Спонтанная и индуцированная продукция АФК в разных возрастных группах

Для того чтобы выяснить, участвуют ли HSP70 в регуляции процессов продукции АФК нейтрофилами, мы оценили продукцию АФК в нейтрофилах и провели корреляционный анализ взаимосвязи параметров HSP70 и АФК в разных возрастных группах доноров.

На первом этапе была измерена спонтанная продукция АФК в неактивированных выделенных нейтрофилах в указанных возрастных группах. Несмотря на то, что интенсивная продукция АФК является одним из маркеров активированных нейтрофилов, без каких-либо дополнительных стимулов нейтрофилы разных доноров продуцировали разные количества АФК, что может отражать особенности их состояния еще до выделения, в кровеносном русле. Спонтанную продукцию АФК в неактивированных нейтрофилах измеряли двумя способами, с помощью проточной цитометрии, используя проницаемый флуоресцентный зонд DCFH-DA (DCF) и с помощью метода люминол-зависимой хемилюминесценции (ЛЗХ).

Исходный (т.е. спонтанный) уровень продукции АФК, измеренный с помощью ЛЗХ (АФКЛЗХ спонт) в группах как пожилых людей, так и долгожителей был значительно выше, чем уровень АФКЛЗХ спонт в группе молодых доноров. Эти данные хорошо соотносятся с теорией Хармана о накоплении с возрастом АФК [Харман, 1956].

Спонтанная продукция внутриклеточных АФК, зарегистрированная с помощью DCF (АФКDCF спонт), также была значительно выше в группе пожилых доноров, однако в группе долгожителей уровень АФКDCF спонт оказался сходным с аналогичным параметром в группе молодых доноров, в противоположность полученным данным для параметра АФКЛЗХ спонт.

Не удалось выявить достоверных корреляций между параметрами АФКDCF спонт и АФКЛЗХ спонт ни в одной из групп доноров, что может указывать на то, что используемые нами методы позволяют различать АФК из различных источников.

Также были проанализированы возрастные изменения индуцированной с помощью опсонизированного зимозана продукции АФК нейтрофилами (АФКЛЗХ инд) для того, чтобы оценить потенциальный функциональный ответ нейтрофилов на предполагаемый патоген. Этот параметр был рассчитан для клеток каждого донора, как отношение разницы между максимальным (АФКЛЗХ макс инд) и исходным уровнями продукции АФК к исходному уровню [АФКЛЗХ инд = (АФКЛЗХ макс инд — АФКЛЗХ спонт)/АФКЛЗХ спонт]. Следует отметить, что в зависимости от индивидуальных особенностей доноров значения АФКЛЗХ макс инд достигались в диапазоне от 10 до 20 мин после внесения зимозана. Никаких достоверных отличий значений медиан АФКЛЗХ инд между группами долгожителей и молодых доноров найдено не было; в то же время, уровень АФКЛЗХ инд в группе пожилых был значительно ниже по сравнению с группой молодых доноров.

Таким образом, анализ возрастных изменений продукции АФК в нейтрофилах человека выявил, что функциональный ответ нейтрофилов в группе долгожителей не был снижен относительно контрольной группы молодых доноров в отличие от группы пожилых, у которых такой ответ был снижен. Спонтанная внеклеточная продукция АФК с возрастом увеличивалась, в то время как спонтанная внутриклеточная продукция АФК в группе долгожителей не отличалась от уровня этого параметра в группе молодых, а в группе пожилых указанный параметр был достоверно выше.