Лабораторные исследования кожевенного сырья

Пробы кожевенного и мехового сырья для исследования на сибирскую язву производят ветеринарные лаборатории в порядке, установленном «Указаниями по ветеринарно-санитарной обработке заготовляемого кожевенного и мехового сырья».

В случае несоблюдения установленных требований по отбору и пересылке проб для исследования ветеринарные лаборатории дают соответствующие указания предприятиям (заготовительным пунктам), приславшим пробы, а при необходимости могут требовать вторичного отбора и присылки проб.

Пробы от парного или мороженого сырья до стерилизации выдерживают для накопления преципитиногена в течение 2-х суток при комнатной температуре (не ниже 20 °С).

При приеме и подготовке проб для исследования (до стерилизации) следует соблюдать все меры предосторожности, предусмотренные в отношении поступающего в лабораторию заразного материала.

Работа по исследованию проб кожевенного и мехового сырья на сибирскую язву реакцией преципитации как парного, так и консервированного (пресно-сухое, мороженое, сухосоленое, мокросоленое) слагается из следующих процессов: стерилизации, измельчения и экстрагирования проб, фильтрации экстрактов, соединения компонентов и учета результатов исследования.

Стерилизация проб. Исследуемые пробы стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм. в течение 30 мин или при 1 атм. в течение 1 ч. На кожевенно-сырьевых заводах стерилизацию проб проводят в камерах Крупина или автоклавах под давлением 0,7 атм. в течение 1 ч 45 мин при температуре 110−115 °С. При стерилизации необходимо следить за тем, чтобы пробы не замокали. Для этого мокросоленое сырье стерилизуют в отдельной таре с решетчатой подставкой на дне. При необходимости совместной стерилизации проб различной консервировки мокросоленое сырье помещают в нижней части автоклава (камеры), также на решетчатой подставке, и отделяют от другого сырья пергаментной бумагой, куском брезента и т. п.

О проведенной стерилизации проб и тары делают соответствующие записи в специальном журнале с указанием даты, организации, приславшей пробы, наименования стерилизуемого материала и режима, при котором проводилась стерилизация (экспозиция, показания термометра, манометра).

Измельчение проб. После стерилизации пробы охлаждают и проверяют наличие и правильность нумерации, затем их измельчают автоматическими или ручными приборами (предварительно удалив шерсть), учитывая, что чем мельче измельчены пробы, тем полнее будет экстрагирован антиген.

О проведенной проверке нумерации проб, обнаруженных неправильностях, а также о количестве измельченных проб делают отметку в рабочей тетради.

От каждой пробы пресно-сухого, сухосоленого, мороженого и парного сырья измельчают точно по весу 1 г и помещают в баночку емкостью 50 мл с соответствующим номером пробы.

Затвердевшие, обеззараженные пробы пресно-сухого и сухосоленого сырья для удобства измельчения могут быть размягчены текучим паром в автоклаве однократно в течение 10−15 мин.

От каждой пробы мокросоленого сырья измельчают по 2 г, при этом простерилизованные мокросоленые пробы (на связке) непосредственно перед измельчением промывают в водопроводной воде (17−18 °С) в течение 25−30 с, не более, перебирая их руками. Затем пробы слегка отжимают, перекладывают в сухой кювет и измельчают. Нельзя промывать пробы сразу после стерилизации, горячие, а также в теплой или горячей воде.

Кожевенное и меховое сырье пресно-сухой и сухосоленой консервировки разрешается исследовать сдвоенными пробами.

Сдваивание проб при исследовании мороженого, парного и мокросоленого кожсырья не допускается.

Экстрагирование проб. При исследовании парного, мороженого, пресно-сухого, сухосоленого сырья применяют экстрагирующую жидкость, приготовленную путем добавления к физиологическому раствору (0,85% хлористого натрия на дистиллированной воде) 0,3% кристаллической карболовой кислоты. Для исследования мокросоленого сырья экстрагирующую жидкость готовят на дистиллированной воде с 0,3% карболовой кислоты без хлористого натрия.

Приготовленную экстрагирующую жидкость до заливки проб контролируют преципитирующей сывороткой. Правильно приготовленная экстрагирующая жидкость при наслаивании на преципитирующую сыворотку (или при подслаивании сыворотки) должна давать четкую границу без образования кольца. Измельченные пробы заливают экстрагирующей жидкостью посредством разливательного прибора: пресно-сухое, сухосоленое, парное и мороженое — по 10 мл, а мокросоленое — по 7−8 мл. В сдвоенные пробы пресно-сухого и сухосоленого сырья заливают по 15 мл экстрагирующей жидкости. Содержимое каждой баночки обязательно взбалтывают для быстрейшего погружения в жидкость измельченных проб. Продолжительность экстрагирования от 16 до 20 ч (холодный способ) при комнатной температуре (лучше 9−15 °С).

Пробы от свиных шкур экстрагируют горячим способом — в пробирках в кипящей водяной бане в течение 30 мин. Соотношение экстрагирующей жидкости и весь дальнейший порядок исследования свиных шкур аналогичен исследованию проб кожевенного и мехового сырья других видов животных, с учетом консервировки.

Фильтрация экстрактов. После экстрагирования проб экстракты фильтруют через воронки диаметром 39 мм в укороченные бактериологические пробирки, укрепленные в отверстиях линеек аппаратуры Флоринского. Для удобства мойки и быстроты фильтрации рекомендуется воронки укреплять в покровных линейках резиновыми колечками.

В качестве фильтра применяют асбестовую вату, которую (при получении каждой новой партии) проверяют лакмусом на нейтральность.

В случае кислой или щелочной реакции асбест перед работой промывают дистиллированной водой или физиологическим раствором, после этого отжимают и вновь проверяют на нейтральность. Плотность набивки фильтра должна обеспечивать возможность получения прозрачного экстракта в течение 1−2 ч.

В крайнем случае (при отсутствии асбестовой ваты) в качестве фильтра может быть применен лигнин.

Перед разливом экстрактов на фильтры жидкость каждой баночки взбалтывают. При разливе нужно следить, чтобы жидкость не стекала на стоящий рядом фильтр.

При снятии фильтров (линеек с воронками) экстракты просматривают на количество и прозрачность. При наличии мутных экстрактов допускается вторичная их фильтрация. Количество экстракта, необходимое для исследования, должно быть ½ или 1/3 объема укороченной бактериологической пробирки.