Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Свойства ферментов, включенных в нестехиометричные полиэлектролитные комплексы

Диссертация: Свойства ферментов, включенных в нестехиометричные полиэлектролитные комплексы
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Исследование влияния на поведение фермента сложных структурных изменений полиэлектролитного носителя требует, по всей видимости, использования в качестве модели сложных полиэлектролитных систем. Это стало возможным совсем недавно в связи с открытием нового класса нестехиометричных полиэлектролитных комплексов (НПЭК), состоящих из нескольких полиэлектролитных компонентов с высокой плотностью… Читать ещё >

Свойства ферментов, включенных в нестехиометричные полиэлектролитные комплексы (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
  • 1. РЕГУЛЯЦИЯ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ФЕРМЕНТОВ ПШ ИММОБИЛИЗАЦИИ НА ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТАХ
    • 1. 1. Влияние иммобилизации на полиэлектролитах на кинетические свойства ферментов
    • 1. 2. Положительная и отрицательная кооперативность при низкой ионной силе
    • 1. 3. Влияние полиэлектролитного окружения на специфические взаимодействия между белками
    • 1. 4. Регуляция стабильности ферментов синтетеческими водорастворимыми полимерными носителями
    • 1. 5. Влияние иммобилизации на полиэлектролитах на термодинамику обратимых ферментативных реакций
  • 2. ПРИМЕНЕНИЕ ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТОВ ДЛЯ ИММОБИЛИЗАЦИИ БЕЛКОВ
    • 2. 1. Нековалентные комплексы, включающие синтетические поли электролиты и биополимеры
    • 2. 2. Обратимо-растворимые ферментативные системы
  • 3. НОВЫЙ КЛАСС КОМПЛЕКСНЫХ ВОДОРАСТВОШМЫХ ПОЖЭЛЕКТРОШТОВ
  • 4. ЭКСПЕНМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
    • 4. 1. Материалы
    • 4. 2. Методы.Модификация ферментов сшивающими агентами,
    • 4. 3. Связывание ферментов с поликатионом (ПВП)
    • 4. 4. Выделение ферментов, связанных с поликатионом
    • 4. 5. Связывание ферментов с полианионом (ПМАК)
    • 4. 6. Выделение ферментов, связанных с полианионом
    • 4. 7. Определение активности ферментов
    • 4. 8. Получение фазовой диаграммы системы поликатион-полианион
    • 4. 9. Измерение размеров коллоидных частиц
    • 4. 10. Светорассеяние растворов полимеров
    • 4. 11. Титрование нативного и иммобилизованного в полиэлектролитные комплексы о (-химотрипсина основным панкреатическим ингибитором трипсина
    • 4. 12. Термоинактивация нативных ферментов
    • 4. 13. Термоинактивация иммобилизованных ферментов
    • 4. 14. Нековалентное комплексообразование ферментов с поли электролитами
  • 5. СВОЙСТВА НЕСТтОМЕТШЧШХ ПОЖЭЛЖТРОЛЙТНЫХ КОШЕКСОВ (НПЭК)
    • 5. 1. Фазовые диаграммы растворов НПЭК
    • 5. 2. Свойства нестехиометричных полиэлектролитных комплексов, содержащих ферменты
  • 6. ВЛИЯНИЕ ФАЗОВЫХ ПРЕВРАЩЕНИЙ В РАСТВОРАХ НЕСТЕХИОМЕТРИЧНЫХ ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТШХ КОМПЛЕКСОВ НА. КИНЕТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИММ0БИЖ30ВАННЫХ ФЕШЕНТОВ
    • 6. 1. Гидролиз низкомолекулярных субстратов
    • 6. 2. Влияние полиэлектролитного окружения на белок-белковые взаимодействия
  • 7. ВЛИЯНИЕ ФАЗОВЫХ ПРЕВРАЩЕНИЙ В РАСТВОРАХ НПЭК НА ТЕШШНАКТИВАЦИЮ ИММСШЖЗСВАННЫХ ФЕРМЕНТОВ
  • 8. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЖЭЛЕКТРОЖТШХ КОМПЛЕКСОВ ДЛЯ ВЫВЕДЕНИЯ ФЕРМЕНТА ИЗ СФЕРЫ РЕАЫЩ
    • 8. 1. Выведение фермента из реакционной смеси, используя нестехиометричный ПЭК
    • 8. 2. Использование стехиометричного комплекса состава I для аналитических целей
  • ВЫВОВД
  • СПИССК ЛЙТЕРАТУШ
  • СПИСОК ПРИНЯТЫХ В ТЕКСТЕ СОКРАЩЕНИЙ

Интерес к использованию ионогенных полимерных матриц по сравнению с неионогенными для иммобилизации связан с широким набором свойств, которые несут полиэлектролиты. Более того, физико-химические свойства полиэлектролитов зависят от таких параметров внешней среды, как рН, ионная сила, температура, концентрация ионов металлов /I/. Это позволяет широко варьировать условия, в которых могут находиться ферменты, причем эти условия можно целенаправленно задавать. Иммобилизация ферментов на синтетических полиэлектролитах открывает богатые возможности для регулирования свойств получаемых иммобилизованных ферментов. В научном аспекте изучение свойств иммобилизованных на полиэлектролитах ферментов необходимо прежде всего для понимания катализа a? vivo. В ряде работ убедительно показано, что внутриклеточные ферменты в основном ассоциированы с различными фракциями клетки /2, 3/, в том числе клеточными стенками и мембранами, белками, нуклеиновыми кислотами, фосфолипидами, которые в свою очередь являются природными полиэлектролитами.

Влияние химической природы и, в частности, заряда носителя на свойства связанного фермента интенсивно изучалось и изучается. Однако, влияние заряженной матрицы на поведение фермента посредством микроокружения — не единственный путь регуляции ферментативной активности внутри клеток. Jw vivo структурные изменения природных полиэлектролитных матриц, например, агрегация и плавление, также вызывают существенные изменения в функционировании ферментов /4−6/. Такое влияние иммобилизации на свойства фермента через физическое состояние матрицы пока изучено крайне недостаточно /7/.

Исследование влияния на поведение фермента сложных структурных изменений полиэлектролитного носителя требует, по всей видимости, использования в качестве модели сложных полиэлектролитных систем. Это стало возможным совсем недавно в связи с открытием нового класса нестехиометричных полиэлектролитных комплексов (НПЭК), состоящих из нескольких полиэлектролитных компонентов с высокой плотностью заряда — полианиона и поликатиона /8, 9/. В отличие от стехиометричных полиэлектролитных комплексов НПЭК в определенных условиях не выпадают в осадок и ими можно оперировать как обычными растворимыми полиэлектролитами. Вместе с тем, усложнение структуры по сравнению с линейными полиэлектролитами приводит к тому, что НПЭК обладают рядом уникальных свойств. Во-первых, растворы НПЭК способны к изменению фазового состояния при определенных условиях (рН, ионная сила, Ме2+). Во-вторых, фазовые переходы, вызываемые изменением ионной силы и рН, являются полностью обратимыми.

Можно ожидать, что использование НПЭК для иммобилизации может привести к появлению уникальных свойств у связанного фермента. Это представляет интерес как с точки зрения биомоделирования, так и для получения новых обратимо растворимых биокатализаторов.

В настоящей работе было исследовано влияние фазовых переходов растворов НПЭК и структурных изменений НПЭК в растворе до фазовых переходов на каталитические свойства и термостабильность включенного биокатализатора.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

I. РЕШИЦИЯ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ФЕРМЕНТОВ ПРИ ИММОБИЛИЗАЦИИ НА ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТАХ.

Изменения, происходящие в ферментативных системах при иммобилизации на полиэлектролитах, можно подразделить на следующие составные части.

1). Образование помимо ковалентных дополнительных неко-валентных (электростатических, водородных, гидрофобных) связей белок-носитель.

2). Эффекты микроокружения, которые являются наиболее выраженными в случае заряженной матрицы. Свда входит также влияние носителя на диэлектрическую константу фазы иммобилизованного фермента, влияние на локальную растворимость субстрата и продукта.

3). Диффузионные ограничения, имеющие место в том случае, когда кинетические параметры ферментативной реакции определяются, в значительной степени, скоростью диффузии субстрата через неперемешиваемый слой вокруг матрицы. Эти ограничения могут быть особенно выражены в случае заряженных субстратов и продуктов.

4). Стерические эффекты, когда фермент взаимодействует с высокомолекулярными субстратами, ингибиторами, играют существенную роль в случае гетерогенной системы.

5). Модификация фермента при иммобилизации. Это может быть химическая модификация фермента, вызываемая кова-лентным связыванием в результате изменения собственного общего заряда фермента. В случае полиэлектролитных носителей такое влияние обычно перекрывается гораздо большими электростатическими эффектами микроокружения, создаваемого носителем. В эту группу входят также специфические влияния соседних химических груш на область активного центра, а также изменения в межмолекулярных взаимодействиях.

6). Нельзя исключать возможности, что электрическое поле носителя влияет на его структуру и/или вызывает конформа-ционные изменения в ферменте.

Накопленные литературные данные позволяют оценить влияние этих ключевых факторов на: константы взаимодействия с низкомолекулярными субстратами (ккат, Км, К0, к,) и рН-зависимость этих константпоявление положительной и отрицательной кооперативностиизменение субстратной специфичности по отношению к высокомолекулярным субстратамвлияние на термодинамику ферментативных реакций (положение равновесия).

ВЫВОДЫ.

1. Разработарха методика включения ферментов в частицу ШЭК. Получены препараты ШЭК, содержащие пенищшшнамидазу, пенициллин-/-ацилазу, с (-химотрипсин, уреазу, глутаматде-гидрогеназу. Показано, что включение бежа в ШЭК практически не изменяет свойства комплексов. ШЭК с включенным ферментом способен претерпевать кооперативные фазовые переходы в узком диапазоне изменений внешних условий (рН, ионная сила раствора), причем такие фазовые переходы являются обратимыми и могут быть проведены многократно.

2. Изучены некоторые свойства самих ШЭК. Обнаружено, что существенные конформационные перестройки комплексов, а также их компактизация происходят еще до достижения условий фазового разделения. Получены диаграммы агрегации системы ПМАК-ПВП.

3. Показана зависимость каталитических свойств пенициллинамидазы, включенной в ШЭК, от фазового состояния ШЭК. Фазовый переход раствор ч~ осадок, вызванный изменением рН, приводит к скачкообразному увеличению величины Км ферментативного гидролиза бензилпенициллина в 5,7 раз, 2-нитро-4-фе-нилацетамидобензойной кислоты — в 9,8 раз. Компактизация частиц ШЭК, содержащих пенициллинамидазу, при изменении рН среды до границ фазового перехода никак не сказывается на взаимодействии фермента с низкомолекулярным субстратом.

4. Расположение фермента в частице ШЭК оказывает существенное влияние на его взаимодействие с белковым ингибитором. Так, ковалентное присоединение (Ахимотрипсина к цепи полианиона делает его практически полностью доступным к взаимодействию с основным панкреатическим ингибитором трипсина независимо от фазового состояния НПЭК. Если же фермент включен в ядро ШЭК, то основная его часть недоступна белковому ингибитору, причем осаждение НПЭК увеличивает долю недоступного фермента.

5. Включение фермента в НПЭК дает возможность регулировать не только его активность, но и термостабильность. Существенная стабилизация ферментов (пенициллинамидазы до 300 раз, уреазы до 20 раз), включенных в ядро НПЭК, происходит при фазовом переходе ШЭК раствор осадок, причем изменения стабильности полностью определяются влиянием матрицы, являются обратимыми и могут быть проведены многократно.

6. Модификация Л-химотрипсина полиметакриловой кислотой существенно улучшает белок-белковые взаимодействия с основным панкреатическим ингибитором трипсина: прочность комплекса улучшается примерно на порядок, а скорость реакции ассоциации увеличивается в 6 раз. Кроме того, такая модификация позволяет выделять комплекс фермент-ингибитор из реакционной смеси при добавлении поли- [/-этил-4-винилпиридиний бромида при полном отсутствии неспецифического включения белка в поликомплекс. На основании этих результатов предложен новый метод гомогенного иммуноферментного анализа.

Показать весь текст

Список литературы

  1. А.Б. Полиэлектролиты. — В кн.: Энциклопедия полимеров: В 3-х т./ Под ред. И. В. Кабанова. М., 1977, т. 3, о. 90−102.
  2. Kempner E.S., Miller J.H. The molecular biology of Euglena gracilis. -Exptl. Cell Res., 1968, vol. 51, N 1, p.150−156.
  3. А. Биохимия: Пер, с англ. М.: Мир, 1974, о. 856−866.
  4. Londesborough J. The cauaes of sharply bent or discontinuous Arrhenius plots for enzyme-catalyzed reactions. Europ. J. Biochem., 1980, vol, 105, N 2, p.211−215.
  5. Hatefi Y., Yagi Т., Phelps Б.С. et al. Substrate binding affinity changes in mitochondrial energy-linked reactions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, vol.79, H 6, p. 1756−1760.
  6. Bozzato R.P., linker D.O. Effects of membrane fluidity and identification of the rate-limiting step in the protein mediated phosphatidylcholine exchange reaction. Canad. J. Biochem., 1982, vol .60, H 4-, p.409−418.
  7. К., Шикшнио В. А., Можаев В. В., Березин И. В., Смирнов В. И., Торчилин В. П. Регулирование каталитической активности фермента, иммобилизованного на полиэлектролитном нооителе. Докл. АН СССР, 1981, т.259, № 3, с. 746−750.
  8. Tsuchida E., Osada Y., Sanada K. Interaction of polystyrene sulfonate) with polycations carrying charges in the chain ЪаскЪопе. J. Polymer Sci., Polymer Chem. Ed., 1972, vol.10, N 11, p.3397−3404.
  9. .Г., Полетаева О. А., Калачев А*А., Касаикинt
  10. В.А., ЗезинА.Б. Исследование водорастворимого полиэлектролитных комплексов на основе 5,6-ионен бромида и полиакриловой кислоты, Высокомолек. соед., 1976, т. А18, № 12, о. 2800−2805.
  11. Busch Н, Eistones and other nuclear proteins. F. Y": Acad. Press, 1965, p. 197−222.
  12. Cundall R.B., bawton J, B., Murray D., Phillips G.O. Polyelectrolyte complexes. 2. Interaction between collagen and polyanions. Intern. J. Biol. Macromol., 1979, vol. 1, N 5, p. 215−222.
  13. Huxley A.P. Muscle structure and theories of contraction. Progr. Biophys. Biophys. Chem., 1957, vol. 7, P. 255−312.
  14. Morell A.Gr., Gregoriadis &., Scheinberg I. H, et al, The role of sialic acid in determining the survivalof glycoproteins in the circulation. -J. Biol. Chem., 1970, vol. 246, N 5, P. 1461—1467.
  15. Smith G.F. Fibrinogen fibrin conversion. — Biochem. J., 1980, vol. 185, N 1, p. 1−11.
  16. Griffith M.J. Kinetic analysis of the heparin-enhanc-ed antithrombin III/thrombin reaction. J. Biol. Chem., 1979, vol. 254, N 23, p. 12 044−12 049.
  17. Besancon 3?., Bourgeade H.P., Justesen J. et al. Two inducers of cell differentiation enhance the 2'5!о11goadenylate synthetase activity in MSY transformed cells, -Biochem. Biophys, Res. Commun., 1981, vol. 103, N 1, p. 16−24.
  18. Bonfils C., Nato E., Bourrillon R., Balny C. Poly-anionic character of plasma membrane, sialoglycopro-teins. FEBS Lett., 1981, vol.123, N 2, p.222−224.
  19. Katchalsky A., Michaeli I. Polyelectrolyte gels in salt solutions. J. Polymer Sei., 1955, vol.15,N 79, P. 69−86.
  20. McLaren A.D., Esterman E.F. Influence of pH on the activity of chymotrypsin at a solid-liquid interface, Arch. Biochem. Biophys., 1957, vol.68, N 1, p, 157−160.
  21. McLaren A.D., Babcock K.L. Characteristics of enzyme reactions at surfaces. Inj Subcellular Particles/ / T, Hayashi, ed. N.T.: Ronald Press, 1959, p.23−36.
  22. Levin Y., Peeht M., Goldstein L., Katchalski E. A water-insoluble polyanionic derivative of trypsin (I) preparation and properties. Biochemistry, 1964, vol. 3, H 12, p. 1905−1913.
  23. Goldstein L., Levin Y., Katchalsky E, A water-insoluble polyanionic derivative of trypsin. 2. Effect of polyelectrolyte carrier on the kinetic behavior of the «bound trypsin. Biochemistry, 1964, vol, 3, N 12, p. 1913−1919.
  24. Goldstein L. Water-insoluble derivatives of proteolytic enzymes. — In: Methods in Enzymology. N.Y.j Acad. Press, 1976, vol. 19, P. 935−962.
  25. Goldstein L., Katchalski E. Use of water-insoluble enzyme derivatives in „biochemical analysis and separation, Presenilis Ztschr, analyt. Chem., 1968,1. Bd. 243, S. 375−396.
  26. Pecht M., levin Y. Water-soluble polycationic derivatives of trypsin and chemotrypsin — preparation and properties. -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1972, vol. 46, N 6, p. 2054−2061.
  27. Hornby W.E., Lilly M.D., Crook E.M. The preparation and properties of ficin chemically attached to carbo-xymethylcellulose. Biochem. J., 1966, vol.98, N 2, p. 420−425.
  28. Hornby W.E., Lilly M.D., Crook E.M. Some changes in the reactivity of enzymes resolving from their chemical attachment to water-insoluble derivatives of cellulose“ -Biochem. J., 1968, vol.107, N 5, p.669−674.
  29. Eatchalski E., Silman I., Goldman R. Effect of the microenvironment on the mode of action of immobilized enzymes. In: Advances in Enzymology and Related Areas of Molecular Biology. N.T.i Acad. Press, 1971, vol. 34, P. 445−536.
  30. Bender M.L., Kezdy F, J, Mechanism of action of proteolytic enzymes, — In: Annual Review on Biochemistry, Palo Alto, Calif, 1965, vol. 34, p» 49−76,
  31. Easamoto К. Surface charge densities and ionic substrate concentrations at the membrane surface in smooth microsomes isolated from rat liver, J* Bio-chem. (Tokyo), 1982, vol. 92, N 2, p. 365−371.
  32. Tamura A, Fujii I. Roles of charged groups on the surface of membrane lipid bilayer of human erythrocytes in induction of shape change. J. Biochem. (Tokyo), 1981, vol. 90, N 3, p. 629−634.
  33. Стрельцова 3, A., Швядао В. К", Макоименко А. В. и др. Влияние полиэлектролитов на свойства пенициллинамидафзы и щелочной фосфатазы. Биоорг. химия, 1975, т"1, В 10, о. 1464−1469.
  34. Wo-jtezak L., Famulski K.S., ITalecz E#J., Zborowski J. Influence of the surface potential on the Michaelis constant of membrane—bound enzymes. Effect of membrane solubilization. FEBS Lett., 1982, vol, 139, H 2, p. 221−224.
  35. Douzou P., Maurel Pt Ionic control of biochemical reactions. С.R.Acad.Sci., Paris, 1976, vol, 282D, N 18, p. 2107−2110.
  36. Goldstein D. Eicroenvironmental effects on enzyme catalysis, A kinetic study of polyanionic and polycationic derivatives of chymoifcr. -Biochemistry, 1972, vol.11,1. H 22, p. 4072−4084.
  37. Engasser JHorvath C. Electrostatic effects on the kinetics of bound enzymes, Biochem. J., 1975, vol. 145, N 3, p. 431−435.
  38. Goldstein It. Immobilized enzymes. Synthesis of a new type of polyanionic and polycationic resins and their utilization for the preparation of water-insoluble enzyme derivatives. Biochim. Biophys. Acta, 1973, vol. 315, N 1, p. 1−17.
  39. Goldman R., Kedem 0., Katchalski E. Kinetic behavior of alkaline phosphatase collodion membranes. Biochemistry, 1971, vol. 10, li 1, p. 165−172.
  40. Noat G., Crasnier M., Ricard J, Idnic control of acid phosphatase activity in plant cell walls. Plant Cell Environm., 1980, vol. 3, N 3, p. 225−229.
  41. Wishio I., Hayashi R. Digestion of protein substrates by subtilisin: Immobilization changes the pattern of products. Arch. Biochenu Biophys., 1984, vol. 229, H 1, P. 304−311.
  42. Von Specht B.-U., Brendel W. Preparation and properties of trypsin and chymotrypsin coupled covalentlyto poly (iT-vinylpyrrolidone). Biochim. Biophys .Acta, 1977, vol. 484, N 1, p. 109−114.
  43. О.Б., Жагат Р. Л., Торчилин В. П. Модификация ферментов биосовместимыми полимерами. Биоорг. химия, I960, т. 6, В 9, с. 1396−1403.
  44. Glazer A.N., Bar-Eli A., Katchalski Е. Preparation and characterisation of polytyrosyl trypsyn. —J.Biol. Chem., 1962, vol, 237, N 6, p. 1832−1838.
  45. Kasche Y. Effect of the microenvironment of the specific interaction between —XI and immobilized soybean trypsin inhibitor. Studia Biophysica, 1973, Bd.35,1. N 1, 5. 45−56.
  46. Иммобилизованные ферменты: В 2-х т./ Под ред, Й. В. Березина, В. К, Антонова, К. Мартинека. М.: Изд-во МГУ, 1976, т. 2, с. 109−147.
  47. В.В. Инактивация и реактивация белков (ферментов). В кн.: Введение в прикладную энзимологию/ Под ред. К. В. Березина, К, Мартинека. М.: Изд-во МГУ, 1982, с. 180−193.
  48. К., Березин И. В. Стабилизация ферментов -ключевой фактор при внеднении биокатализа в практику. Успехи химии, 1980, т. 49, вып. 5, с. 737−770.
  49. К. Стабилизация ферментов один из ключевых факторов при внеднении биокатализа в практику. — В кн.: Успехи биоорганического катализа/ Под ред. И. В. Березина, К, Мартинека. М.: Изд-во МГУ, 1979, с.105−157.
  50. К., Торчилин В. П. Основные принципы стабилизации ферментов. В кн.: Инженерная энзимология и биоорганический катализ/ Под ред. В. Л. Кретовича, И. В. Березина. М.: ВИНИТИ, 1978, с. 17−48. (Итоги науки и техники, серия Биол. химия, т. 12).
  51. Н.И., Торчилин В. П. Применение иммобилизованных физиологически активных веществ белковой природы в медицине. В кн.: Введение в прикладную энзи-мологию/ Под ред. И. В. Березина, К. Мартинека. М.: Изд-во МГУ, 1982, с. 284−305.
  52. В.П., Рейзер И. Л., Тищенко Е. Г. и др. Иммобилизация ферментов на биосовместимых носителях. «Биоорг. химия, 1976, т. 2, № 12, с. 1687−1694.
  53. Westman Soluble stable polyelectrolyte derivative of trypsin. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1969, vol. 35, N 3, p. 313−317.
  54. Н.Ф., Кост O.A. Модифицирование трипсина водорастворимым полиэтиленимином. Биоорг. химия, 1975, т. 1, $ 9, с. 1332−1336.
  55. Epstein C.J., Anfinsen C.B., Sela M. Polyalanyl trypsin and polyalanyl chymotrypsin. „J. Biol. Chem., 1962, vol. 237, N 11, p. 3458−3463.
  56. Sakharov I.Yu., barionova N.I., Kazanskaya N.F., Be-rezin IЛ• Stabilization of proteins by modification with water-soluble polysaccarides. Enzyme Microbiol. Technol., 1984, vol.6, p. 27−30.
  57. Bier М., Sri Ram J., Nord F.F. Inhibition of acyltrypsins Ъу human serum. Nature, 1955, vol. 176, p, 789−790.
  58. M.M., Осипов А. П., Егоров A.M., Березин И. В., Муотафаев М.й., Кирш Ю.Э“, Кабанов В. А. Стабилизация лабильной к окислению SH-групп формиат-дегидрогеназы поликатионом. Докл. АН СССР, 1979, т. 248, & 5, с. 1260−1263.
  59. Dikov М.М., Osipov А.Р., Bgorov A.M. et al. Method of stabilization of SE-enzymes: Stabilization of formate dehydrogenase and alcohol dehydrogenase of polyca-tions. J. Solid-Phase Bioehem., 1980, vol, 5, N 1,
  60. Ingalls R.G., Squires R.G., Butler L.G. Reversal of enzymic hydrolysis: Rate and extent of ester synthesis as catalyzed Ъу chymotrypsin and subtilisin Carlsberg at low water concentrations. Biotechnol. Bioengng., 1975, vol. 17, N 11, p. 1627−1637.
  61. Klibanov A.M. Enzyme stabilization by immobilization. Analуt. Bioehem., 1979, vol.93, N 1, p.1−25.
  62. Kapune A., Easche If. Kinetically controlled equilibria. The perturbation of hydrolysis equilibria in reactions catalyzed by -chymotrypsin immobilized on charges supports. -Bioehem. Biophys. Res. Commun., 1978, vol. 80, N 4, p. 955−962.
  63. Carroll D. Optical properties of deoxyribonucleic acid-polylysine complexes, -Biochemistry, 1972, vol. 11, IT 3, p. 421−433.
  64. C.B., Гликина M.B., Самсонов Г. В. Осаждение трипсина полиметакриловой кислотой. Изв. АН СССР, 1
  65. Сер. хим., 1970, № 8, с. 1895−1896.
  66. Г. В. Полимерные комплексы, включающие синтетические полиэлектролиты и физиологически активныеiкомпоненты. Высокомолек. соед., 1979, т. А21, $ 4, с. 723−733.
  67. Morawetz Н., Hughes W. b, Jr# Interaction of proteins with synthetic polyelectrolytes. 1, Complexing of Ъо-vine serum albumin. J. Phys, Chem., 1952, vol, 56, i1. N 1, p. 64−69.
  68. Berdick M., Morawetz H. Ihe interaction of catalase with synthetic polyelectrolytes. -J. Biol. Chem., 1954, vol. 206, U 2, pt 959−962.
  69. Poison A, Potgieter G.H., bargier J. P, et al. Fractionation of protein mixtures by linear polyfraction-ation of high-molecular weight. Biochim. Biophys. ' Acta, 1964, vol. 82, N 3, p. 463−475.
  70. Кабанов В. к, Муотафаев Н. И., БлохинаВ.Д., Агафьева B.C. О кункурентных взаимоотношениях фракций белков „сыворотки при образовании комплексов с поликатионом.- Молек. биология, 1980, т. 14, II, о. 64−75.
  71. Kokufuta Е., Matsumoto W., Rakamuro I. Immobilization of Kitrosomonas europeac cells with polyelectrolyte complex. -Biotechnol. Bioengng., 1982, vol, 24, N 7, p. 1591−1603.
  72. Kokufuta E., Eatsumoto W., Nakamuro I. Use of poly-electrolyte complex for immobilization of microorganisms. J. Appl. Polymer Sei., 1982, vol.27, N 7, p. 2503−2512.
  73. Uar. 3 695 999 (CM). Isolation of enzymes from aqueous media by means of polyanions/ P. S. Forgione, K.M. Smyth. OnydJi. 1972.
  74. Osa?La J., lino? F., ITivmaairi Y. Preparation and 'behaviors of enzymes immobilized by polymer-polymer complexes. Chemistry Lett., 1982, N 4, p. 559−562. t
  75. Ricard J., Hoat G., Orasnier M., Gob D. Ionic control of immobilized „?nzymes. Kinetics of acid phosphatase bound to plai. t cell walls. Biochem. J., 1981, vol. 195, H 2, p. 357−367.
  76. Van Leemputten E.V., Horisberger №. Immobilization of enzymes on magnetic particles. Biotechnol, Bio-engng., 1974, vol. 16, N 3, p. 385−396.
  77. Marshall G.G., Rabincwitz M. L, Preparation and characterization of a dextran-trypsin conjugate.
  78. J. Biol. Chern., 1976, vol.251, N 4, p.1081−1087.
  79. Schmidt R.D. Stabili2ed soluble enzymes. In: Immo-* bilized Enzymes II. Berlin etc. j Springer-Verlag, 1979, P. 41−118. (Advances in Biochemical Engineering, vol. 12).
  80. Geiger B., Yon Specht B.U., Arnon R. Stabilization of human -D-N-acetylhexosaminidase A towards proteolytic inactivation by coupling it to poly (N-vinylpyrro-lidone). L Europ. J. Biochem., 1977, vol. 73, N 1, p. 141−147.
  81. Dellert Б., Stahmann H.A. Inhibition, restoration and enhancement of proteolytic action of polylysine and polyglutamic acid, Nature, 1955, vol.176, N 4491, p. 1028−1029.
  82. Rice R.Y., Stahmann M"A., Alberty R, A. Ihe interaction of lysine polypeptides and „bovine plasma albumin.- J. Biol. Chem., 1954, vol.209, N 1, P.105−115.
  83. Smith R.A.G-, Preparation and properties of amphipathic enzyme-polymer conjugates, Biochem. J., 1979, vol, 181, N 1, p. 111−118.
  84. Charles E., Coughlin R. W, Hasselberg F. X, Soluble-insoluble enzyme catalysts. -Biotechnol. Bioengng, ч/1974, vol. 16, И 11, p. 1553−1556.
  85. Coughlin R.W., Aizawa M., Charles Ж. Preparation and properties of soluble-insoluble nicotinamide coenzymes. -Biotechnol. Bioengng, 1976, vol.18, N 2, p. 199−208,
  86. Heemputten В. ЧГ“, Horisberger M. Soluble-insoluble complex of trypsin immobilized on acrolein-acrylic acid copolymer. Biotechnol. Bioengng, 1976, vol.18, N 4, p. 587−590.
  87. Пат. 4 088 538 (США), Use of an enzyme for converting anмorganic compound at least one other organio compound/ / H. Schneider. Опубл. 1978.
  88. H.P., Кирш Ю.2., Кабанов В. А. Изучение молекулярной динамики в растворах полиэлектролитов и их кооперативных комплексов методом тушения флуоресценции. '- Выоокомолек. соед., 1979, т. А21, i& 9, о. 2062−2069,
  89. В.Б., Зезин А. Б. Взаимодействие слабых полимерных кислот и солей полимерных оснований. Вы- а сокомолек. соед., 19(59, т. Б11, № 5, с“ 327−328,
  90. А.Б., Луценко В. В., Рогачева В. Б. и др. Кооперативные взаимодейстзия синтетических полиэлектролитов в водных растворах. Выоокомолек, соед“, 1972″ т. А14, 4, с. 772−778.
  91. А.Б., Рогачева В. Б. Полиэлектролитные комплексы. В кн.: Успехи химии и физики полимеров. М.: Химия, 1973, с. 3−32″
  92. В.В., Зезин Калюжная Р.й. Термодинамика кооперативного вэЕшмодеЁствия полиэлектролитов в ' водных растворах. Выоокомолек. соед», 1974, т. А16, № 11, с. 2411−2417.
  93. А.Б. Реакции между линейными макромолекулами. -В кн.: Макромолекулахные реакции/ Под ред. H.JL. Платэ, А. Д. Литмановича, О. В. Ноа. М.: Химия, 1977, с.233−252.
  94. В.В., Зезин А. Б., Лопаткин А. А. Статистиче-екая модель кооперативной реакции между слабыми полиэлектролитами. Выоокомолек. соед., 1974, T. A16,1. В 11, с * 2429−2434.
  95. Michaels A. Polyeleetrolytes complexes. Industr. Engng. Chem, 1965, vol. 57, N 10, p. 32−40. 1
  96. В.Б., Мирлина С. Я., Каргин В. А. Электронно--микроскопичеокое исследование взаимодействий противоположно заряженных полиэлектролитов в растворах. -Выоокомолек. соед., 1970, т. Б12, В 5, с. 340−344.
  97. ЕаЪапочг Ч.A., Zezin Л, В, Soluble interpolymeric complexes as a new class of synthetic polyelectrolytes.- Pure a. Appl, Chem., 1984, vol.56, II 3, p.34−3-354.
  98. Касаикин В. А, Харенко О. А., Харенко А. В., Зезин А. Б., Кабанов В. А. Принципа образования водорастворимых полиэлектролитных комплексов. Выоокомолек. соед., * 1979, т. Б21, В 2, с, 84−85.
  99. .Г., Зезин А. Б., Берестецкая Т. З., Разводов-ский Е.Ф. Исследование полиэлектролитных комплексов на основе полимерных четвертичных аммонитных солей.- Высокомолек. соед.,. 1974, Т. А16, № 8, с. 1852−1857.
  100. В.А., Касаикин В. А., Ермакова Л. Н., Зезин 1.Б. Исследование водорастворимых полиэлектролитных «комплексов неэквимольного состава. Высокомолек. соед., 1978, т. А20, № 2, с. 400−406.
  101. В.А., Зезин А. Б., Кабанов В. А. Изучениеtреакции образования нестехиометричных полиэлектролитных комплексов. Высокомолек. соед., 19ВЗ, т. А25, № 9, с. 1972−1978.
  102. Kabanov Y.A., Zezin А.В., Mustafaev K. I, Kasaikin Y.A. Soluble interpolymer complexes of polyamines and polyammonium salts. Inj Polymeric Amines and t Ammonium Salts/ B.J. Goethals, ed. Oxford: Pergamon Press, 1980, p. 173−192.
  103. А.Б., Луценко Б. В., Изумрудов В.А., Кабанов
  104. В.А. Особенности кооперативного взаимодействия в реакциях между полиэлектролитами. Высокомолек. соед., 1974, т. А16, & 3, с, 600−604.
  105. Харенко 0.JI., Харенкс» A.B., Каоаикин В. А., Зезин
  106. A.Б., Кабанов В. А. Строение нестехиометричных водорастворимых полиэлектролитных комплексов. Высокомолек. соед., 1979, т. А21, & 12, с. 2726−2733.
  107. В.А., Савицкий А. П., Зезин А.Б., Кабанов
  108. B.А. О кинетике макромолекулярного обмена в растворах полиэлектролитных комплексов. Докл. АН СССР, 1983, т. 272, № 6, с. 1408−1412.
  109. O.A., Изумрудов В. А., Харенко A.B., и др. Процессы ассоциаций-диссоциаций в растворах нестехиометричных полиэлектролииных комплексов. Высокомолек. соед., 1980, т. А22, № 1, с. 218−223.
  110. В.А., Харекко O.A., Харенко A.B., Гуляева Ж. Г., Касаикин В. А., Зезин А. Б., Кабанов В. А. Поведение нестехиометричных полиэлектролитных комплексов в водных растворах солей. Высокомолек. соед., 1980, т. А22, В 3, с. 692−699.
  111. В.А., Зезин А. Б., Рогачева В.Б., Изумрудов
  112. В.А., Рыжиков C.B. Сопряженные физико-химические превращения в водно-солевых растворах нестехиометричных полиэлектролитных комплексов. Докл. АН СССР, 1982, т. 262, I 6, с. 1419−1422.
  113. Кабанов Б*А., Зезин А. Б., Рогачева В. Б., Рыжиков C.B. Диспропорционирование нестехиометричных полиэлектролитных комплексов в водно-солевых растворах. Докл. АН СССР, 1982, т. 267, № 4, с. 862−865.
  114. И.М., Барановский В. Ю., Черняк В.Я. и др*
  115. О нестатическом распределении олигомера по матрицам на примере системы яолиметакриловая кислота (матрица) полиэтиленгликоль (олигомер). — Докл. АН СССР, 1971, г. 199, &, <$. 1364−136?.
  116. Kabanov V.A., Zezin А, В. A new class of complex water-soluble polyelectrolytes • Makromol. Chem, Suppl. 6, 1984, S. 259−276.
  117. И.В., Клесов А. А., Марголин А. Л. и др. Изучение пенициллинамидазы из е. coli. рН-зависимости кинетических параметров ферментативного гидролиза бензилпенициллина. Антибиотики, 1976, т, 21, № 5, с. 411−415.
  118. Schonbaum (J.R., Zerncr В., Bender Ж.Ь. The spectro-photometric determins. tion of the operational normality of an -chymotrypsin solution. J. Biol. Chem., 1961, vol. 236, N 11, p. 2930−2935.
  119. Salesse R., Garnier J., beterrier P. et al. Modulation of adenylate cyclase activity Ъу the physical state of pigeon erythrocyte membrane. Biochemistry, 1982, vol, 21, N 7, P. 1561−1586.
  120. Pooss R.M., Struss TJ.P. Polyelectrolytes. 2. Poly-4--vinylpyridonium chloride and poly-4-vinyl-K-butyl-pyridonium bromide. J. Polymer Sci., 1948, vol.3, p. 246−263.f
  121. Margolin A.L., Izumrudov T.A., Svedas V.E., Zezin
  122. А.В., Kabanov V.A., Berezin 1Д, Preparation and properties of penicillin amidase immobilized in polyelec-trolyte complexes. Biochim. Biophys. Acta, 1981, vol. 660, N 2, p. 359−365.
  123. Stacey К.A. bight scattering in the physical chemistry. N.Y.: Acad. Press, 1956, — 230 p
  124. В.Й., Щеголев С. Ю., Лаврушин В. И. Характеристические функции светорассеяния дисперсных систем. Саратов: Изд-во Саратовск. ун-та, 1977, с.8−170.
  125. Sandermann H., Jr. Regulation of membrane enzymes by lipids, Biochim. Biophys. Acta, 1978, vol, 515,1. N 3, p. 209−237.
  126. Oldfield E., Chapman D. Dynamics of lipids in membranes- Heterogeneity and the role of cholesterol. -PEBS Lett., 1972, vol. 23, N 3, p* 285−297.
  127. Seeman P. The membrane actions of anesthetics and tranquilizers. -Pharmacol. Rev., 1972, vol.24, N 4, P. 583−655.
  128. Sandhoff K., Pallmann B. Membrane-bound neuraminidase from calf brain: Regulation of oligosialoganglioside degradation by membrane fluidity and membrane components. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978, vol, 75,1. N 1, p. 122−126.
  129. А.Б., Кабанов B.A. Новый класс комплексных водорастворимых полиэлоктролигов. Уопехи химии"1982, т. 51, вып. 9, с. 1447−1483.
  130. Salesse R., G-arnier ?j'., Daveloose В. Modulation of adenylate cyclase activity Ъу the physical state of pigeon erythrocyte mesmbrane. Biochemistry, 1982, vol. 21, N 7, P. 1587−1590.
  131. Kawato S., Lehner C., Muller M., Cherry R.J. Protein-protein interactions! of cytochrome oxidase in inner mitochondrial membranes. J. Biol. Chem, 1982, vol. 257, H 11, p. 6^-70−6476.
  132. Swerdlow B.M., Setlow В., Setlow P. bevels of H+ and other monovalent cations in dormant and germinating, -J. Bacteriol., 1981, vol. 148, p. 20−29.
  133. Vfarth A.D. Heat stability of Bacillus coreus enzymes within spores and in extracts. J. Bacteriol1980, vol. 143, N 1, p. 27−34.
  134. Bradbury J.H., Foster J.R., Hammer L. et al. The source of the heat resistance of bacterial spores study of water in spcres by NMR. Biochim. Biophys. Acta, 1981, vol. 678, N 2, p. 157−164.
  135. Margolin A.L., Izumrtr. dov Y.A., Svedas V.K., Zezin A.B. Communications «to the editor: Soluble-insoluble immobilized enzymes. — Biotechnol. Bioengng., 1982, vol. 24, ^ 1, P. 237−240.
  136. Bieth J. Some kinetic consequences of the tight binding of protein-proteinase-inhibitors to proteolytic enzymes and their application to the determination of dissociation constants. In: Proteinase Inhibitors: Proc. of the 2nd Intern, res, conf./
  137. H, Fritz et al. Berlin: Springer, 1974, P.463−469. (Bayer-Symposium 5).
  138. Green H, M. Kinetics of the reaction between trypsin and the pancreatic trypsin inhibitor, Biochem. J, 1957, vol, 66, N 3, 407−415.
  139. .Б., Блинцэв A.f^, Изумрудов В. А., Шерстюк С. Ф. Применение иммобилизованных на водорастворимом полимере антител для аналитических целей. В кн.: Тезисы докладов 1У Всесоюзного симпозиума «Инженерная энзимология». Киев, 19 Г.3, с. 30.
  140. Ныс П.С., Савицкая Е. М., 0- зсов А.А. и др. Изучение денициллинамидазы из е. col l, рН-зависимость кинетики инактивации фермелта. Антибиотики, 1978, т. -23, № 1, с. 46−50.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!