Диагностика возбудителя и лабораторные исследования

Многообразие форм проявления болезни нередко затрудняет своевременный диагноз. Его устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, результатов лабораторных исследований, а также патологоанатомических изменений, характерных для данной болезни.

Большое значение имеют подробный анамнез и эпизоотологический анализ болезни. При их проведении от владельцев животного получают сведения: об иммунопрофилактике конкретных болезней (тип и состав вакцин, сроки и условия вакцинации), возможные источники инфекции и механизм передачи возбудителя болезни, когда, как и при каких обстоятельствах она проявилась, условия кормления, ухода и содержания животного и др.

Для постановки диагноза по клиническим признакам учитывают следующие 6 критериев:

• 1. Поражение респираторных органов;
• 2. Диарея — это синдром, который проявляется водянистым жидким стулом (поносом) до 3-х и более раза в сутки или жидким стулом с примесью крови более 1-го раза в сутки;
• 3. Катар (воспаление) слизистых оболочек носа;
• 4. Гиперкератоз подушечек лап — это патология кожи, которая характеризуется чрезмерной скоростью деления клеток рогового слоя и одновременно нарушением их слущивания;
• 5. Поражение центральной нервной системы;
• 6. Продолжительность болезни (не менее 3 недель).

Если любые четыре из указанных шести симптомов замечены у собаки, то они свидетельствуют о чуме.

На ранней стадии болезни имеют значение следующие 5 признаков:

• 1. Кашель;
• 2. Фотофобия — болезненная чувствительность глаза к свету, при которой его попадание вызывает неприятные ощущения в глазах (например, спазм век, боль в глазах и слёзотечение) и заставляет сильно щурить глаза;
• 3. Повышение температуры тела (до 39,9 °С и более) при одновременной потере аппетита;
• 4. Нормальная температура тела при прожорливом аппетите;
• 5. Симптомы поражения нервной системы.

По двум любых из пяти перечисленных признаков можно подозревать чуму, а по трем ставить клинический диагноз (для обследования норок и хорьков рассмотренные схемы менее пригодны, чем для собак).

При патологоанатомическом вскрытии характерны изменения слизистой мочевого пузыря и других органов. Серологическая диагностика чумы применяется лишь в экспериментальных целях.

Для лабораторной диагностики чумы плотоядных, в частности для обнаружения (индикации) возбудителя и его идентификации (определение видовой принадлежности) применяют следующие методы:

• * метод флуоресцирующих антител прямой (МФА) — для установления раннего прижизненного диагноза, материалом служат мазки-отпечатки; в основе люминесцентная микроскопия соединений антигена, с меченым антителом. При исследовании недавно вакцинированных животных, возможны ложноположительные результаты.
• * иммуноферментный анализ (ИФА) — для установления раннего прижизненного диагноза. Разработаны промышленные диагностикумы (взвеси убитых микробов, которые служат в качестве антигенов при серологических исследованиях и аллергенов для аллергических диагностических проб) на полистироловых пластинах для выявления специфического антигена вируса. Материал — пробы крови, смывы из глаз и глотки. При исследовании недавно вакцинированных животных, возможны ложноположительные результаты.
• * реакция нейтрализации (РН) — для идентификации вируса в культуре клеток.
• * реакция диффузной преципитации (РДП) — позволяет обнаруживать возбудителя на 3−4-й день болезни.
• * реакция связывания комплемента (РСК) — для обнаружения антигена в органах и тканях больных животных и в культуре клеток.
• * реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) — для выявления специфических антител к возбудителю.
• * реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).
• * биопроба на восприимчивость животных — испытание какого-либо вещества (лекарственного препарата, синтетического органического вещества, гормона и т. п.) с целью определения его биологической активности по отношению к какому-либо организму или клетке (культуре клеток) в сравнении с объективным контролем.
• * полимеразная цепная реакция (ПЦР) по выделению антигена. Высокая специфичность и чувствительность. При исследовании недавно вакцинированных животных, возможны ложноположительные результаты.
• * цитологические исследования по обнаружению телец-включений (нерастворимые белковые агрегаты, образующиеся при суперэкспрессии рекомбинантных белков у бактерий) в мазках со слизистых и аутопсийных тканях (посмертно).
• * экспресс-тесты на выявление антигена. При исследовании недавно вакцинированных животных, возможны ложноположительные результаты.

Для клинической практики наибольший интерес представляет выявление на ранней стадии патогномоничных для чумы плотоядных телец-включений.

Для обнаружения телец-включений предложен метод окраски мазков гематоксилином Делафильда с эозином. Более простым и быстрым является следующий метод окрашивания включений: 2 основных насыщенных раствора красок на метаноле (метиловом спирте):

• а) 9 г метиленового синего растворяют в 90 мл метанола;
• б) 3 г основного фуксина растворяют в 30 мл метанола.

Выдерживают 12 суток для созревания. Затем для изготовления рабочей краски смешивают в следующих пропорциях: на 10мл дистиллированной воды 3 капли раствора метиленового синего и 1 каплю раствора основного фуксина. Готовая краска имеет сине-фиолетовый цвет.

На фиксированный препарат наносят 1−2 капли краски, выдерживают 1 минуту. Далее мазок промывают и высушивают. Просматривают под иммерсионной системой микроскопа. Под микроскопом выявляются единичные или множественные цитоплазматические (реже внеклеточные) включения овальной, округлой или полиморфной формы ярко-красного или малинового цвета.

В клинической практике ветеринарных клиник для прижизненного исследования берут отпечаток эпителия конъюнктивы, миндалин или мазки крови для обнаружения вирусных телец-включений в лейкоцитах. Цитологическое исследование, в отличие от других методов, связанных с выделением антигена или титра антител, можно проводить у недавно вакцинированных животных. Для постановки окончательного диагноза на чуму плотоядных необходимо обнаружение антигена возбудителя и определение его вирулентности.

При гематологических исследованиях в начальной стадии болезни обнаруживают выраженную лейкопению (пониженный уровень лейкоцитов в общем клеточном составе крови), продолжительность которой ярко свидетельствует о степени тяжести поражения лимфатической ткани, ее истощении и разрушении.

Окончательный диагноз в необходимых случаях устанавливают по результатам биопробы на щенках собак, лисиц, песцов, хорьков. Для заражения используют кровь больного животного в момент первого подъема температуры или же суспензию из паренхиматозных органов трупов.

При дифференциальной диагностике необходимо исключить болезни, имеющие подобные с чумой клинические признаки: аденовирусные инфекции, парвовирусный и коронавирусный энтериты, лептоспироз, болезнь Ауески, сальмонеллез, отравление и др. На отдельных стадиях развития чума сходна с инфекционным гепатитом собак (инфекционным энцефаломиелитом лисиц), бешенством, пастереллезом, авитаминозом.

При безжелтушной (геморрагической) форме лептоспироза, также сопровождающейся лихорадкой, гибель животных наступает быстро — через 2−3 дня. Инфекционный гепатит наблюдается в основном у молодняка в возрасте до года, характеризуется он стационарностью, нередко протекает с увеличением печени. У лис, как правило, развивается энцефаломиелит. При бешенстве выражены параличи мышц глотки, нижней челюсти и всех конечностей. Болезнь Ауески завершается летальным исходом в день заболевания. Сальмонеллез поражает молодняк 1−2-х месячного возраста. Конъюнктивит не наблюдается, выражено западение глаз в орбиты, вследствие дегидратации — обезвоживания. Пастереллез протекает остро, начинаясь внезапно, и поражает зверей разного возраста в разных участках фермы. Авитаминозу витаминов группы В, предшествует кормление зверей рыбой, содержащей тиаминазу — это фермент (энзим), присутствующий в некоторых видах рыб, а также в некоторых растениях, бактериях и в африканских видах шелкопрядов (silk worm). Болезнь характеризуется массовостью и быстрым выздоровлением многих животных после лечения тиамином.