Ген альфа-амилазы Bacillus amyloliquefaciens как модель для конструирования секреторных векторов
Ю. И. Козлов, С. В. Машко, М. И. Лебедева, А. В. Сорокин, Б.А.Ребен-тиш, В. Г. Дебабов. Клонирование гена фибробластного интерферона человека в клетках ёлсАлл^Мас .Мол.генетика, микробиол. и вирусол. ,$ 7,1983,с.19−23. М. Я. Хайкинсон, П. М. Рабиновия, А. И. Степанов. Роль прямых И инвертированных повторов В трансформации Bacillus subtiiis плазмидной ДНК.Докл.Акад.наук СССР, т.265,М, 1982… Читать ещё >
Ген альфа-амилазы Bacillus amyloliquefaciens как модель для конструирования секреторных векторов (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
Содержание
- Клонирование генов d -амилаз из ScxcuMU^o
Большой интерес к секреторным ферментам бадшш, развитие систем клонирования генов в, а также относительная простота тестирования работы гена ??-амилазы, предопределили быстрый прогресс в клонировании генов -амилаз из различных бацилл. В настоящее время известно о выделении
О О I путем клонирования по-краинеи мере восьми генов -амилаз из. Наибольшее количество работ посвящено клонированию осахаривающей «¿-амилазы из /94,117,
118/.Во всех этих работах предпринималось изучение нуклео-тидной последовательности клонированного гена. Было обнаружено, что все клонированные гены сильно гомологичны и различаются лишь единичными заменами. Было также установлено, что экспрессия гена в? приводит к структурной нестабильности несущих его плазмид /6,118/.Интересно также, что в двух случаях ген не содержал последовательности, кодирующей довольно большой С-концевой сегмент белка, но тем не менее, наблюдался синтез активного продукта /6,94/.Установлены изменения в промоторной части гена, приводящие к сверхпродукции Ы. -амилазы в ?. a^UUi^l /117/.Две серии работ /24, 102,113/ были посвящены экспрессии генов термостабильных oi -амилаз в клетках? сс^^с^л #это относится к ot -амилазам из tf. «h^^V24/ и из g fz&l&z/Ю2/.Показано, что в обоих случаях ¿¿-амилаза является периплазматическим белком .в случае «-амилазы из ся^рЛя^ч. наблюдалась структурная нестабильность плазмид, и было показано, что экспрессия гена ухудшает рост клеток на средах, содержащих в качестве источника углерода мальтозу или глицерин /ИЗ/.Были отобраны мутанты j для которых не наблюдалось такого ухудшения роста. В случае oL -амилазы из плазмидной нестабильности и угнетения роста бактерий не было обнаружено /102/.
Палва и др./78/ клонировали ген ¿-амилазы из В. ал^с-, EI8 с целью конструирования секреторного вектора для ?. и изучения секреции чужеродных белков из клеток й. .Удовлетворительный результат применения такой системы для экспрессии чужеродного гена был получен только для гена другой термостабильной -амилазы — из б*.-^j/jiH^ViW^ /76/.Из личного сообщения К. Лунд-стрема, сделанного им во время конференции ФЕБО в Москве в 1984 г. известно, что при слиянии регуляторной области, включающей сигнальный пептид d -амилазы ~ со структурной частью гена oi -амилазы из уА^, в клетках G. наблюдался синтез и секреция oL -амилазы в.^с/^^^и достигающий 50% от синтеза сА -амилазы 6. .Таким образом, показано, что секреция этих белков в л^U-MXi^ происходит по одинаковым механизмам.
Энзиматические свойства с←амилаз.
При кратком обсуждении свойств амилаз как ферментов, остановимся на следующих вопросах: а) классификация амилаз- б) величина ¿с** и для амилаз- в) аминокислоты, участвующие в катализе- г) механизм связывания фермента с полимерным субстратом и распределение продуктов реакции.
На Рис. 8 изображена цепь крахмала. Звенья глюкозы, соединённые <>?-1−4 связями, называются амилозой, звенья, соединённые связями 1−6, называются пектином. оС-амилазы-это ферменты, осуществляющие разрыв связи 1−4.
В связи с таким определением, можно представить себе несколько типов (/-амилаз.Во-первых, это ферменты, осуществляющие гликолитиче о кую атаку, т. е. разрезающие субстрат изнутри. Такие амилазы называются эндоамилазами. К ним, в частности, относятся амилазы вах^^^ и ^с^^рп^^ /50/.Среди эндо-амилаз можно выделить разжижающие и осахаривающие /82/.Эти два типа ¿¿-амилаз различаются размерами образуемых продуктов реакции — у ¿¿-амилаз разжижающего типа более полимерные продукты. Такое различие -амилаз по распределению размеров продуктов связано с различием в механизме связывания полимерного субстрата, что будет обсуждаться несколько ниже.
Существует другой тип амилаз-экзоамилазы, отщепляющие по одному звену мальтозы или глюкозы от субстрата. В последнем случае фермент носит название глюкоамилаза.
-амилазы относятся к ферментам с наиболее эффективным механизмом действия, например, панкреатическая
6СН2ОН
Рис. 8. Цепькрахмала. Полимер из мономеров глюкозы, связанных связью
При изучении механизма ферментативного действия о^-амилаз исследователя прежде всего интересуют два вопроса. Первый заключается в выяснении групп, непосредственно участвующих в катализе, а также в выяснении вопроса об участии аминокислотных остатков в связывании субстрата. Второй вопрос заключается в выяснении того, сколько глю-козных остатков субстрата и с какой интенсивность^ связаны с ферментом.
Анализ зависимости активности амилаз от рН, а также температурное изменение этих зависимостей свидетельствуют о том, что каталитическими группайпг. в Ы- -амилазах являются карбоксильный анион аспартата или глутамата, которые выступают в качестве акцептора протона, а также имидазоль-ная группа гиствдина, которая выступает в качестве донора протона /9/.Рентгеноструктурный анализ -амилазы из си^ъо^ылси^ подтверждает эту точку зрения и позволяет обнаружить на ферменте два сближенных остатка А^р и ШУ /58/.Были также выполнены работы по химической модификации возможных активных групп, которые подтвердили эту точку зрения /26,37,38/.Показано также, что остатки тирозина, входящие в активный центр, несут субстрат-свя-зывающую функцию/39/.
Вопрос о связывании (c)с-амилаз с субстратом активно изучался двумя группами исследователей /11,46,51,66,
99−101/.При построении моделей авторы пользовались общим для ферментов, гццролизувдих полимерный субстрат, положением о наличии в них подцентров связывания субстрата, имеющщих определённую аффинность к мономерным субстратным единицам, которыми в случае амилозы являются звенья глюкозы. Используя несколько различающиеся в деталях модели, авторы проанализировали кинетику расщепления амилазами олигосахаридов. Анализ этой кинетики позволил им построить распределение энергий связывания глюкозных мономерных звеньев с подцентрами фермента. Такие распределения были получены для оС -амилазы из # сы^М-^-^ф^-сХл^о- /II, 46,99,100/, а также из (^.с^ил^ /11,66/. Распределения, полученные авторами, в целом похожие, несколько различались в деталях, что связано с различием используемых моделей. К сожалению, выбрать, какая модель более отражает действительность^ настоящее время не представляется возможным, мы будем пользоваться распределением полученным Аллен и Тома /II/ (Рис.9).
ВЫВОДЫ.
1.Ген оС-амилазы А50 зонирован в клетках ж. Показано, что в активная оСамилаза секретируется в периплазму.
2.Определена нуклеотидная последовательность фрагмента, содержащего клонированный ген ¿-¿—амилазы. Показано, что в его промоторную область встроился.
— элемент. Показано, что это встраивание ослабляет экспрессию гена с собственного промотора в клетках <51сг>-&-.(.в структурной части гена обнаружено 8 нук-леотидных и 5 аминокислотных замен по сравнению с геном из штамма с^^Л^^ук.сМи^ ^18.
3.На основе первичной структуры белка теоретически предсказана вторичная структура о (. -амилазы. Обнаружена корреляция между количеством и расположением относительно активного центра коротких-структур в С-концевой области белка, с энергетическим распределением сайтов связывания белка с амилозой.
4.Получено четыре плазмиды рТ&д, которые можно использовать в качестве секреторных векторов для <Г.
С помощью одной из этих плазмид, рТ (Зд278,получена экспрессия лейкоцитарного интерферона человека в? .Показано, что секреция интерферона в ¡-слетках отличается от секреции о!- -амилазы.
1.С. И. Алиханян, Л. М. Ермакова, Л. И. Ерохина.Получение мутантов вас. действием нитрозогуанидина и.
2. К 191. Генетика, т. II,№ 5,1975,с.90−94.
3. Ю. И. Козлов, С. В. Машко, М. И. Лебедева, А. В. Сорокин, Б.А.Ребен-тиш, В. Г. Дебабов. Клонирование гена фибробластного интерферона человека в клетках ёлсАлл^Мас .Мол.генетика, микробиол. и вирусол. ,$ 7,1983,с.19−23.
4. М. А. Несмеянова. Молекулярные механизмы участия мембран в биосинтезе секретируемых белков и его регуляция у п! сЛ^ Л. % усп # совр. би0Лт. 94,)&2,1982, с. 225−242.
5. В. М. Попов.Эмпирические корреляции между аминокислотной последовательностью и пространственным строением белков. Мол.биол., т.14, ЖЕ, 1980, с.35−63.
6. Ю. В. Иомантас, Е. О. Добржанская, А. В. Сорокин, М. Ю. Фонштейн,.
7. А. В. Трубников, А. Я. Стронгин, П. М. Рабинович, М. Л. Злочевский. Конструирование двурепликонной плазмиды, несущей ген ¿-¿—амилазы .В кн. «Метаболические плазмиды», Таллин, 1982, с. 108.
8. М. Я. Хайкинсон, П. М. Рабинович, А. И. Степанов.Модели трансформации плазмидной ДНК.Докл.Акад.наук СССР, т.265,$ 5,1982,с.1264−1267.
9. М. Я. Хайкинсон, П. М. Рабиновия, А. И. Степанов. Роль прямых И инвертированных повторов В трансформации Bacillus subtiiis плазмидной ДНК.Докл.Акад.наук СССР, т.265,М, 1982, с.975−978.9 .M.Abdullah and D.French.Arch.Biochem.Biophysv.137,1970,pp.433−493.
10. M. Achtman, P.A.Manning, C. Edolbluth, P.Herrlich.!3xport without proteolytic processing of inner and outer membrane proteins encoded by F sex factor tra cistrons in E. coli minicells.Proc.Wat.Acad.Sci., USA, v.76,1979,pp.4837−4841.
11. J.D.Allen arid J.A.Thcma.Subsite mapping of Enzyines. Depolyinerase Computer Modelling. Biochem. J., v. 159,197S, pp. 105−131.
12. S. Benson and T.Silhavy.Information within the mature LamB protein necessary for localisation to the outer membrane of Escherichia coli K12. Cell, v.32,1983,pp.1325−1335.
13. G. Blobel and B.Dobberstein.Transfer of proteins across membranes.
14. G.Blobel.Intracellular protein topogenesis.Proc.Nat. Acad.Sci., USA, v.77,1930,pp.1496−1500.
15. J.D.3oeke and P.Ifodel.A prokaryotic membrane anchor sequence: car-boxy 1 terminus of bacteriophage fl gene III protein retains it in the rnerabrane.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.79,1982,pp.5200−5204.
16. V.Broun.Covalent lipoprotein frcm the outer membrane of Escherichia coli.Biophys.Biochem.Acta., v.415,1975,pp.335−377.
17. H. Bussey, O. Steimnets and D.Saville.Protein secretion in yeast: two chromosomal mutants that oversecrete killer toxin in S.cerevisiae. Curr.Genet., v.7,1983,pp.449−456.
18. D.P.Ceretti, D. Dean, G.R.Davis, D.M.Bedwell, and M.Nomura.The spo ribo-somal protein operon of Escherichia coli: sequence and cotranscription of the ribosomal protein genes and a protein export gene.Wucl.Acids Res., v.11,1983,pp.2599−2616.
19. C.N.Chang, G. Blobel, and P.Model.Detection of prokaryotic signal peptidase in Escherichia coli membrane fraction: endoproteolitic cleavage of nascent fl pre-coat protein.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.75, 1978, pp.361−365.
20. P.Y.Chou and G.D.Fasman.a)Conformational Parameters for Amino Acids in Helical, j?-Sheet, and Random Coil Regions Calculated from Proteins. b) Prediction of Protein Conformation. Biochemistry, v.13,1974,pp.211−245.
21. P. Cornells, C. Digneffe, and H.Willemot.Cloning and Expression of a Bacillus coagulans Amylase Gene in Escherichia coli.Mol.Gen.Genet., v.136,1932,pp.507−511.
22. T. Date and W.Wickner. Isolation of the Escherichia coli leader peptidase gene and effects of leader peptidase overproduction in vivo. Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.73,1981,pp.6105−6110.
23. S.D.Detera and F.Friedberg.folecular weight of B. subtilis ??-arnylase derived from chemical studies.Int.Journ.Pept.and Prot.Res., v.14,1979, pp.354−372.
24. D. Dobberstein, G. Blobel and N.-K.Chua.In vitro synthesis and putative precursor for the small subunit of ribuloso-l, 5-biphosphate carboxylase of Chlairr/domonas reinhardtii.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.74,1977, pp.1082−1085.
25. B.Dobberstein.Structure and function of components of the system of protein transfer accross endoplasmic reticullum mer±«rane.FEBS Meeting, Moscow, 1984.
26. S.D.Emr and P.J.Bassford, Jr. Localisation and processing of outer membrane and periplasmic proteins in E. coli strains harboring export-specific supressor mutations.Journ.Biol.Chera., v.257,1982,pp.5352−5860.
27. S.D.S.'.tt, R. Shekman, M.C.Flessel and J.Therner.An MF oU-SUC2 (c4-factor-invertase) gene fusion for study of protein localisation and gene fusion in yeast.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.80,1933,pp.7030−7084.
28. S.D.2mr and T.J.Silhavy.Mutations effecting localization of an E. coli outer membrane protein, the bacteriophage ^ receptor.Journ.Mol.Biol., v.141,1981,pp.63−90.
29. S.D.Emr, M.H.Hall and T.J.Silhavy.A mechanism of protein localization: the signal hypothesis and bacteria.Journ.Cell.Biol., v.86,1980,pp.701−11.
30. D. Enr, S. Hanley-Way, and T.J.Silhavy.Suppressor mutations that restore export of a protein with a defective signal sequence. Cell, v.23,1931, pp.79−88.
31. S.D.Emr and T.J.Silhavy.Inportance of secondary structure in the signal sequence for protein secretion.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.80,1983,pp.4599−4603.
32. J. Gamier, D. Osgatherpe, and B.Robson.Journ.Mol.Biol., v.120,1973,pp.97−120.
33. M.3.Ingle and R. J.Erickson.Bacterial —ainylases.Adv.Appl.ilicrobiol., v. 24,1973,pp.257−278.
34. S. Iwasa, H. Aoshirtia, K. Hiroroi, and H.Hetano.Subsite affinities of Bacterial Liquefying ?/-amylase Evaluated from the Rate Parameters of Linear Substrates.Journ.Biochem., v.75,1974,pp.969−978.
35. J.D.Jamieson and G.E.Palade.Intracellular transport of secretory proteins in the pancreatic exocrine cell.I.Role of peripheral elements of the Golgi complex.Journ.Cell.Biol., v.34,1967,pp.577−5S7.
36. J.D.Jamieson and G.E.Palade.Intracellular transport of secretory proteins in the pancreatic exocrine cell.II.Transport to condensing vacuoles and zymogen granules.Journ.Cell Biol., v.34,1967,pp.597−515.
37. L. Johnsmd.Mol.Gen.Genet., v. 159,1979,op.213−218.
38. K.L.Kindle.Characteristics and Production of Thermostable cL-amylase. Appl.Biochem. and Biotechnol., v.8,1983,pp. 153−170.
39. H. Kondo, H. Wa3catani, R. Ilatsmo, K.Hiroroi.Product distribution in amylase-catalyzedhydrolysis of amylose. Comparison of experimental results with theoretical predictions.Journ.Biochem., v.37,1930,pp.1053−1070.
40. D. Koshland and D.Botstein.Secretion of beta-lactamase requires the carboxy end of the protein. Cell, v.20,1980,pp.749−760.
41. J.A.Lepesant, F. Kunst, J. Lepesant-Kejzlarova, and R.Dedonder.Chromosomal location of mutations affecting sucrose metabolism in Bacillus subti-lis Marburg.Mol.Gen.Genet., v.118,1972,pp.135−160.
42. L. Lehle, R.E.Cohen, and C.E.Bellow.Carbohydrate structure of yest inver-tase. Demonstration of a form with only core oligosaccharides and a form with completed chains.Journ.Biol.Chem., v.254,1979,pp.12 209−12 213.
43. K.Lundstrom. Expression of" the vesicular stomatitus virus mernbrane glycoprotein in Bacillus subtilis. FEMS Microbiology Lett., v.23,1984,pp.65—71.
44. Y. Matsuura, M. Kusunoki, W. Date, S. Harada, S.Eando. Tanaka, M.Kakudo. Low resolution crystal structures of Taka-amylase A and its complexes with inhibitors. J.Biochem., v. 36,1979,pp. 1773−1783.
45. P. S.F.Mezes, Wu Wang, B.C.H.Yeh, J.O.Larnpen.Construction of pen1, Bacillus licheniforrais 749/C j?-Lactamase Lacking Site for Lipoprotein.Modification.Journ.Biol.Chem., v. 258,1933,pp.11 211−11 218.
46. H.C.Neu and L.A.Heppel.The release of enzymes from Escherichia coli by osmotic shock and during formation of spheroplasts.Journ.Biol. Chem., v.240,1955,pp. 3685—3692.
47. J.B.K.Nielsen and J.0.Lampen.Glycerid-Cysteine Lipoproteins and Secretion by Gram-Positive Bacteria. Joum.Bacterid., v. 152,1982,pp.315−322.
48. J.B.K.Nielsen, M.P.Canifield and J.O.Lampen.Lipoprotein nature of Bacillus licheniformis meribrane penicillinase.Proc.Nat.Acad.Sei., USA, v. 78,1981,pp.3511−3515.
49. J.B.K.Nielsen and J.0.Larapen.I^fembrane-bound Penicillinases in Grampositive Bacteria.Journ.Biol.Chem., v.257,1932,pp.4490—4495.
50. Y. Nitta,.¦ lizushiraa, K. Hiromi, and S.Qno.Journ.Biochem., v.59,1971, pp.557−575.
51. P. Novick, anc R.Schekman.Secrition and cell-surface growth are blocked in a temperature-sensitive metant of S.cerevisiae.Proc.Nat.Acad.Sei., USA, v.75,1979,pp.1853−1362.
52. P. Novick, C. Field and R.Schekman.Identification of 23 complementation groups required for posttranslational evants in the yest secretory pathway. Cell, v.21,1930,pp.295−215.
53. H.0htsubo and N.Ohtsubo.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.75,1978,pp.615−619.
54. D.B.Oliver and J.Beckwith.Identification of a nevz gene (secA) and gene product involved in the secretion of envelope proteins in E. coli.Journ.Bacteriol., v.150,1932,pp.686−691.
55. D.B.Oliver and J.Beckwith.Regulation of a membrane component required for protein secretion in coli.Cell., v.30,1982,pp.311−319.
56. D.C.Oliver, C. Kumamoto, M. Quinlan, and J.3eckwith.Pleiotropic mutants affecting the secretory apparatus of Escherichia coli.Ann.iiicrobiol., v.133,1982,pp.105−110.
57. D.B.Oliver and J.Beckwith.Escherichia coli mutant pleiotropically defective in the export of secreted proteins. Cell, v.25,1981,pp.765−772.
58. S.A.Ortlepp, J.F.Ollington and D.J.McConnel.Molecular cloning in Bacillus subtilis of a Bacillus licheniformis gene encoding a thermostable alpha-amylase.Gene, v.23,1933,pp.267−276.
59. G.E.Palade.Intracellular aspects of the process of protein synthesis. Science, v.189,1975,pp.347−358.
60. Palva,.Sarvas, P. Lentovaara, M. Sibakov, and L.Kaariainen.Secretion E. coli j?-lactamase from B. subtilis by the aid ofamylase signal sequence.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.79,1982,pp.5582−5586.
61. I.Palva.Construction of a Bacillus subtilis secretion vector.Ph.D. Thesis, Univ. of Helsinki, 1983.
62. Palva, P. Lehtovaara, L. Kaariainen, 11. Sibakov, K. Cantell, C.H.Schein, K. Kashiwagi and C.Weissman.Secretion of interferon by 3acillus subtilis .Gene, v.22,1983,pp.229−235.
63. D. Perlman and H.O.Halvorson.A Putative Signal Sequence in Eukaryotic and Prokaryotic Signal Peptides.Journ.Mol.Biol., v.167,1983,pp.391−409.
64. F.Priest.Extracellular enzyme synthesis in the genus Bacillus. Bacterid.Rev., v.41,1977,pp.711−753.
65. C.M.Redman and D.D.Sabatini.Vectorial discharge of polypeptides released by puramycin from attached ribosomes.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v. 55,1965,pp.608−615.
66. J. Sekiguchi, N. Takeda, and H.Okada.Genes affectingthe productivity of c/ —anoylase in Bacillus subtilis Marburg. Journ.Bacteriol., v.121,1975,pp.638−694.
67. J. Shultz, T.J.Silhavy, M.L.Belgian, N. Fiil and S.D.Emr.A previously unidentified gene in the spc operon of Escherichia coli XI2 specified a component of the protein export machinery. Cell, v.31,1982, pp.227−235.
68. H.A.Shuman, T.J.Silhavy, and J.R.Beckwith.Labeling of proteins with beta-galactosidase by gene fusion identification of a cytoplasmic membrane component of the Escherichia coli maltose transport system. Journ.Biol.Chen., v.255,1980,pp.158−174.
69. P. Siekevitz and G.E.Palade.A cytochemical study on the pancreas of guinea pig.V.In vivo incorporation of leucine-1- ~C into the chymo-trypsinogen of various cell fractions.Journ.Biol.Biochem.Cytol., v.7, 1960, pp.619−631.
70. T.J.Silhavy, H.A.Shurnan, J. Beckwith and M.Schwartz.Use of gene fusions to study outer membrane protein localization in E.coli.Proc.Nat.Acad. Sci., USA, v.74,1977,pp.5411−5415.
71. T.J.Silhavy, S.A.Benson, and S.D.Emr., Mechanisms of Protein Localization. Microbiol. Rev., v.47,1983,pp.313−344.
72. Y. Tal:eichi, K. Obmura, A. Nakayama, K. Otozai, and K.Yamane.Cloning of Bacillus subtilis amylase gene in plasmid pUBllO.Agric.Biol.Chem., v.47,1983,pp.159−161.
73. K. Takkinen, R.F.Petterson, N. Kalkkinen, I. Palva, H. Soderland and L. Kaa-riainen.Amino Acid Sequence of (/-amylase from Bacillus amylo-liquefaciens Deduced from the Nucleotide Sequence of the Cloned Gene.Journ.3iol.Chem., v.258,1983,pp.1007−1013.
74. K. Talmage, W.Gilbert.Construction of plasmid vectors with unique PstI cloning sites in a signal sequence coding region. Gene, v.12, 1980, pp.235−241.
75. K. Talmage, S. Stahl, and W.Gilbert.Eukaryotic signal sequence transports insulin antigene in Escherichia coli.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.77,1980,pp.3369−3373.
76. K. Talmage, J. Kaufman, and W.Gilbert.Bacteria mature preproinsulin to proinsulin.Proc.Nat.cad.Sci., USA, v.77,1980,pp.3988−3992.
77. J.A.Thama, C.3rothers, and J.Spradlin.Subsite Mapping of Enzymes. Studies on Bacillus subtilis Amylase. Biochemistry, v.9,1970,pp.1768−1775.
78. J.A.Thoma, G.V.K.Rao, C. Brothers, J. Spradlin, and L.H.Li. Subsite Mapping of Enzymes. Correlation of Product Patterns with Michaelis Parameters and Substrate-induced Strain.Journ.Biol.Chern., v.246,1971,pp.5621−5635.
79. E.M.Torgerson, L.C.Brevier, J.A.Thoma.A substrate mapping of enzymes. Use of subsite map to simulate complete time course of hydrolysis of a polymeric substrate.Arch.Biochem.and Biophys., v.196,1979, pp.13−22.
80. N. Tsiicagoshi, H. Ihara, H. Yamagata, and S.Udaka. Thermophilic oLAmylase gene from Bacillus stearothermophilus in Escherichia coli. Mol.Gen.Genet., v.193,1934,pp.58−63.
81. G. Von Heijne. Patterns of Amino Acids near Signal-Sequence cleavage Sites.Eur.Journ.Biochem., v.133,1983,pp.17−21.
82. P. Walter and G.Blobel.Purification of a membrane-associated protein complex required for protein translocation acrossthe endoplasmic reticullum.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.77,1980,pp.7112−7116.
83. P. Walter and G.3lobel.7S small cytoplasmic RNA is an integral component of the signal recognition particle. Nature, v.299,1982,pp.691−693.
84. M.E.E.Watson.Compilation of published signal sequences.Nucl.Acids Res., v.12,1934,pp.5145−5164.
85. C.P.Watts, P. Silver, and W.Wickner.Membrane assembly from purified components.2.Assembly of M13 procOat into liposomes reconstituted with purified leader peptidase. Cell, v.25,1981,pp.347−353.
86. G. M. WeinstockapPhys, M. L. Berman, B. Kairraar, D. Jackson, T. J. Silhavy, J. Weisemann, and M.Zweig.Open reading frame expression vectors:
87. A general method for antigen production in Escherichia coli using protein fusions to J>-galactosidase.Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.80, 1983, pp.4432−4436.
88. W. «vickner. Asymmetric orientation of phage M13 coat protein in Escherichia coli cytoplasmic membranes and in synthetic lipid vesicles. Proc.Nat.Acad.Sci., USA, v.73,1976,pp.1159−1163.
89. W.Wickner.Assembly of proteins into biological membranes: membrane trigger hypothesis.Ann.Rev.Biochem., v.43,1979,pp.23−45.
90. W.Wickner.Assembly of proteins into membranes. Science, v.210,1980, pp.861−863.
91. K. Willemot and P.Cornells.Growth defects of Escherichia coli cells which contain the gene of an .
92. P.B.Wolfe, P. Silver, and W.Wickner.The isolation of homogeneous leader peptidase from a strain of 2. coli wich overproduce the enzyme. Journ.Biol.Chern., v.257,1982,pp.7898−7902.
93. P.B.Wolfe, W. Wickner, J.M.Goodman.Sequence of the leader peptidase gene of E. coli and the orientation of leader peptidase in the bacterial envelope.Journ.Biol.Chem., v.258,1983,pp.12 073;12080.
94. M. Yang, A. Gelissi, and D.Henner.Nucleotide sequence of the amylase gene from Bacillus subtilis.Nucl.Acids Res.v.11,1983,pp.237−249.
95. Y. Yoneda, I. Yamane, and ?.Maruo.Membrane mutation related to the production of extracellularamylase and protease in Bacillus subtilis.Biochem.Biophys.Res.Carm., v.50,1973,pp.765−770.
96. C. Zwizinski, T. uate, and W.Wickner.Leader peptidase is found in both the inner and outer membranes of E.coli.Journ.Biol.Chem., v. 256,1981,pp.3593−3597.
97. C. Zwizinski, and W.Wickner.Purification and characterization of leader (signal) peptidase from E.coli.Journ.Biol.Chem., v.255, 1980, pp.7973−7977.