Общие принципы исследования биоорганических соединений
Биохимия изучает процессы, протекающие в организме как in vitro (в колбе), так и in vivo (в живых системах). Фундамент биохимии — данные о составе организма, которые получают с помощью различных методов анализа.
Методы анализа (определения) состава организма подразделяются на физические и химические. Физические методы — это методы, не разрушающие изучаемый объект. Используются в основном спектральные свойства вещества. Термодинамика, кинетика, строение вещества — разделы физической химии, применяющиеся при биохимических исследованиях.
Химический анализ подразделяется на качественный (с его помощью определяют, из чего состоит данная биологическая проба или объект) и количественный (сколько этих веществ в объекте или пробе). Например, методами качественного анализа установлено, какие вещества входят в состав организма. 11ри помощи количественного химического анализа было определено, что в «среднем» человеке содержится около 10 кг сухого вещества и 60 кг воды.
В качестве биологической пробы используют кровь, слюну, мочу, частицу ткани. Для анализа биологической пробы необходимо провести ряд процедур.
- 1. Очистить пробу от примесей неорганического характера (фильтрация, флотация, осаждение, выпаривание, перегонка, перекристаллизация, конденсация).
- 2. Разделить на фракции путем связывания химическими реагентами (используют индивидуальные реакции, позволяющие выделить каждую фракцию в определенном агрегатном состоянии) или центрифугированием.
- 3. Идентифицировать вещества фракций качественно и количественно.
- 4. Определить элементные формулы и формулы строения веществ. Для этого используют методы титрования, потенциометрии (рис. 3.1), фотоколориметрии, спектрофотометрии, рентгеноструктурного анализа, ядерного магнитного резонанса.
Рис. 3.1. Схема потенциометрического определения кислотности — pH растворов:
/ - титрат (щелочь для определения кислотности), 2 — анализируемый раствор, например раствор аминокислоты — аланина H[1]N-CH (CHj)-COOH, X — измерительный электрод.
- [1] Фракция — часть пробы, обладающая характеристиками, лежащими в более узких границах, нежели теже самые характеристики для всей пробы (состав, молекулярная масса).