12 вносят по 0,1 мл раствора № 1, а в лунки А2−11 вносят по 0,2 мл разведенных проб сывороток и проводят раститровку по вертикальным рядам, 1:100 до 1:12 800. В лунки А1 и А12 вносят разведения 1:100 контрольных (отрицательной и положительной) сывороток и также проводят раститровку по вертикальным рядам. Из последних лунок Н1 и Н12 удаляют по 0,1 мл.

Планшет осторожно встряхивают, закрывают крышкой и переносят в термостат на 2 часа при температуре 37 °C. Затем лунки планшета освобождают от содержимого путем встряхивания и трехкратно промывают раствором № 1. Во все лунки планшета вносят по 0,1 мл раствора № 5, помещают в термостат на 1 ч, трехкратно промывают раствором № 1. Затем во все лунки вносят по 0,1 мл раствора № 1. Оставляют при комнатной температуре на 10 минут. Реакцию останавливают добавлением в каждую лунку 0,05 мл 0,5%-ного раствора серной кислоты.

Выявление специфических антител в сыворотках крови можно проводить и без раститровки испытуемых сывороток. При этом во все лунки планшета А2−12…Н2−12 вносят по 1 мл сывороток крови в разведении 1:400. В лунки А1и В1 вертикального ряда вносят положительные, в две следующие С1 и Д1 — отрицательные контрольные сыворотки в разведении 1:400, а лунки Е1 и F1 служат контролем коньюгата — в них вносят по 1 мл раствора № 1.

Учет результатов анализа проводят после остановки реакции одним из способов: визуально — по интенсивности окрашивания содержимого или инструментально — с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. При визуальном учете сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемой сыворотки принимают последнее ее разведение, при котором наблюдают видимое глазом цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательной пробой. Положительными считают пробы, начиная с разведения 1:400 и выше. При оценке результатов без раститровок сывороток реакцию расценивают по принципу — «да" — положительная реакция (в пробе присутствуют специфические антитела) или «нет» — отрицательная реакция (в пробе отсутствуют специфические антитела).

Инструментальный фотометрический учет позволяет количественно оценить титры специфических антител путем определения экстинкции. Конечным разведением испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором экстинкция превышает контрольную в 2,0- 2,1 раза.

Гистологическое исследование. От трупов павших или вынужденно убитой птицы отбирают кусочки бурсы Фабрициуса, тимуса, селезенки, печени, почек, сердца, скелетных мышц. Органы с этикетками помещают в стеклянную посуду и заливают 10%-ным раствором формалина для фиксации. Объем фиксирующей жидкости должен превышать объем фиксируемых кусочков не менее чем в 10 раз. Фиксацию проводят при комнатной температуре (18−20°С) в течение 24−48 часов. Критериями завершения фиксации являются: равномерное уплотнение органов и одинаковый цвет с поверхности и на разрезе. Зафиксированные кусочки с этикетками помещают в посуду с фиксирующей жидкостью или в полиэтиленовые пакеты с ватой, смоченной фиксатором, и направляют в лабораторию с сопроводительным письмом.

В лаборатории материал уплотняют замораживанием жидким азотом или на полупроводниковых столиках, а также путем заливки в парафин. Гистологические срезы получают на замораживающем или санном микротомах, окрашивают гематоксилин-эозином. Окрашенные срезы изучают в световом микроскопе.

В Фабрициевой сумке в начале болезни отмечают массовый некроз лимфоцитов, а затем и ретикулярных клеток с образованием на месте большинства лимфоидных узелков некротического детрита. Лимфоидные узелки замещаются железистыми структурами. Одновременно выявляется местная иммунная реакция, при которой наряду с некрозом лимфоидных узелков происходит формирование обширных лимфоцитарных пролифератов с образованием в них небольших лимфоидных узелков. В интерстиции наблюдают отек, инфильтрацию псевдоэозинофилами и гистиоцитами, гиперплазию ретикулярных клеток.

Следует учитывать, что при латентном течении болезни в связи с некрозом лимфоцитов развивается атрофия и делимфатизация лимфоидных узелков.

В тимусе при остром течении болезни Гамборо находят некроз лимфоцитов в корковом, реже в мозговом веществе долек, увеличение числа и размеров телец Гассаля. Отмечается воспалительная гиперемия кровеносных сосудов, микрои макрофагальная реакции, гиперплазия ретикулярных клеток. Подострое и латентное течение сопровождается ранней акцидентальной инволюцией органа.

В селезенке в начале болезни обнаруживают гиперемию сосудов красной пульпы, макрофагальную инфильтрацию, некроз лимфоцитов в периартериальных муфтах (Т-лимфоциты) и лимфоидных узелках (В-лимфоциты). В более поздние сроки выявляют ярко выраженную плазматизацию органа.

В почках при остром течении болезни Гамборо регистрируют гиперемию сосудов, вакуольную дистрофию и некроз эпителиоцитов, разрушение извитых канальцев. В отдельных участках выявляют обширные лимфоцитарно — гистиоцитарные пролифераты. Хроническое течение характеризуется явлениями нефросклероза, скоплением в просветах канальцев кристаллов уратов.

В печени отмечают гиперемию центральных вен долек, очаговые кровоизлияния, зернистую и жировую дистрофию гепатоцитов, а также скопления лимфоцитов, макрофагов (реже микрофагов) в интерстиции органа.

В скелетных и сердечной мышцах выявляют гиперемию кровеносных сосудов, иногда — зернистую дистрофию. При хроническом течении между мышечными волокнами обнаруживают слабо выраженные лимфоцитарно — гистиоцитарные пролифераты.

Дифференциальная диагностика При дифференциальной диагностике болезни Гамборо наибольшее значение имеет исключение опухолевых болезней птиц, аденовирусной инфекции, синдрома снижения яйценоскости (ССЯ-76), инфекционного бронхита, гриппа и ньюкаслской болезни, а также стрептококкоза, пастереллеза, колибактериоза, эймериоза, простогонимоза, гиповитаминоза А, алиментарной дистрофии и радиотоксикоза.

Болезнь Марека поражает цыплят от 4- до 30- недельного возраста, протекает в виде энзоотий, реже эпизоотий. Чаще болеют курочки, реже — петушки. При жизни у больных птиц выявляют нарушения координации движения, парезы ног и крыльев. Отмечают сероглазие, гиперплазию перьевых фолликулов, слабость, прогрессирующее истощение. У павших цыплят обнаруживают диффузные или очаговые саловидные новообразования в бурсе Фабрициуса, селезенке, печени, стенке кишечника, отмечают утолщение седалищных нервов. При гистоисследовании в Фабрициевой бурсе находят атрофированные лимфоидные узелки с заменой их на кисты или железы, разрост межфолликулярной соединительной ткани. Нередко отмечают развитие опухолей во внутренних органах, характеризующихся пролиферацией лимфобластов, гистиоцитов и плазмоцитов.

Патологоанатомический диагноз:

Разрост саловидной опухолевой ткани в селезенке, печени, почках, яичнике семенниках, сердце, легких, стенке железистого желудка и кишечника, тимусе, бурсе Фабрициуса или их атрофия.

Гиперплазия перьевых фолликулов.

Сероглазие, деформация зрачка.

Невриты с резким утолщением в седалищных нервах и в нервах плечевого и поясничного сплетений.

Гисто: пролиферация лимфобластов, гистиоцитов, плазмоцитов и ретикулоцитов в опухолевых узлах; атрофия лимфоидных узелков бурсы Фабрициуса, замена их на кисты, железы, разрост межузелковой соединительной ткани.

Проводят дополнительные лабораторные исследования: ставят биопробу на цыплятах, исследуют сыворотки крови в РИД, проводят гистоисследование пораженных органов и тканей.

Лейкоз кур протекает обычно в виде энзоотий. Заболевает птица старше 8- 12- месячного возраста. У больных кур отмечают вялость, понос, истощение. При вскрытии павших птиц обнаруживают диффузные или очаговые саловидные разрастания опухолевой ткани в Фабрициевой бурсе, селезенке, печени, почках, сердце и в других органах.

При гистологическом исследовании в бурсе обнаруживают пролиферацию опухолевых клеток, формирующих опухолевый очаг, инфильтративный рост которого приводит к разрушению органа. В печени, почках, сердце выявляют разрост незрелых лимфоидных клеток.

Патологоанатомический диагноз:

Разрост (диффузной или в виде узлов) саловидной опухолевой ткани в бурсе Фабрициуса.

Опухолевидные саловидные узлы в селезенке, печени, почках, стенке железистого желудка и тонкого кишечника, сердце, легких Истощение и общая анемия.

Гисто: пролиферация незрелых лимфоидных клеток в опухолевых узлах.

Лабораторная диагностика основывается на проведении гистологического исследования патматериала, постановке РСК и РНГА.

Саркома Рауса сопровождается прогрессирующей кахексией, снижением яйцекладки, диареей, отвислостью живота, анемичностью кожи и видимых слизистых оболочек. При вскрытии выявляют многочисленные опухолевые узлы в коже, скелетной мускулатуре, а также в селезенке, брыжейке кишечника, печени, почках, яичнике. При наличии большого числа метастазов опухоли во внутренних органах наблюдается атрофия лимфоидных узелков бурсы Фабрициуса, делимфатизация. Отмечается утолщение в 2−3 раза межузелковых соединительнотканных перегородок, их гиперемия и отек.

Патологоанатомический диагноз:

Опухолевые узлы в коже, скелетных мышцах, селезенке, печени, почках, в брыжейке кишечника, яичнике.

Истощение, общая анемия.

Гисто: пролиферация слабодифференцированных полиморфных клеток в опухолевых узлах, атрофия и некроз элементов паренхимы внутренних органов; атрофия и делимфотизация лимфоидных узелков, гиперемия и серозный отек интерстиции в бурсе Фабрициуса.

Для подтверждения диагноза проводят вирусологическое исследование.

Аденовирусная инфекция поражает преимущественно молодняк 2−3- месячного возраста. Возбудитель высоко контагиозен. Болезнь сопровождается сонливостью, анемией слизистых оболочек. У павших или вынужденно убитых цыплят обнаруживают кровоизлияния в мышцах, увеличение печени с переполнением желчью желчного пузыря. Почки набухшие, с кровоизлияниями.

При гистологическом исследовании в печени обнаруживают многочисленные микронекрозы, кровоизлияния (под капсулой), интерстициальные лимфоцитарно-гистиоцитарные пролифераты, а в ядрах гепатоцитов — эозинофильные и базофильные включения. В Фабрициевой бурсе выявляют атрофию лимфоидных узелков, обеднение лимфоцитами мозгового слоя, интерстициальный отек, истончение складок слизистой оболочки.

Патологоанатомический диагноз:

Альтеративный гепатит, переполнение желчью желчного пузыря.

Острый катарально-геморрагический энтерит.

Увеличение селезенки.

Кровоизлияния в скелетных мышцах, печени, почках, в стенке желчного пузыря.

Общая анемия, истощение.

6. Гисто: печень — внутриядерные базофильные и эозинофильные включения, вакуольная дистрофия и некроз гепатоцитов, кровоизлияния, интерстициальные лимфоцитарно-гистиоцитарные пролифераты; поджелудочная железа — панкреатит с наличием интрануклеарных полихроматофильных включений в клетках железистой ткани; бурса Фабрициуса — атрофия лимфоидных узелков, обеднение лимфоцитами мозгового слоя, интерстициальный отек, истончение складок слизистой оболочки; селезенка — серозный спленит с внутриядерными тельцами-включениями в ретикулоцитах.

Проводят дополнительные лабораторные исследования: выделение вируса на куриных эмбрионах.

Синдромом снижения яйценоскости (ССЯ-76) болеют куры всех пород в период яйцекладки. Вирус способен персистировать в организме птиц и активизироваться при стрессе, вызванном началом яйцекладки. Болезнь сопровождается овариитом, катаральным сальпингитом. При гистологическом исследовании маточного отдела яйцевода в эпителиальных клетках обнаруживаются базофильные интрануклеарные включения. Изменения в бурсе Фабрициуса не патогномоничны.

Патологоанатомический диагноз:

Овариит, кровоизлияния в яичнике.

Катаральный, катарально-геморрагический сальпингит.

Уменьшение толщины скорлупы (на 30−60%) и ее депигментация (у яиц цветных пород) до слабо-желтого или белого цвета.

Гангренозный дерматит (осложнение).

Учитывают снижение яйценоскости у кур, применяют раннюю и ретроспективную диагностику с использованием РЗГА.

Инфекционный бронхит характеризуется поражением дыхательных путей (респираторная форма) у цыплят и яйцевода у взрослой птицы со снижением яйценоскости (репродуктивная форма). При вскрытии у павших и вынужденно убитых цыплят отмечают острое катаральное воспаление верхних дыхательных путей, серозно-фибринозный аэросаккулит, у кур — атрофию яичника и яйцевода, деформацию яйцевых фолликулов. Гистологическим исследованием кроме того обнаруживают зернистую дистрофию эпителия извитых канальцев почек.

Нефрозо-нефритную форму инфекционного бронхита регистрируют у цыплят 3−9-недельного возраста. У больной птицы наблюдают водянистую диарею, угнетение, прострацию. Ведущие патологические процессы, обнаруживаемые при вскрытии и гистологическом исследовании: зернистая и жировая дистрофия почек и скопление уратов в почечных канальцах и мочеточниках, жировая дистрофия (мелкокапельная) печени, псевдоэозинофильная реакция в интерстиции указанных органов.

Патологоанатомический диагноз:

респираторная форма Серозно-катаральный ринит, коньюнктивит.

Серозно-катаральный фибринозный трахеит и бронхит.

Очаговая катаральная или катарально-фибринозная пневмония.

Серозно-фибринозный аэросаккулит.

Истощение.

нефрозо-нефритная форма Нефрозо-нефрит, скопление уратов в мочеточниках.

Переполнение прямой кишки и клоаки беловатыми фекалиями с примесью уратов.

Висцеральный мочекислый диатез.

репродуктивная форма Атрофия яичника и яйцевода.

Кистоз яичника с наличием в его просвете казеозно-фибринозной массы.

Желточный перитонит.

Проводят дополнительные исследования: выделение вируса на КЭ и КК, ставят биопробу на 9-суточных эмбрионах (у которых уже на 5−6-ой день после заражения вирусом эмбрионов отмечают «эффект карликовости» — отставание в росте в 3−4 раза по сравнению с контролем), а также серологические реакции — РН, РИД, РНГА.

Грипп птиц поражает кур всех возрастов, протекает остро. Заболеваемость и летальность могут достигать 100%. Болезнь характеризуется нервными явлениями, отеками головы, прекращением яйценоскости, диареей, цианозом гребня и сережек с последующим их некрозом. При вскрытии обнаруживают многочисленные точечные и пятнистые кровоизлияния на слизистых оболочках и серозных покровах, геморрагическое кольцо в слизистой оболочке железистого желудка на границе его с мышечным желудком, острый катаральный энтерит. При гистоисследовании в головном мозгу выявляют микронекрозы, в бурсе Фабрициуса, тимусе, селезенке, пищеводной и слепокишечных миндалинах — обеднение лимфоцитами.

Патогоанатомический диагноз:

Геморрагический диатез.

Геморрагическое кольцо в слизистой оболочке железистого желудка на границе его с мышечным желудком.

Цианоз гребня и сережек.

Серозно-фибринозный перикардит и плевроперитонит.

Катаральный, катарально-геморрагический энтерит.

Серозный отек подкожной клетчатки.

Неизмененная селезенка.

Гисто: микронекрозы в головном мозгу; делимфатизация бурсы Фабрициуса, тимуса, селезенки, пищеводной и слепокишечных миндалин.

Лабораторная диагностика основывается на выделении вируса на куриных эмбрионах, постановке РГА и РЗГА со специфическими гипериммунными сыворотками, гистологического исследования патматериала.

Ньюкаслская болезнь поражает птиц всех возрастов, протекает остро, подостро и хронически. Острое течение характеризуется повышением температуры, угнетением, сонливостью, диареей (фекальные массы водянистые, зеленовато-желтого цвета). При дыхании слышны свистящие хрипы и клокотание в горле. Наблюдают цианоз гребня и сережек.

При подостром и хроническом течении наблюдают нервные симптомы, одышку, кашель, хрипы.

Основные патологоанатомические изменения характеризуются явлениями геморрагического диатеза, появлением геморрагического кольца в слизистой оболочке железистого желудка на границе его с мышечным желудком. Выявляют также фибринозно-некротический, эрозивно-язвенный энтерит с образованием струпьев-бутонов, зернистую дистрофию паренхиматозных органов, венозную гиперемию и отек легких. При гистоисследовании в головном мозгу обнаруживают негнойный лимфоцитарный энцефалит; в органах иммунной системы — массовый некроз лимфоцитов, процессы деструкции лимфоидных узелков.

Патологоанатомический диагноз:

Геморрагический диатез.

Геморрагическое кольцо в слизистой оболочке железистого желудка на границе его с мышечным желудком.

Цианоз гребня и сережек.

Фибринозно-некротический, эрозивно-язвенный энтерит с образованием струпьев-бутонов.

Серозный отек подкожной клетчатки.

Небольшое увеличение селезенки.

Гисто: негнойный лимфоцитарный энцефалит; гибель лимфоцитов и разрушение лимфоидных узелков в бурсе Фабрициуса и селезенке.

Для постановки окончательного диагноза проводят дополнительные лабораторные исследования: выделение вируса на куриных эмбрионах и его идентификацию с использованием РТГА, РН, РСК, РИФ, ИФА. Учитывают данные гистологического исследования головного мозга.