Π Π°Π·Π»ΠΈΡΠ°ΡΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, ΡΠ°Π·ΡΡΠ²Π°ΡΡΠΈΠ΅ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΠΆΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ Π² ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π°Ρ
ΠΠΠ ΠΈ Π ΠΠ, Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΠΈΠ΅ Π΄Π΅ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ², ΠΈ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ ΠΎΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΡ
ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΎΡ ΠΠΠ ΠΈ Π ΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². ΠΠΎΠΌΠΈΠΌΠΎ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ
Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·, ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ°ΡΠΏΠ°Π΄ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ.
ΠΠ΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ I ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡ ΡΠ°Π·ΡΡΠ² Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΠΈΡ
ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡ-Π½ΡΡ
ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· Π΄Π²ΡΡ
ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ 3'-ΠΌ ΡΠ³Π»Π΅ΡΠΎΠ΄Π½ΡΠΌ Π°ΡΠΎΠΌΠΎΠΌ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ·Ρ ΠΈ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ° Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΡ
ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²:
ΠΠΠ + (n-1) Π2O -> n-ΠΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ.
ΠΠ΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ II Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΏΠ°ΡΠ½ΡΡ
ΡΠ°Π·ΡΡΠ²ΠΎΠ² ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ
ΡΠ²ΡΠ·Π΅ΠΉ ΠΎΠ±Π΅ΠΈΡ
ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΠΠΠ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΊΡΡΠΏΠ½ΡΡ
ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². ΠΠΎΠΌΠΈΠΌΠΎ ΡΡΠΈΡ
ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΎΡΠΊΡΡΡΡ (ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Ρ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ²) Π΅ΡΠ΅ ΡΠΊΠ·ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ, Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ Ρ ΠΎΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΡ
5'-Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ².
Π Π΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠ°Π·Ρ — ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΠΠΠ°Π·Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΏΠ° Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ — ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡ ΡΠ°ΡΠΏΠ°Π΄ ΡΡΠΆΠ΅ΡΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ (Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠΌ ΡΠ°Π³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ) ΠΠΠ Π² ΡΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ
ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ°Ρ
ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ, ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡ
ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌΠΎΠ². ΠΠ· E. coli Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Ρ ΠΈ ΠΎΡ
Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π΄Π²Π΅ ΡΠ°ΠΊΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠ°Π·Ρ, ΠΎΠ±ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠ°Π΅ΠΌΡΠ΅ EcoRI ΠΈ EcoRII ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΠ· ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΊΠ°ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ
Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΠ°ΡΠΏΠ°Π΄ Π ΠΠ, Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½Ρ ΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ I. ΠΠ½ΠΈ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·ΡΡΡ ΡΠΎΡΡΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ Π²Π½ΡΡΡΠΈΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Π ΠΠ. ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½Π°Ρ ΠΈΠ· ΠΏΠΎΠ΄ΠΆΠ΅Π»ΡΠ΄ΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΆΠ΅Π»Π΅Π·Ρ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΡ
ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡΠ½ΡΡ
Π ΠΠΠ°Π·Π° ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· 124 Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠ½ΡΡ
ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ² Π²ΠΎ Π²ΡΠ΅Ρ
ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ
ΠΠ· ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΡΡΠΈΡ
ΡΠ°ΡΠΏΠ°Π΄ ΠΠΠ ΠΈ Π ΠΠ Π½Π΅ ΠΏΠΎ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΌΡ ΠΏΡΡΠΈ, ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ Π½Π°Π·Π²Π°ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄-ΡΠΎΡΡΠΎΡΠΈΠ»Π°Π·Ρ ΠΈ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ ΠΠΠ-Π³Π»ΠΈΠΊΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·.
ΠΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΡΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ ΠΊ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ
ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ² Ρ Π ΠΠ Π½Π° Π½Π΅ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΠΎΡΡΠ°Ρ, ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΈΠ±ΠΎ-Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π΄ΠΈΡΠΎΡΡΠ°Ρ (Π ΠΠ€):
ΠΡΠΊΡΡΡΠ° Π³ΡΡΠΏΠΏΠ° ΠΠΠ-Π³Π»ΠΈΠΊΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·, ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ
Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡΡ
ΠΎΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ
ΠΏΡΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΈ ΠΏΠΈΡΠΈΠΌΠΈΠ΄ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ
ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ (Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΡΡΠ°ΡΠΈΠ»Π°, ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΠ΅Π³ΠΎΡΡ ΠΏΡΠΈ Π΄Π΅Π·Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° ΡΠΈΡΠΎΠ·ΠΈΠ½Π° Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΠΠΠ).
Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΠΠΠ-Π³Π»ΠΈΠΊΠΎΠ·ΠΈΠ΄Π°Π·Ρ Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½ΡΡΡ Π²Π°ΠΆΠ½ΡΡ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΡ Π² ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ°Ρ
ΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΈΠΈ (Π²ΠΎΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ) ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ.