Особенности клинического проявления, возникновения и пути распространения хламидиоза у телят

Актуальность проблемы. Хламидиоз — одна из наиболее распространённых инфекционных болезней животных, для которых характерны полиморфизм клинических признаков, хроническое течение и социальная опасность.

У взрослых животных наиболее часто поражаются половые органы, что приводит в неблагополучных стадах к массовым абортам, рождению слабого, нежизнеспособного молодняка, андрологической и гинекологической патологиям. У больного молодняка развиваются, как правило, артриты, кератоконъюнктивиты, диарея, ринит, бронхопневмония.

В общей заболеваемости телят болезни органов дыхания, составляют от 3,6 до 5,4%, среди них превалируют инфекционные заболевания, вызванные герпесвирусом и бактериями рода Chlamydophila (А.Н. Куриленко, 1996, A.C. Горбунов, 1988).

Хламидии и родственные им микроорганизмы, входящие в порядок Chlamydiales, являются облигатными внутриклеточными паразитами человека и животных. Широкий спектр заболеваний и особенности течения инфекций, вызываемых этими возбудителями, обусловливают необходимость всестороннего изучения микроорганизмов данной группы.

Хламидийные инфекции животных распространены повсеместно и обычно приводят к длительной бессимптомной инфекции. Патогенный потенциал хламидий весьма разнообразен и включает в себя энтериты, пневмонии, полиартриты, энцефаломиелиты, конъюнктивиты, аборты и половые инфекции. Тем не менее, постановка диагноза зачастую затруднена в связи с отсутствием характерных клинических признаков, поскольку хламидиоз протекает, как правило, ассоциативно с другими кишечными и респираторными инфекционными заболеваниями.

Уровень проведения специальных исследований в районных ветеринарных лабораториях недостаточен, поэтому объективная диагностика практикующими ветеринарными врачами данного заболевания у телят затруднена и мало информативна.

В связи с этим остаются малоизученными вопросы распространения хламидиоза в стаде, морфофункциональные изменения органов и тканей, слабо разработана методика определения степени тяжести течения заболевания, а, следовательно, и назначение адекватной терапии.

Научно-практическое разрешение этих проблем позволит ветеринарным специалистам овладеть современными методами диагностики и лечения телят, больных хламидиозом.

Цель и задачи исследований. Цель работы — установить источник хламидиоза, изучить патоморфогенез хламидийной инфекции у телят и выработать научно-обоснованную систему мероприятий по борьбе с данной инфекцией.

Задачи исследования:

1. Изучить эпизоотологическую обстановку по хламидиозу животных в Ростовской области.

2. Выяснить особенности этиопатогенеза хламидиоза у коров и телят, вызванного С. abortus и С. ресогит.

3. Разработать набор реагентов для выявления и видовой идентификации возбудителей хламидиоза крупного рогатого скота методом ПЦР.

4. Выяснить роль коров в заражении телят хламидиозом.

5. Разработать наиболее эффективную схему терапии телят, больных хламидиозом.

Работа выполнена на базе лаборатории функциональной диагностики ГНУ СКЗНИВИ, основная часть исследований выполнена в хозяйствах Ростовской области ОАО «Южное» и СПК «Русь». Диагностические исследования проводились в ГУРО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория» совместно с сотрудниками этой организации.

В работе использованы материалы статистической отчетности Управления ветеринарии Ростовской области.

Научная новизна работы. Впервые изучены источники возникновения и факторы, способствующие распространению хламидиоза у телят в условиях хозяйств Ростовской области. Разработан набор реагентов для выявления и видовой идентификации хламидий крупного рогатого скота. Изучены принципы распространения хламидийной инфекции в стаде. Выявлены морфологические и биохимические изменения крови. Разработан эффективный метод терапии больных хламидиозом телят.

Практическая значимость. Полученные результаты позволяют выявлять источники возникновения хламидиоза и прогнозировать течение эпизоотического процесса. Проведенные морфологические и биохимические исследования позволяют прогнозировать тяжесть течения инфекции, ее курабельность, а также частоту рецидивов. Разработаны и научно обоснованы эффективные лечебно-профилактические мероприятия при хламидиозе. Разработанный набор реагентов для ПЦР может использоваться для постановки диагноза и идентификации возбудителя.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных отчетах и заседаниях Ученого совета ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии, научно-практических конференциях СКЗНИВИ, г. Новочеркасск (2008,2009).

На защиту выносятся следующие основные положения: Особенности эпизоотического процесса при хламидиозе телят, в условиях хозяйств Ростовской области. Результаты исследований по распространению и тяжести течения хламидиоза у телят в условиях специализированных молочно-товарных предприятий Ростовской области.

Терапевтическая эффективность разработанной схемы лечения хламидиоза.

Реализация результатов исследований. Разработанные практические предложения реализуются в повседневной работе скотоводческих хозяйств Ростовской области, в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре внутренних незаразных болезней и патофизиологии ДонГАУ.

Публикации. По материалам представленной к защите диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 1 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 138 страницах компьютерного исполнения, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, а также заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. В диссертации приведено 22 таблицы и 10 рисунков.

Список литературы

включает 225 источников, в том числе 94 иностранных.

выводы.

1. В Ростовской области инфекционная патология крупного рогатого скота, бактериальной этиологии, представлена, в основном, 14-ю нозоединицами и составляет 64,33% от общей инфекционной патологии, в числе которой хламидиоз занимает 4-е место.

2. При содержании в индивидуальных клетках, хламидиоз у телят проявляется преимущественно субклинической инфекцией. При групповом содержании у телят развивается клинически выраженный хламидиоз, который проявляется усилением кашлевого рефлекса, хрипами, астенией, одышкой.

3. Разработанные методы ПЦР с использованием видоспецифичных праймеров к МОМР гену обеспечивают выявление ДНК представителей семейства СМатусИасеае и их идентификацию, что позволяет рассматривать их как перспективные подходы для диагностики хламидийных инфекций животных.

4. От больных хламидиозом коров, телята рождаются свободными от хламидий. Наиболее вероятным путем заражения является алиментарный, а инфицирование телят происходит в первые часы и дни после родов через молозиво или факторы внешней среды при постепенном накоплении возбудителя, вследствие нарушений зооветеринарных мероприятий.

5. Установлена устойчивая корреляция между размером опытной группы, увеличением количества инфицированных телят, повышением интенсивности выделения возбудителя и временем возникновения хламидиоза у телят.

6. В начале инфекционного процесса при линейном распространении инфекции С. ресогит выделяется преимущественно из ректальных мазков на 9−12-ю неделю жизни телят, в разгар инфекционного процесса в опытной группе возбудитель выделяется преимущественно из вагинальных и ринальных мазков на 1−2-ю неделю жизни.

7. Среди инфицированных хламидиями телят распространенность С. ресогит пр имерно в пять раз выше, чем С. abortus, с наиболее высоким уровнем бактериальной нагрузки в вагинальных мазках в сравнении с ректальными или носовыми.

8. Хламидию С. abortus наиболее часто определяли в образцах, отобранных у коров, и только этот вид хламидий был обнаружен в образцах молокаС. ресогит чаще обнаруживали в вагинальных мазках, полученных от короввыделения из влагалища являются основным источником инфекции для телят С. ресогит.

9. При тяжелом клиническом проявлении хламидиоза, определяя фракции белка в сыворотке крови на 10−15 сутки течения хламидиоза, можно прогнозировать гибель животных от инфекции. В этот период отмечается существенное снижение общего белка за счет снижения альбуминовой фракции в 1,2 раза. Увеличение тяжести проявления заболевания сопровождается повышением показателей фибриногена в 4,3 раза, СОЭ в 13 раз, С-реактивного белка и лактатдегидрогеназы в 4 раза по сравнению с показателями здоровых животных.

10. Разработан эффективный комплекс лечебных мероприятий при хламидиозе у телят: при тяжелой форме хламидиоза — подкожное введение драксина, однократно, в дозе 1 мл на 40 кг массы животного, | внутримышечно, гамавит по 0,3 мг/кг в течение 3−5 днейпри средней и легкой степени тяжести — доксициклин, внутримышечно, в дозе 50 мг/кг в сутки, однократно, три дня.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ Мероприятия по диагностике хламидиоза коров.

1. Хламидиоз коров диагностируют на основании эпизоотологических данных:

1.1 .наличие источника инфекции и многолетнее хроническое течение хламидиоза среди различных половозрастных групп животных неблагополучного хозяйства после заноса возбудителя и первичного клинического переболевания;

1.2.многообразие форм передачи и путей заноса возбудителя хламидиоза: хламидии передаются как вертикально — от матери к плоду, так и горизонтально — через респираторные и пищеварительные органы, а также через контаминированную хламидиями пыль и сперму;

1.3.различные клинические формы проявления хламидиоза в неблагополучных хозяйствах: от спорадических до массовых абортов, мертворождений, вагинитов и менингоэнцефалитов, сопровождающихся гибелью животных, а также в виде массовых пневмоний, энтеритов, конъюнктивитов у молодняка;

1.4.участие в этиологии заболевания животных штаммов хламидий, обладающих разными биологическими свойствами, которые часто не имеют перекрестного иммунитета и вызывают у животных в одних неблагополучных хозяйствах преимущественно аборты, пневмонии и энтериты, в других — менингоэнцефалиты и конъюнктивиты, в-третьихполиартриты и другие симптомы болезни;

1.5.формирование у животных в результате клинического или латентного переболевания хламидиозом достаточно напряженного противохламидийного иммунитета, обусловливающего в неблагополучных хозяйствах снижение уровня заболеваемости животных в начальном периоде развития эпизоотического процесса;

1.6. периодические с интервалом 4−7 лет обострения течения хламидийной инфекции в неблагополучных хозяйствах, связанные с выбытием иммунных животных и снижением группового противохламидийного иммунитета, которая проявляется увеличением количества абортов и мертворождений у маток, ппевмоэнтеритов, конъюнктивитов и полиартритов у молодняка и повышение уровня серопозитивности животных к возбудителю хламидиоза.

Выяснение эпизоотической ситуации осуществлять путем ретроспективного анализа архивных материалов, отчетных данных СББЖ и ветеринарных лабораторий, а также собственных эпизоотических обследований неблагополучных ферм, хозяйств и районов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Актуальность выбранной нами темы исследования определяется тем, что хламидиоз является антропозоонозным заболеванием и представляет серьезную угрозу не только для животных, но и для человека. Основная опасность болезни заключается в том, что возбудитель способен к внутриклеточному паразитированию и длительной персистенции в живом организме. У человека и животных хламидии вызывают аборты, рождение мертвого и нежизнеспособного потомства. Родившиеся живыми отстают в развитии, у них развиваются клинические признаки поражения нервной и других систем организма. Решение проблемы сохранения здорового приплода связано с глубоким и всесторонним изучением внутриутробного развития животного. Беременность является одним из загадочных феноменов иммунологии репродукции. Воспроизводство потомства стоит на одном из первых мест в иерархии жизненно важных функций млекопитающих (Ширшев С. В., 2002). Общепризнано структурно-функциональное единство системы «мать-плацента-плод», поэтому оценка состояния плаценты позволяет понять механизм различных нарушений, возникающих в организме антенатального периода развития, что и объясняет пристальное внимание исследователей к этому провизорному органу.

Бактерия способна персистировать и размножаться в макрофагах, гладкомышечных и эндотелиальных клетках, стимулируя продукцию цитокинов, в том числе фактора некроза опухолей и интерлейкина-1 (Ward М. Е., 1995). Как большинство грамотрицательных бактерий, хламидии имеют в своем составе липополисахариды, являющиеся основным компонентом клеточной мембраны. Эти липополисахариды образуют с антителами макроорганизма циркулирующие иммунные комплексы. Иммунные комплексы депонируются в сосудистой стенке, вызывал местное воспаление и прокоагулянтные изменения (Linnanmaki Е. et al., 1993).

Согласно современным представлениям, отложения в стенке сосудов микроциркуляторного русла комплементарно связанных иммунных комплексов (антиген+антитело) составляют основную причину сосудистых и тканевых поражений, обусловленных аллергическими реакциями организма. Под их влиянием активизируется система комплемента, а это в свою очередь, вызывает хемотаксис и скопление полиморфноядерных лейкоцитов, приводящих к освобождению повреждающих компонентов — медиаторов воспаления (Серов В. В. и соавт., 1981; Molar et al., 1994).

Повреждающее действие иммунных комплексов проявляется в двух направлениях: во-первых, они выступают как индукторы воспаления, действующие локальново-вторых, они обладают способностью блокировать иммунологические эффекторные механизмы. Разнообразие иммунопатологических реакций, индуцируемых иммунными комплексами (ИК), определяют условия, от которых зависит преобладание реакций ГНТ или ГЗТ в момент того или иного заболевания, В. В. Серов (1981) среди этих условий главным считает особенности самого ИК, прежде всего в отношении содержания комплемента количественного соотношения антитела с антигеном (при избытке антигена наступает ГНТ, а при избытке антител ГЭТ), а также продолжительности антигенной стимуляции, то есть персистенции ИК. Следовательно, выявленные нами электронной микроскопией ИК в стенках сосудов микроциркуляторного русла приводят к изменениям сосудистой проницаемости, а также подавлению иммунологических механизмов защиты, дают право утверждать об участии ГЗТ в качестве одного из важнейших патогенетических факторов в развитии хламидиозной инфекции.

Сосредоточение хламидий в стенке капилляров приводит к гипертрофии эндотелиальных клеток, что особенно заметно в мелких сосудах. Часть эндотелиоцитов слущивается в просвет сосудов и, разрушаясь, способствует дополнительной генерализации инфекции по организму, другие же сохраняются и даже увеличивают синтез гликогена. Однако гипергликемия клеток вызывает снижение в них образования NO (окись азота) как за счет ингибирования NO-синтаз, так и за счет снижения их экспрессии. При этом низкий уровень оксида азота приводит к повышению тонуса сосудов, свертываемости крови и снижению иммунитета (Серая И. П., Нарциссов Я. Р., 2002). В организме повышается выработка простагландинов — вазоконстрикторов, гликолизированных белков, молекул адгезии эндотелия и факторов роста тромбоцитов. В сумме, это повышает проницаемость сосудов, способствуя ускорению слущивания клеток в капиллярах, ослаблению связей между клетками, усилению адгезивных свойств эндотелиоцитов с миграцией через него различных клеточных элементов из крови в ткани и выработке ими коллагена IV и фибронектина (Paston L., Taylor Р. D., 1995). В результате этого происходит нарушение проницаемости сосудов, способствуя дополнительному выходу из крови в ткани различных компонентов крови, и в конечном итоге образованию тромбов.

Усиление данных процессов свидетельствует о том, что возбудители хламидиоза приобретают более выгодные условия их адгезирования к эндотелию, используя при этом его углеводные компоненты, что дает возможность к дальнейшему пересеву патогенна на другие эндотелиоциты, не подвергнутые инфицированию. При этом нарушение функции эндотелия приводит не только к развитию тромбоза сосудов, но и склеротических изменений последних. Склерозированию стенки сосудов способствует и выработка эндотелием коллагена (Сорокин Е. В., Карпов Ю. Д., 2001).

Макрофагальная реакция тканей матки и плаценты, больных хламидиозом коров и экспериментально зараженных животных, была достаточно сильно выражена, причем в их цитоплазме обнаружены в основном инициальные тельца, которые считаются не патогенными, тем не менее, структура макрофагов была настолько сильно повреждена, что в основном можно было видеть погибшие по типу пикноза макрофаги.

Известно, что макрофаги составляют вторую по численности популяцию иммунокомпетентных клеток в децидуальной оболочке (около 20%). Макрофаги представляют собой естественные резидентные клетки матки и плаценты (Hunt J. S., 1989). Этими клетками богаты децидуальпая и фиброзная ткани, непосредственно прилегающие к плаценте (Bulmer J. N., Johson P. M., 1984). Популяция фетальных макрофагов находится в экстраплацентарных мембранах между мезенхимальной стромой амниона и хориона (Lessin D. L. et al., 1988), а также в ассоциации с мембранами желточного мешка (Wood G. W., 1980).

Их роль в иммунных реакциях трудно переоценить. Макрофаги продуцируют более ста биологически активных веществ или цитокинов, которые регулируют функции практически всех систем организма (Зубова С. Г., Окулов В. Б., 2001). Участвуя в поддержании иммунного гомеостаза и координируя иммунные реакции в системе мать-плод, макрофаги децидуальной оболочки обладают более выраженной супрессорной активностью, чем макрофаги других тканей. Кроме того, в децидуальной оболочке отсутствуют B-лимфоциты, поэтому макрофаги играют основную роль в защите от инфекций (Березовский Ю.С., 2001).

Макрофаги являются основным депо антигена в организме, в них антиген превращается в пригодную для восприятия лимфоцитами форму и может сохраняться в макрофагах в таком состоянии годами (Учитель И. Я., 1970). Антиген, связанный с макрофагами, способен вызывать не только первичный, вторичный ответы, но и гиперчувствительность замедленного темпа (Unanue J., Feldman F., 1971). Продуцируя монокины, макрофаги регулируют защитные реакции и участвуют в развитии специфического иммунитета. Хламидии поглощаются периферическими моноцитами и, таким образом, происходит их распространение по всему организму. Моноциты оседают в тканях и превращаются в тканевые макрофаги. Тканевые макрофаги могуг сохранять жизнеспособность в течение нескольких месяцев до года и более (Маянский Д.Н., 1981). Являясь при этом антигенными стимуляторами они способствуют образованию фиброзных гранулем в здоровой ткани.

Возбудитель заболевания, проявляя тропизм к репродуктивной системе, у супоросных свиноматок преодолевает плацентарный барьер, вызывает заболевание плодов, вследствие чего часть их погибает в утробе матери, доказательством этому являются результаты исследований, проведенных в хозяйствах Пермской области и на свинокомплексе «Рощинский» республики Башкоркостан. Основными клиническими признаками хламидиоза у свиноматок являются аборты во второй половине беременности и рождение мертвых или нежизнеспособных поросят, что объясняется более глубокими и тяжелыми поражениями, связанными с внутриутробной инфекцией плода и развитием патологических процессов во внутренних органах. У абортированных плодов наблюдали отеки подкожной клетчатки в области подгрудка и живота, которые приобретали вид студнеподобного инфильтрата. Кожа в области головы и конечностей синюшна, в грудной и брюшной полости скопление жидкости красноватого цвета.

У мертворожденных поросят и абортированных плодов гистологические изменения обнаружены во всех исследуемых паренхиматозных органах и тканях. Они представлены дистрофическими и некробиотическими процессами, что подтверждает трансплацентарное токсикогенное воздействие хламидий на организм развивающегося плода, вследствие чего в нем развивается инфекционный патологический процесс.

В настоящее время исследователи считают, что в поддержании системы мать-плод играет роль не только организм матери, но и плода. Развивающаяся система иммуногенеза у плода проявляет способность осуществлять иммунологические реакции и именно в этот период онтогенеза появляется механизм распознавания своих и чужеродных антигенов. Иммунная система плода функционирует в сложной ситуации. С одной стороны, она обеспечивает внутренний гомеостаз самого плода, с другой стороны, будучи еще не зрелой, но подвергающейся антигенному воздействию организма матери, она должна быстро адаптироваться и реагировать на эти воздействия (Хлыстова 3. С. и др., 2002). В этом отношении особую опасность представляет внутриутробная инфекция со стороны организма матери в антенатальный период развития плода, когда его иммунная система не достигает окончательной зрелости и в таком состоянии не может справиться с повышенной антигенной нагрузкой (атакой) со стороны организма матери.

Судя по морфологическим изменениям лимфоидных органов (гипоплазия лимфоидных фолликулов селезенки, лимфатических узлов, разрушение телец Гассаля в тимусе), в начальной стадии хламидиоза у плодов развивается иммунодефицитное состояние. На этом фоне у них возникает генерализованная хламидийная инфекция с повреждением гематотканевых барьеров. Надо полагать, что в развитии иммунодефицитного состояния при хламидиозе определенное значение имеют изменения клеточной кинетики, нарушения функции макрофагально-гистиоцитарной системы. Хламидии обнаружены в цитоплазме макрофагов лимфатических узлов, селезенки, пораженных органов, а также в эпителиоретикулоцитах тимуса. Под патогенным действием хламидий указанные клетки и органы часто подвергнуты тяжелым дис-трофическим изменениям.

Особо хотелось бы остановиться на проникновении хламидий через гемато-энцефалический барьер. Гемато-энцефалический барьер всегда был в медицине и ветеринарии предметом многочисленных экспериментов и клинических исследований и до сих пор привлекает к себе всеобщее внимание. Исследователями школы Л. С. Штерн было установлено, что этот барьер выполняет многообразные функции, определяя избирательность и проникновение веществ из крови в цереброспинальную жидкость и обратное прохождение того или иного вещества.

П. А. Самохин и сотрудники (1993) впервые показали высокую тропность хламидийной инфекции к ММО и сосудистым сплетениям головного мозга плодов. Позднее эти данные были подтверждены С. А. Зворыгиным (1999).

Наши исследования, проведенные на абортированных и мертворожденных плодах, их матерях, а также в эксперименте на крысах выявили в оболочках и тканях мозга значительные морфологические изменения. При гистологическом исследовании оболочек и тканей мозга постоянно обнаруживались признаки токсического воздействия, которые проявлялись процессами микронекроза основного вещества мозга, гибелью нейронов. Клеточные инфильтраты, которые в основном обнаружены в оболочках мозга были незначительны, но постоянны, тем не менее, трудно охарактеризовать данный процесс как воспалительный. Хотя все компоненты воспаления — альтерация, экссудация и пролиферация имели место, но два последних были настолько ничтожны, что альтерация буквально затушевывала их. При исследовании мозга как матери, так и плодов постоянно наблюдались явления перинуклеарного, перицеллюлярного и периваскулярного отека, наряду с этим наблюдалось разрыхление вещества мозга.

При окраске препаратов по Павловскому и при микроскопировании их под иммерсией большое обсеменение хламидиями выявлено в оболочках мозга, и незначительное в веществе мозга.

Электронномикроскопическими исследованиями в оболочках мозга выявлены плотные скопления как элементарных, так и ретикулярных телец хламидий. Элементарные тельца имели вытянутую форму, однородный по плотности нуклеотид и четко различимую мембрану. Ретикулярные тельца округлой формы разных размеров, гранулярного или сетчатого вида.

В тканях мозга обнаружены очаги расплавления, отека и дискомплексации ткани. В очагах расплавления видна гибель нейронов, которая характеризовалась нарушением ядерной и цитоплазматической мембраны с выходом ядерного содержимого и деструкцией органелл. Наиболее глубоким изменениям были подвержены лизосомы и митохондрии.

Образование фагосом имело место, но ни в одной из них хламидий не было обнаружено.

Наряду с этим, деструктивным процессам подвержена стенка сосудов микроциркуляторного русла. Эндотелий был представлен в виде узкой полосы, в которой не представлялось возможным дифференцировать органеллы. Периваскулярно постоянно имели место деструкция миелиновых волокон и периваскулярный отек. Основным признаком поражения гематоэнцефалического барьера является, обнаруженный нами, феномен внедрения элементарных патогенных телец хламидий в стенку капилляра, что является одним из патогенетических признаков данного заболевания.

Таким образом, при спонтанном хламидиозе телят и экспериментальном хламидиозе крыс и морских свинок наблюдалось нарушение тканей гемато-энцефалического барьера с деструкцией всей стенки капилляра, внедрением в нее хламидий и периваскулярным отеком. Тяжелые очаговые изменения в оболочках мозга и ЦИС характеризовались не только наличием хламидий, но и возможно обусловлены токсическим действием (распад ткани, отек). Причиной столь глубоких нарушений могли стать макрофаги, которые при активации секретируют большое количество разнообразных цитокинов, оказывающих различное влияние, как на нервное волокно, так и на саму нервную клетку (Зубова С. Г., Окулов В. Б., 2001).

Классической «моделью» физиологической иммуносупрессии является беременность. Сочетание инфекции и беременности представляется неблагоприятным и сопровождается ростом материнской и перинатальной заболеваемости и смертности. К числу таких инфекций, вызывающих иммуносупрессивное состояние организма матери, можно отнести и хламидийную инфекцию. Поэтому интересным, на наш взгляд, представляется изучение ответной иммунной реакции беременного организма при условиях заражения его патогенной культурой хламидий без предварительной вакцинации животного. Мы провели такого рода исследование на морских свинках, не вакцинированных против хламидиоза, и зараженных внутриназально штаммом JIC-87, депонированным 26 апреля 2000 года, выделенным Р. X. Хамадеевым и Ф. М. Хусаиновым из легкого свиньи в 1987 году. В организме инфицированных беременных морских свинок развивались выраженные иммунои патоморфологические процессы, сопровождающиеся яркой иммунологической перестройкой. Патологические изменения выявлялись в виде сосудистых, дистрофических и некротических расстройств, пролиферации лимфоидно-макрофагальных клеточных элементов в органах и тканях. Эти изменения свидетельствуют об яркой ответной реакции организма, проявляющейся как патологическими, так и в некоторой степени компенсаторно-приспособительными процессами, причем следует отметить что ответная реакция проявилась не в виде «малой болезни», соответствующей проявлению прививочного иммунитета, а по сути инфекционного патологического процесса.

Первоисточником и основным резервуаром хламидиоза в хозяйстве являются больные, переболевшие животные и коровы с латентным течением инфекции. В эпизоотическом отношении они наиболее опасны и представляют собой источник рассеивания возбудителя во внешней среде, выделяющегося со всеми секретами и экскретами.

Серьезную опасность заражения представляет инфицированная сперма производителей при естественном и искусственном осеменении. Stellmacher Н. et al.(1983) из спермы и ткани семенников больных хряков удавалось выделить хламидии. В результатах исследований Пермских ученых И. Г. Абаниной (1999), В. А. Четвертных (2001) отмечено, что при внутрибрюшинном заражении экспериментальных животных хламидии проникают в подвздошные лимфатические узлы и семенники и там размножаются в макрофагах, ретикулярных клетках лимфатических узлов, клетках Сертоли семенных канальцев. Свои предположения авторы подтверждают результатами, полученными микробиологическими и гистологическими методами.

При проведении гистологических исследований семенников хряков и экспериментальных животных (крыс) выявлен комплекс изменений не только отдельных клеток, но и всех тканей семенников. Повреждаюшее действие хламидий на семенники хряков и крыс характеризовалось сосудистыми расстройствами, выражающимися в гиперемии мелких и крупных сосудов со стазом крови в них и тромбозом. Аналогичные закономерности — наличие сосудистых нарушений десквамативно-пролиферативного характера в семенниках при риккетсиозах отметили П. Ф. Здродовский и Е. М. Голиневич (1972). Вокруг сосудов образуется лимфоидная инфильтрация, и возникают явления отека интерстициальной ткани семенника. Тромбозы в сосудах приводят к циркуляторной ишемии, что подтверждается и данными И. М. Порудоминского (1968), Т. С. Блиновой (1971), Е. Ф. Мельман, Б. А. Грицуляк (1974). Следствием нарушенного кровообращения является гипоксия тканей семенника. Все это отрицательно сказывается на функционировании органа. Наиболее чувствительными к инфекции оказываются сперматоциты 1 порядка, сперматиды и клетки Сертоли. Стволовые клетки и сперматогонии более устойчивы и погибают лишь при полной отслойке спермиогенного эпителия. В половых клетках появляется вакуольная дистрофия, кариопикноз и кариорексис. Часть клеток полностью гибнет, В просвете канальцев обнаруживается большое количество клеточного детрита, «белковые шары», а также отторгшиеся клетки спермиогенного эпителия. Одновременно происходит дезинтеграция клеток в пласте, в результате чего обнажаются клетки Сертоли. Учитывая важную роль сустентоцитов в процессах сперматогенеза, можно полагать, что их поражение хламидиями является одним из главных звеньев олигоили даже — аспермии, развивающихся у больных животных и человека. Однако все патоморфологические изменения в тканях семенников больше обусловлены разрушением структур гемато-тестикулярного барьера, идущих повсеместно. В результате в ткани извитых канальцев мигрируют лимфоциты и даже наблюдается плазмоцитогенез.

В связи с отеком, гипоксией тканей семенников и поражающим действием хламидий страдают и клетки Лейдига. Вокруг них нередко обнаруживаются лимфоциты. При этом в них начинается кариорексис, вакуолизация цитоплазмы. Клетки теряют связи друг с другом и многие из них погибают. Все это не может не приводить к нарушениям гормонообразующей функции гландулоцитов, а недостаток тестостерона сказывается на процессах сперматогенеза. В ходе эксперимента в семенниках гнездно выявлялись также многоядерные клетки. Как указывали В. X. Апсалямов, А. Н. Бажанов и В. А. Савенко (1993), эти изменения возникают в результате нарушения клонально-синцитиального принципа организации развивающихся половых клеток и являются одним из критериев гипоксического повреждения сперматогенного пласта.

В некоторых случаях характер изменений в семенных канальцах соответствовал некрозу с петрификацией, причину этого мы видим в прямом токсическом действии хламидий на спермии, которые вызывают глубокие морфологические изменения последних и служат ведущим фактором повреждения и нарушения гемато-тестикулярного барьера.

Появление полиморфно-клеточных инфильтратов в тканях семенника, дистрофические изменения и гибель клеток спермиогенного эпителия, отторжение их в просвет канальцев, появление клеток лимфоидного ряда в тканях извитых канальцев свидетельствуют о возможности аутоиммунного механизма поражения органа при хламидийной инфекции. Возникает сочетанное поражение структуры и функции семенников. Эти изменения оказываются сходными с обнаруженными В. М. Бреслером и В. М. Шубиным (1971), изучавших процессы поражения тканей семенников аутоиммунного характера. Нарушение структур гемато-тестикулярного барьера при аутоиммунных процессах отмечается также в работах С. С. Райциной (1970).

При окраске препаратов по Павловскому в сперматогенном эпителии были выявлены хламидии, а при электронно-микроскопических исследованиях спермы хряков обнаружены ретикулярные тельца хламидий.

Хламидии имели различную форму: округлую, овальную, неправильную, с неравномерно плотной мембраной, ограничивающей мелкозернистый с фибриллярными структурами матрикс. Встречались как одиночные ретикулярные тельца хламидий, так и по нескольку экземпляров в поле зрения, неопределенной формы с закругленными контурами, в цитоплазме которых на фоне разрежения матрикса содержалось множество мелких шаровидных или овальных структур. Большая часть их была окружена плотной однослойной мембраной. Другая, меньшая часть, имела трехслойную мембрану, состоящую из двух темных слоев, разделенных светлым слоем. Содержимое структур было аналогично цитоплазме больших хламидий. В одних хламидиях такие структуры занимали примерно половину цитоплазмы, в других полностью всю цитоплазму.

Имелись структуры, которые имели более осьмиофильную мембрану и матрикс, располагались рядом с хламидией, соприкасаясь с ее мембраной. Эти структуры нами идентифицированы как элементарные тельца. Некоторые ретикулярные тельца были нафаршированы «дочерними» тельцами и в местах их скоплений наблюдалась деструкция и лизис мембраны с выходом этих структур во внеклеточное пространство. У части ретикулярных форм были видны вытянутые отростки, которые отпочковываются с образованием мелких телец.

Таким образом, можно предположить, что наличие массы «дочерних» образований в ретикулярных тельцах говорит об их репродукции в геле хламидий, а также происходит отпочковывание телец от «материнской» клетки. Такая массивная репродукция, вероятно, зависит от выраженной метаболической активности ретикулярных форм, а сперма является элективной средой для данного процесса. Считаем, что ретикулярное тельце это та форма микроорганизма, в которой обеспечивается длительное его существование в живом организме. Хламидии в семеннике находятся только в виде ретикулярных телец (не инфекционная форма), а при попадании их в эякулят происходит их активное размножение путем бинарного деления, то есть сперма является тем материалом, который способствует активному процессу деления хламидий, а семенники являются хранилищем возбудителя. Если наше предположение верно и резервуаром латентной инфекции у быков действительно служат семенники, то каким же образом этой системе удается в течение месяцев или даже лет сохранять хламидии в состоянии временного прекращения активности и почему при этом хламидии сохраняют способность проявлять патогенные свойства?

Наличие в сперме только ретикулярных телец хламидий позволяет предположить, что у быков хламидиоз протекает в виде персистентной инфекции.

В результате длительного пути совместной эволюции (коадаптации) многие паразитарные системы выработали «эволюционную мудрость», суть которой заключается в сохранении популяции хозяина ради сохранения популяции паразита. С одной стороны, под действием возбудителя в организме хозяина развивается и иммунитет, и иммунологическая толерантностьс другой, факторы иммунитета обеспечивают изменчивость паразита с целью его уклонения от защитных механизмов хозяина (Бухарин О. В., 1997).

Под действием хламидий в сперматогенном эпителии развиваются дегенеративные процессы, приводящие к изменению морфологии половых клеток, то есть появлению аномальных форм спермиев.

При электронно-микроскопическом исследовании сперматозоидов мы обнаружили разрежение и деформацию ядра головки и шейки. Отмечали нарушение клеточной оболочки по всему телу, которое выражалось в отслаивании, полном исчезновении, а также встречались участки осмиофилии. Имел место лизис структур и обволакивание вокруг гомогенной массой.

Таким образом, в результате экспериментальной хламидийной инфекции у крыс и спонтанного хламидиоза у быков в семенниках возникают изменения, приводящие к олигои асперматогенезу, в связи с нарушением иммунологического контроля над процессами развития половых клеток при нарушении гормонобразующей функции семенников, но мы не исключаем непосредственное повреждающее действие хламидий на спермии, что доказано электронно-микроскопическими исследованиями. В литературе появились сообщения о том, что хламидии способны прикрепляться к сперматозоидам и в виде «наездников» могут достигать не только маточных труб, но и попадать в брюшную полость и вызывать перитонит и перигепатит.

При проведении эксперимента на крысах были изучены изменения в организме самцов, зараженных вирулентной культурой хламидий. Исследованы паренхиматозные органы — печень, почки, селезенка, сердечная мускулатура, легкие, лимфатические узлы.

В печени отмечены дистрофические, воспалительные и компенсаторно-приспособительные процессы. При этом наряду с зернистой и жировой дистрофией гепатоцитов наблюдали активизацию клеток Кулфера, которая вызывала повреждение гепатоцитов, так как под действием хламидий происходит активная продукция макрофагом свободных радикалов, оказывающих разрушающее действие на гепатоциты (Зубов С. Г., Окулов В. Б., 2001). Подтверждением сказанному является обнаруженный нами цирротический патологический процесс по типу гипертрофического цирроза.

В миокарде всех исследованных экспериментальных животных имели место различные расстройства гемодинамики. По последним данным, полученным в экспериментах на мышах канадскими исследователями, поверхностный белок хламидий имеет сходную антигенную структуру с мышиным миозином. В результате иммунного ответа на хламидийную инфекцию запускается аутоиммунная реакция на собственный миозин (Berger А., 1999) и возникает воспаление сердечной ткани.

Таким образом, семенники играют не маловажную, а возможно основную роль в персистенции возбудителя, обеспечивая циркуляцию его в организме отца, а ткани плацентарного барьера матери и плода являются передаточным звеном.

Современная и надежная профилактика хламидиоза способна обеспечить стойкое благополучие поголовья от данного заболевания. Хламидийный вакцинный процесс вызывает значительные иммунобиологические, а равно и иммуноморфологические сдвиги в организме животных. Морфологическая перестройка, представленная в виде «малой болезни», повторяет некоторые черты инфекционного процесса, но в меньшей степени выраженные. В организме привитого животного развивается воспаление на иммунной основе с оседанием в стенке сосудов повреждающих иммунных комплексов, усиленной избыточной пролиферации, приводящей в конечном итоге к склеротическим процессам.

При оценке иммунологического состояния организма необходимо учитывать, что иммунологические, как и другие физиологические процессы, составляют основу жизнедеятельности и направлены на поддержание структурно-функционального единства организма (Учитель И. Я., 1970), а исход этого процесса полностью определяется соотношением таких компонентов, как количество поступивших во внутреннюю среду организма антигенов, степень их связывания во внутренней среде и выраженность ответной реакции специализированной системы иммуногенеза (Кундрюкова Л. И., 1986).

В период беременности между организмом матери и развивающимся плодом возникают сложные иммунные взаимоотношения, проявляющиеся определенными иммуноморфологическими изменениями. У вакцинированных животных, когда процесс иммуногенеза еще не завершился, наслоение беременности вызывает дополнительную антигенную нагрузку на организм. В организме беременного животного происходят изменения в обмене веществ, и начинает развиваться плод.

По мнению Д. Тейлор-Робинсон, П. Е. Хей (1998) преобладание персистентных форм хламидий у беременных женщин связано с повышением количества эстриола, которое во время беременности повышается в 10 раз, при том концентрация активного эстрадиола не меняется. Если предположить, что существует гормональная регуляция уровня метаболизма хламидий у женщин, то концентрация эстриола при беременности может быть ингибитором роста хламидий. В пользу гормональной регуляции свидетельствует также то, что изоляцию хламидий в культуре клеток у женщин легче проводить во вторую фазу цикла, накануне менструации, а не в овуляцию, на фоне гиперэстрогении (Гасанова Т. А., 2001).

Мы при своих исследованиях не проводили изучение гормонального фона у беременных коров, но анализ заболеваемости и частота хламидиозных абортов у коров дают основание считать, что у них происходит сенсибилизация организма к персистирующим хламидиям и стабильность их гормонального фона вместе предопределяют развитие гиперчувствительности немедленного типа и как следствие этого аборг. Причем существующее положение на комплексе, когда не проводится систематизированного лечения хламидиоза, приводит к тому, что коровы абортируют не во второй половине супоросности, а в период беременности в 40 — 60 дней, что еще раз подтверждает сенсибилизацию организма животного персистирующими формами хламидий.

Главными эффекторными клетками в борьбе с внутриклеточными возбудителями являются макрофаги, 14К-клетки и Т-лимфоциты. Их микробицидные и цитотоксические свойства резко повышаются под влиянием аи? З-интерферонов, ФИО, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-12 и других цитокинов, продуцируемых после ак-гивации антигенами возбудителя этих же 3 популяций клеток. Первой клеткой, с которой встречается возбудитель, преодолевший слизистые или кожные покровы, является тканевой макрофаг.

Макрофаги поглощают опсонизированные микробы, убивают их (далеко не всегда), активируются и синтезируют цитокины. От макрофага зависит развитие раннего индуцибельного ответа, осуществляющего защиту организма от микроба в первые 96 ч инфекционного процесса и заключающегося в синтезе ряда указанных монокинов, а также иммунного адаптивного ответа, осуществляющего защиту организма от инфекции на поздних стадиях инфекционного процесса и заключающегося в развитии гуморального (синтез специфических антител) и клеточного (образование популяции антиген специфических Т-лимфоцитов), иммунного ответа (Janeway С. A., Trever Р., 1997). Макрофаг, захвативший микроб, активизируется и синтезирует ряд монокинов, которые повышают функциональную активность новых моноцитов/макрофагов, нейтрофилов и NK-клеток. Этот макрофаг, расщепив с помощью своей ферментной системы микроб, представляет его антигенные детерминанты Ти В-лимфоцитам, индуцируя тем самым развитие гуморального и клеточного ответа и продуцируя некоторые цитокины, необходимые для его развития (Хаитов Р. М., Пинегин Б. В., 1999).

Наряду с активацией Т1-хелперного звена также идет выработка большого количества цитокинов в макрофагах с последующей активацией «респираторного взрыва». Но выбрасываемые при этом свободные радикалы не способны повредить «жесткую» клеточную стенку как ЭТ хламидий, прочность которых обеспечивается за счет антиоксидантной роли дисульфидных (-S-S-) связей между структурными белками МОМР, так и РТ. Прочность последних обусловлена полисахаридной микрокапсулой, устойчивой к супероксидному радикальному окислению. Вместо микробицидного действия активные формы кислорода приводят к активации перекисного окисления липидов (ПОЛ) и повреждению двойного слоя мембран собственных клеток.

К цитокинам, вырабатываемым активированными макрофагами относится уинтерферон (у-ИФ). Высокие дозы у-ИФ полностью ингибируют рост хламидий. Низкие дозы, наоборот, индуцируют развитие морфологически аберрантных форм включений (Wyrick Р. В. et. al., 1994; Campbell L. A. et. al, 1993).

Фагоцитоз хламидий тканевыми макрофагами осуществляется с помощью псевдоподий, тогда как для других клеток, не являющихся профессиональными фагоцитами, характерна инвагинация участка плазмалеммы с адсорбированным элементарным тельцем в цитоплазму и образованием фагоцитарной вакуоли. Особенностью элементарных телец является их способность стимулировать свой эндоцитоз чувствительной клеткой, а также ингибировать слияние лизосом с фагосомой, содержащей хламидии в клетке-хозяине, что препятствует реализации лизосомальной активности и деструкции хламидий фаголизосомиой системой эукариотической клетки, способствуя, следовательно, внутриклеточному выживанию возбудителя (Мавзютов А. Р., 2002).

Активированные макрофаги продуцируют фактор некроза опухоли (ФНО), который опосредованно через ИЛ-1 активирует пролиферацию основных клеток соединительной ткани, способствуя фиброобразованию, а также повышает адгезивную способность лимфоцитов по отношению к эндотелию сосудов и реактивирует макрофаги. Избыточная продукция ФНО активированными макрофагами может привести к прерыванию беременности вследствие возможных деструктивных изменений и циркуляторных нарушений в плаценте (Воронин Е. С. и др., 2002).

Обнаруженные нами изменения в морфо-функциональной системе «мать-плацента-плод» при хламидиозе у коров и в эксперименте у беременных морских свинок и крыс и их потомства, выявили своеобразный, закономерно развивающийся патологический процесс, свидетельствующий о взаимоотношениях макрои микроорганизма. Учитывая всю гамму вариабельности хламидий, приспособление их к изменяющимся условиям внутренней среды организма восприимчивого животного, вырисовывается классическая картина приспособления путем трансформаций и выживания вида микроорганизма, независимо от среды обитания, то есть от вида животного, в организме которого он находится. Комплекс выявленных нами патологических процессов в организме матери и плода у коров, морских свинок и крыс, можно отнести к патогномоничным для хламидиоза.