Цель, задачи и особенности токсилогического анализа. 
Правила взятия, упаковки и пересылки проб патматериала, кормов и воды в лабораториию. 
Общая схема и порядок химико-токсилогического исследования

Химико-токсикологический анализ в ветеринарной токсикологии имеет решающее значение. При установлении диагноза на отравление, изучении миграции токсических веществ в объектах окружающей среды и организме животных, проведении ветеринарно-санитарной оценки кормов и продуктов питания используют, как правило, только химико-аналитические методы исследования. Особенно их значение возросло за последние годы, когда стали уделять особое внимание охране окружающей среды, в системе которой большое место занимает мониторинг — накопление фактических данных по уровню загрязнения объектов окружающей среды токсическими веществами различного происхождения.

Судебно-ветеринарная экспертиза включает:

• 1. Судебно-ветеринарное вскрытие, производимое только по письменному предписанию следственных органов. При одном лишь подозрении на отравление вскрытие животных может быть произведено по разрешению местной власти и заключению ветврача. На вскрытии присутствует комиссия из 2−3 официальных лиц. Вскрытие должно быть полным, с подробным четким описанием в протоколе фактических изменений внутренних органов, указывают, какой материал взят для исследований, в чем упакован, куда направлен и что надлежит сделать с трупом.
• 2. Токсикологический анализ — использование различных методов исследования с целью выявления ядовитых веществ в кормах, воде и продуктах животного происхождения. Его проводят при установлении причин отравления животных, рыб, пчел и др., при ветеринарно-санитарной оценке кормов и пищевых продуктов. Используемые методы включают:
  • а) ботанический метод позволяет провести анализ кормов на содержание ядовитых растений, их семян в фураже, сене, силосе, зеленой траве биологически активных веществ (алаклоиды, токсины, гликозиды, эфирные масла, смолы, органические кислоты и др.;
  • б) микологический метод — обнаружение, идентификация грибов у животных, в кормах, патматериале. При его анализе проводят первичное выделение грибов из кормов и патамтериала; количественный учет и дифференциация их; выделение чистых культур гриба; экспериментальное заражение животных с последующими исследованиями (серологическое, патологоанатомическое, физико-химическое и др.);
  • в) химический метод проводится чаще посмертно. При этом обнаруживают тяжелые металлы и их соединения, радионуклиды, растительные яды (алкалоиды, кислоты, нитраты и нитриты, соединения фтора, фосфора и др.). Он включает колориметрические, титрометрические и принципы осадочной реакции;
  • г) биологический метод основан на использовании дафний, мух дрозофил, комнатных мух, личинок комаров, на которых воздействуют экстрактами ядовитых веществ, кормов и патологического материала. По токсическому эффекту и летальности насекомых судят о токсичности исследуемых объектов;
  • д) биохимический метод основан на использовании ферментов ацетилхолинэстеразы и транспортной Nа⁺, К⁺-АТФазы мембран гемолизированных эритроцитов кролика.
  • е) физико-химические методы наиболее перспективны для практического использования. Они включают методы тонкослойной и газовой хроматографии.

Тонкослойная хроматография основана на применении системы подвижных растворителей на хроматографической пластинке, проходящих определенное расстояние от линии старта до линии финиша. Метод тонкослойной хроматографии является полуколичественным, но чувствительность его высокая.

Газовая хроматография — наиболее совершенный физико-химический метод токсикологического анализа. Его используют для определения ХОС и ФОС.

Помимо этих методов, иногда используют спектроскопию, полярографию и методы нейтронно-активационного анализа.

Правила взятия патологического материала от трупов павших и больных животных при подозрении на отравление:

При подозрении на отравление от трупов павших животных посылают:

• — часть пищевода и пораженную часть желудка с содержимым (в количестве 0,5 кг);
• — отрезок толстого отдела кишечника (длиной до 40 см) и наиболее пораженной части вместе с содержимым (до 0,5 кг);
• — часть печени (0,5−1,0 кг) с желчным пузырем (от крупных животных, а от мелких животных печень целиком; - одну почку;
• — мочу в количестве 0,5 л;
• — скелетную мускулатуру в количестве 0,5 кг.

Одновременно с целью определения источника отравления посылают все корма (по 1 кг каждого вида корма), которые скармливали животным, кроме этого, обязательно посылают остатки кормов из кормушек.

Кроме того, в зависимости от особенностей предполагаемого отравления дополнительно посылают:

• — при подозрении на отравление через кожу — часть кожи, клетчатки, мышцы из места предполагаемого введение яда;
• — при подозрении на отравление газами (синильной кислотой, сероуглеродом и т. п.);
• — наиболее полнокровную часть легкого (в количестве 0,5 кг), трахею, часть сердца, 200 мл крови, часть селезенки и головного мозга. От мелких животных (в том числе и от птиц) берут органы целиком.

При вскрытии отрытого из земли трупа животного надо взять:

• — сохранившиеся внутренние органы в количестве до 1 кг,
• — скелетную мускулатуру в количестве 1 кг,
• — землю под и над трупом по 0,5 кг из двух-трех мест.

При подозрении на отравление веществами, употребляемыми для борьбы с сельскохозяйственными вредителями, минеральными удобрениями, красками посылают пробы их в количестве от 100 г до 1 кг.

От больных животных при подозрении на отравление посылают:

• — рвотные массы, желательно первые порции;
• — мочу — все количество, которое удалось получить;
• — кал в количестве 0,5 кг;
• — молоко от лактирующих животных;
• — содержимое желудка, полученное через пищеводный зонд;
• — корма и вещества, которые могли являться причиной отравления.

Материал, взятый для химического исследования, нельзя обмывать и держать вместе с металлическими предметами; его отправляют в чистом не консервированном виде. Консервировать материал животного происхождения можно только в случае, если он будет доставлен в лабораторию не ранее, чем через 3−4 дня после взятия. Консервировать такой материал можно только спиртом-ректификатом в соответствии 1 часть спирта — 2 части материала. Одновременно посылают и пробу спирта (не менее 50 мл), которым законсервирован материал.

Упаковывают материал в чистые, широкогорлые стеклянные банки, плотно закрытые стеклянными притертыми пробками, а при отсутствии их — чистыми не бывшими в употреблении корковыми пробками или чистой писчей или вощеной бумагой.

Поверх пробки банку обертывают чистой бумагой, обвязывают тонким шпагатом, концы которого припечатывают сургучной печатью.

На каждую банку наклеивают этикетку, на которой чернилами записывают, какие органы и в каком количестве (по весу) помещены в банку, вид и кличку животного, дату падежа и вскрытия трупа животного, указывают, какое подозревается отравление и кому принадлежит животное.

Взятый материал должен быть отправлен в лабораторию немедленно.

От больных животных при подозрении на отравление посылают:

• · рвотные массы, желательно первые порции;
• · мочу — все количество, которое удалось получить;
• · кал — 0,5 кг;
• · корма и вещества, которые могли явиться причиной отравления.

При подозрении, что отравление наступило вследствие поедания ядовитых растений, в следующем порядке:

деревянную рамку с внутренним размером — 1мІ накладывают на травостой луга или пастбища в местах выпаса скота, все оказавшиеся внутри рамки растения срезают под корень. Если травостой однотипный, пробу с 1га луга или пастбища берут в 3−5 местах; если травостой разнотипный, то количество проб увеличивают. Если пробу трав, взятых для исследования, можно доставить в лабораторию в течение нескольких часов, то траву посылают в сыром виде, при длительной пересылке пробы сушат и доставляют в сухом виде.

Отправка материала. Материал, взятый для химического исследования, нельзя обмывать и держать вместе с металлическими предметами; его отправляют в чистом, не консервированном виде. Консервировать материал животного происхождения можно только в том случае, если он будет доставлен в лабораторию не раннее чем через 3−4 дня после взятия, консервировать такой материал можно только спиртом — ректификатом. Упаковывают материал в чистые, широкогорлые стеклянные банки, плотно закрывающиеся, поверх пробки банки обертывают бумагой, обвязывают тонкий шпагатом и опечатывают. На каждую банку наклеивают этикетку, на которой записывают какие органы, и в каком количестве помещены в банку, дату падежа.

Взятие и отправка патологического материала при отравлении рыб.

Со дна водоема берут грунт для исследования в количестве 2 кг. Грунт сушат на воздухе, растирают в ступке, просеивают через мелкое сито и упаковывают в широкогорлые банки или полиэтиленовые мешочки по 500 г в каждый.

Из водоема берут пробу воды в количестве 2−3л, так чтобы проба соответствовала всей массе воды. Воду для химического анализа отбирают в чисто вымытые (без мыла) склянки.

Отбирают живых или недавно погибших рыб. Если доставить живых или снулых рыб не возможно, их консервируют спиртом-ректификатом. Консервировать другими веществами нельзя.

Планктон, так же как и грунт, способен кумулировать ряд токсических веществ. Для получения планктона воду в количестве 50−100л фильтруют через планктонную сетку «мельничный газ» и собирают его.

Весь взятый материал упаковывают в тару, опечатывают и вместе с актом обследования водоема отправляют в лабораторию.

Взятие и отправка патологического материала при подозрении на отравления пчел.

Доставляют 400−500г подмора пчел, сотовую рамку с пергой и 500 г сотового меда. Подмор пчел помещают в чистый мешочек (бумажный, матерчатый), упаковывают в картонную коробку. Сотовые рамки в деревянный ящик, не обертывая бумагой. Мед помещают в чистую, сухую, стеклянную посуду.

Взятие и пересылка кормов для химического исследования.

Отбор проб — средняя проба корма должна по своему составу отображать средний состав имеющихся в наличии кормов, направляемых для исследования. Среднюю пробу отбирают по ГОСТу на продукцию:

• · для зерновых — 1 кг;
• · для шротов и жмыхов — 1 кг;
• · кормовая мука животного происхождения — два средних образца по 750 г;
• · рыбная мука — два средних образца по 500 г;
• · дрожжи кормовые — средний образец 2 кг.

Отобранные пробы сухих кормов упаковывают в чистые мешочки из целлофана и опечатывают.

Жидкие корма (барду, дробину и др.) берут после тщательного перемешивания. Жидкий корм посылают в чистых стеклянных банках, на которые наклеивают этикетку с характеристикой посылаемого корма.

Средняя проба силоса, сенажа, сена составляет 1 кг — заворачивают в чистую бумагу.

Отбор проб сельскохозяйственной продукции для санитарно-гигиенических и химико-токсикологических исследований Это ответственная работа, так как ошибки могут привести к неправильной оценке исследуемых образцов и обесцениванию работы аналитика при использовании самых чувствительных и точных методов исследования. При этом соблюдается следующая технология. Отбор проб слагается из нескольких этапов: отбора выемок, выборок, разовых проб, составления исходного образца, общей пробы, средней пробы; составления среднего образца; выделения навесок для анализа. Используют следующие способы:

• 1. Метод конверта способ отбора проб сыпучего или поштучного материала, хранящегося насыпью в зависимости от величины склада или хранилища. Применяется метод одиночного, двойного или тройного конверта.
• 2. Метод квартования — способ составления среднего образца из исходного. Материал высыпают на поверхность, чтобы сформировать на ней пирамиду с основанием в форме квадрата. Тщательно перемешать. С помощью двух коротких дощечек со скошенными ребрами набрать сыпучий растительный материал с двух противоположных концов и ссыпать его на середину квадрата до тех пор, пока слой не приобретет форму продолговатого холмика. Затем набрать дощечками материал с обоих концов холмика и ссыпать его на середину. Сформированную таким образом пирамиду расплющить в слой, имеющий форму квадрата и поделить его двумя диагоналями на четыре треугольника. Эту процедуру повторять до получения средней или лабораторной пробы нужной величины (1 кг — лабораторная проба).
• 3. Метод отбора проб по диагонали. Этим методом отбирают пробы от вегетирующих растений, к которым имеется легкий доступ. По диагонали поля в 7−10 точках, на равных расстояниях, в определенных интервалах берут пробы растений в количестве, достаточном для получения исходного образца.
• 4. Отбор проб по двум смежным сторонам. Этим методом отбирают пробы от вегетирующих растений, к которым доступ в глубине поля затруднен (например кукуруза, зерновые, рапс). На двух смежных сторонах намечают 2−3 точки так, чтобы они располагались по всей длине стороны. Затем на расстоянии 5, 10 и 15 м от края поля берут пробы. Общее количество отобранного материала должно соответствовать величине исходного образца.
• 5. Отбор проб культур в закрытом грунте. Пробы культур в закрытом грунте отбирают методом конверта, а при больших площадях — по системе двойного или тройного конверта.
• 6. Метод отбора проб с помощью пробоотборника. Данный способ используют при отборе проб из складов, силосохранилищ, средств транспорта. Принцип отбора проб этим методом заключается в выемке по схеме конверта проб с верхнего, среднего и нижнего слоев материала с каждого пункта конверта. При отборе проб используют различные пробоотборники и приспособления.

Техника подготовки пробы к исследованию. Растения на поле срезают серпом или ножом, выкапывают или вырывают из земли. Если растения вырывают из земли, корни следует отряхнуть. Пробы соломоподобного материала, жома и подобных им кормов отбирают рукой, следя за тем, чтобы не разорвать и не сломать отдельные фрагменты материала. Приспособление для отбора проб и руки отбирающего должны быть чистыми и сухими.

Составление исходного образца, общей пробы заключается в объединении всех выемок разовых проб. Исходный образец, общую пробу приготовляют в чистом сосуде, на чистом полотняном полотенце, соответствующей плотности, или на листе бумаги, чтобы предупредить падение частиц проб на землю.

Составление средней пробы. Среднюю пробу выделяют из общей путем квадратирования.

Составление среднего образца. Средний образец выделяют из средней пробы или исходного образца после тщательного перемешивания, квадратирования, размельчения и повторного перемешивания. Растения, загрязненные землей, а также их корни перед выделением среднего образца следует вымыть под проточной водой.

Поштучный материал четвертуют и делят пополам. При направлении проб на определение дитиокарбаматов до начала анализа нельзя разрезать овощи и фрукты, а также надрезать свежий растительный материал. Отбор проб производят в соответствии с табл.8−9-10. Отобранные жидкие пробы помещают в стеклянную посуду и закрывают пробками. Пробы мяса, колбасы и других продуктов заворачивают каждую отдельно в пергаментную бумагу и укладывают в бумажные или полиэтиленовые пакеты. Пробы овощей, сыпучих материалов помещают в матерчатые или бумажные пакеты. К каждому образцу независимо от места его отбора прикрепляют этикетку или вкладывают ее внутрь.

Образцы, доставленные в лабораторию по почте или лицами, не отвечающими за отбор, пломбируют или опечатывают.

Прием проб. Все образцы, поступающие в лабораторию, осматривают, вскрывают, регистрируют в журнале в соответствии с сопроводительной картой, отмечают дату поступления, кем направлен образец, место и дату отбора, наименование пробы, характеристику ее, основные причины возможного загрязнения, массу образца, подпись лица, принявшего образец.

В лаборатории к исследованию приступают в тот же день. При отсутствии такой возможности пробу помещают в холодильник, но не более чем на 3 сут, считая от даты взятия материала. Каждый средний образец соответствующим образом готовят для взятия навески для анализа. Навеска должна отражать всю среднюю пробу. При взятии средней навески следует учесть и навеску, необходимую для параллельного исследования другим методом.

Навеску зернобобовых, крупы измельчают на электромельнице или кофемолке. Навеску мяса, внутренних органов измельчают на мясорубке или измельчителе тканей. Лиственные, овощи, траву и другой растительный материал режут ножницами. Из каждого тщательно вымытого плода, клубня, корнеплода берут по осевой линии сегменты, масса которых должна в 10 раз превышать навеску. Сегменты измельчают на крупной терке или нарезают ножом. Жидкие продукты тщательно перемешивают. Яйца разбивают, отделяют белки от желтков. Средние образцы сохраняют на холоде до конца анализа, при обнаружении токсикантов выше нормативов — до вручения результатов исследования и принятия мер. После этого средние образцы уничтожают. Из лаборатории образцы можно выдавать только по требованию следственных органов. Результат анализа регистрируют в лабораторном журнале. В СХП «Светлое» пало 29 бычков. Предварительный диагноз — отравление карбофосом. Составить сопроводительное свидетельство и Акт химического исследования.