ΠŸΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒ Π² написании студСнчСских Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚
АнтистрСссовый сСрвис

ГСнСтичСская характСристика ΠΈ паспортизация ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ² сСнной ΠΏΠ°Π»ΠΎΡ‡ΠΊΠΈ-антагонистов Ρ„ΠΈΡ‚ΠΎΠΏΠ°Ρ‚ΠΎΠ³Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ ΠΈ Π³Ρ€ΠΈΠ±ΠΎΠ²

Π Π΅Ρ„Π΅Ρ€Π°Ρ‚ΠŸΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒ Π² Π½Π°ΠΏΠΈΡΠ°Π½ΠΈΠΈΠ£Π·Π½Π°Ρ‚ΡŒ ΡΡ‚ΠΎΠΈΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒΠΌΠΎΠ΅ΠΉ Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Ρ‹

Π‘Π»Π΅Π΄ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠΌ этапом гСнотипирования B. subtilis являСтся расщСплСниС ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π”ΠΠš двумя Ρ„Π΅Ρ€ΠΌΠ΅Π½Ρ‚Π°ΠΌΠΈ рСстрикции с ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²Ρ€Π΅ΠΌΠ΅Π½Π½Ρ‹ΠΌ ΠΌΠ΅Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π±ΠΈΠΎΡ‚ΠΈΠ½ΠΎΠΌ. Π˜ΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΠ΅Ρ‚ΡΡ Π΄Π²Π΅ рСстриктазы — крупнощСпящая ΠΈ ΠΌΠ΅Π»ΠΊΠΎΡ‰Π΅ΠΏΡΡ‰Π°Ρ. Поиск in-silico выявил, Ρ‡Ρ‚ΠΎ Π»ΡƒΡ‡ΡˆΠ΅ΠΉ крупнощСпящСй рСстриктазой являСтся SgsI, ΠΈΠΌΠ΅ΡŽΡ‰ΠΈΠΉ сайт узнавания ΠΈ Ρ€Π°ΡΡ‰Π΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ GGvCGCGCC. Π”Π°Π½Π½Ρ‹ΠΉ Ρ„Π΅Ρ€ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ‚ 39 сайтов расщСплСния Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ B. subtilis… Π§ΠΈΡ‚Π°Ρ‚ΡŒ Π΅Ρ‰Ρ‘ >

ГСнСтичСская характСристика ΠΈ паспортизация ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ² сСнной ΠΏΠ°Π»ΠΎΡ‡ΠΊΠΈ-антагонистов Ρ„ΠΈΡ‚ΠΎΠΏΠ°Ρ‚ΠΎΠ³Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ ΠΈ Π³Ρ€ΠΈΠ±ΠΎΠ² (Ρ€Π΅Ρ„Π΅Ρ€Π°Ρ‚, курсовая, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½Ρ‚Ρ€ΠΎΠ»ΡŒΠ½Π°Ρ)

Π“Π•ΠΠ•Π’Π˜Π§Π•Π‘ΠšΠΠ― Π₯ΠΠ ΠΠšΠ’Π•Π Π˜Π‘Π’Π˜ΠšΠ И ΠŸΠΠ‘ΠŸΠžΠ Π’Π˜Π—ΠΠ¦Π˜Π― Π¨Π’ΠΠœΠœΠžΠ’ Π‘Π•ΠΠΠžΠ™ ΠŸΠΠ›ΠžΠ§ΠšΠ˜ — ΠΠΠ’ΠΠ“ΠžΠΠ˜Π‘Π’ΠžΠ’ Π€Π˜Π’ΠžΠŸΠΠ’ΠžΠ“Π•ΠΠΠ«Π₯ Π‘ΠΠšΠ’Π•Π Π˜Π™ И Π“Π Π˜Π‘ΠžΠ’

ЭкологичСски чистым ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠΌ контроля Π½Π°Π΄ Ρ„ΠΈΡ‚ΠΎΠΏΠ°Ρ‚ΠΎΠ³Π΅Π½Π°ΠΌΠΈ являСтся биологичСский ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄, ΠΏΡ€Π΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°ΡŽΡ‰ΠΈΠΉ использованиС ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ²-антагонистов. Одним ΠΈΠ· Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡˆΠΈΡ€ΠΎΠΊΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹Ρ… Π²ΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ²-антагонистов Ρ„ΠΈΡ‚ΠΎΠΏΠ°Ρ‚ΠΎΠ³Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ ΠΈ Π³Ρ€ΠΈΠ±ΠΎΠ² являСтся сСнная ΠΏΠ°Π»ΠΎΡ‡ΠΊΠ° — B. subtilis [1, P. 32]. Π­Ρ‚ΠΎ ΠΎΠ±ΡŠΡΡΠ½ΡΠ΅Ρ‚ΡΡ биологичСскими свойствами Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π²ΠΈΠ΄Π°, Ρ‚Π°ΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΊΠ°ΠΊ Ρ€Π°ΡΠΏΡ€ΠΎΡΡ‚Ρ€Π°Π½Π΅Π½Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒΡŽ Π² ΠΏΡ€ΠΈΡ€ΠΎΠ΄Π΅ ΠΈ, ΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ, ΠΏΡ€ΠΈΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π»ΡΠ΅ΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒΡŽ ΠΊ Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹ΠΌ условиям срСды, Π² Ρ‚ΠΎΠΌ числС с ΠΏΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒΡŽ угнСтСния Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΈΡ… Π²ΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΊΠΎΠ½ΠΊΡƒΡ€Π΅Π½Ρ‚Π½Ρ‹Ρ… ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ². ΠšΡ€ΠΎΠΌΠ΅ Ρ‚ΠΎΠ³ΠΎ, сСнная ΠΏΠ°Π»ΠΎΡ‡ΠΊΠ° ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·ΡƒΠ΅Ρ‚ споры, Ρ‡Ρ‚ΠΎ позволяСт ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π°Ρ‚ΡŒ Π±ΠΈΠΎΠΏΡ€Π΅ΠΏΠ°Ρ€Π°Ρ‚Ρ‹ достаточно ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½Ρ‹Π΅ ΠΏΡ€ΠΈ Ρ…Ρ€Π°Π½Π΅Π½ΠΈΠΈ. Для Π½Π°Π΄Π΅ΠΆΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ΄Π΅Π½Ρ‚ΠΈΡ„ΠΈΠΊΠ°Ρ†ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΏΠ°ΡΠΏΠΎΡ€Ρ‚ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΠΈ Ρ‚Π°ΠΊΠΈΡ… ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ² Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ…ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ соврСмСнных ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΈΠΊ гСнотипирования ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ². Π“Π΅Π½ΠΎΡ‚ΠΈΠΏΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ позволяСт ΠΏΡ€ΠΈΡΠ²ΠΎΠΈΡ‚ΡŒ молСкулярно-гСнСтичСский «ΡˆΡ‚Ρ€ΠΈΡ…-ΠΊΠΎΠ΄» ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΌΡƒ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΡƒ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΊΡ€Π°ΠΉΠ½Π΅ Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡ€ΠΈ использовании ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ² Π½Π° ΠΏΡ€Π°ΠΊΡ‚ΠΈΠΊΠ΅, ΠΏΡ€ΠΈ Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΠΈ спорных вопросов ΠΈ ΠΏΡ€ΠΈ Ρ…Ρ€Π°Π½Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ»Π»Π΅ΠΊΡ†ΠΈΠΉ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ² Π² Π»Π°Π±ΠΎΡ€Π°Ρ‚ΠΎΡ€Π½Ρ‹Ρ… условиях. Помимо этого, Π΅ΡΡ‚ΡŒ Π²Π΅Ρ€ΠΎΡΡ‚Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ Ρ‚ΠΎΠ³ΠΎ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΎΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½Ρ‹ΠΉ Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ Π”ΠΠš ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ сцСплСн с Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎΠΉ биологичСской ΠΈΠ»ΠΈ хозяйствСнно-ΠΏΠΎΠ»Π΅Π·Π½ΠΎΠΉ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒΡŽ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠ°, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΡ‚ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ Π΅Π³ΠΎ Π² ΠΊΠ°Ρ‡Π΅ΡΡ‚Π²Π΅ ΠΌΠ°Ρ€ΠΊΠ΅Ρ€Π° Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ свойства ΠΏΡ€ΠΈ ΠΈΠ·ΡƒΡ‡Π΅Π½ΠΈΠΈ Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΈΡ… ΠΏΠΎΡ‚Π΅Π½Ρ†ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»Π΅Π·Π½Ρ‹Ρ… ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ².

БущСствуСт мноТСство ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠ² типирования ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ². Π’ Π½Π°ΡΡ‚оящСС врСмя ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ·Π½Π°Ρ‡Π½ΠΎ Π΄ΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Ρ‹, основанныС Π½Π° ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠΎΡ€Ρ„ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ Π”ΠΠš (Π³Π΅Π½ΠΎΡ‚ΠΈΠΏΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅), ΡΠ²Π»ΡΡŽΡ‚ΡΡ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Ρ‡ΡƒΠ²ΡΡ‚Π²ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΌΠΈ ΠΈ Π²ΠΎΡΠΏΡ€ΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡ‹ΠΌΠΈ [2, P. 4; 3, P. 136].

На ΡΠ΅Π³ΠΎΠ΄Π½Ρ самым Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹ΠΌ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠΌ гСнотипирования являСтся ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ Π”Π Π˜Πœ (Π΄Π²ΠΎΠΉΠ½ΠΎΠ΅ расщСплСниС ΠΈ ΠΈΠ·Π±ΠΈΡ€Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅), ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹ΠΉ Π²ΠΏΠ΅Ρ€Π²Ρ‹Π΅ Π±Ρ‹Π» Ρ€Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Π°Π½ для клиничСских изолятов ΠΏΠ°Ρ‚ΠΎΠ³Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² — Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus ΠΈ Salmonella spp. [4, P. 284; 5, P. 417]. Π Π΅Π·ΡƒΠ»ΡŒΡ‚Π°Ρ‚ΠΎΠΌ гСнотипирования ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Π”Π Π˜Πœ являСтся Π³Ρ€ΡƒΠΏΠΏΠ° Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš Π² Π²ΠΈΠ΄Π΅ полос Π½Π° Ρ„ΠΈΠ»ΡŒΡ‚Ρ€Π΅, распрСдСлСниС ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Ρ… спСцифично для ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠ° ΠΈΠ»ΠΈ близкородствСнной Π³Ρ€ΡƒΠΏΠΏΡ‹ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ². Π’ΠΎΡ‡Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΈΠ΄Π΅Π½Ρ‚ΠΈΡ„ΠΈΠΊΠ°Ρ†ΠΈΠΈ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ², рассчитываСмая ΠΏΠΎ ΠΈΠ½Π΄Π΅ΠΊΡΡƒ дискриминации [6, P. 2465] ΠΏΡ€Π΅Π²Ρ‹ΡˆΠ°Π΅Ρ‚ Ρ‚ΠΎΡ‡Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ Ρ‚Π΅ΠΊΡƒΡ‰Π΅Π³ΠΎ «Π·ΠΎΠ»ΠΎΡ‚ΠΎΠ³ΠΎ стандарта» гСнотипирования (ΠΏΡƒΠ»ΡŒΡ-гСль элСктрофорСз) ΠΈ Π΄ΠΎΡΡ‚ΠΈΠ³Π°Π΅Ρ‚ для ΠΎΡ‚Π΄Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… Π²ΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² значСния 0,98.

ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ°. Π“Π΅Π½ΠΎΡ‚ΠΈΠΏΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² ΠΏΡ€Π΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅Ρ‚ Π²Ρ‹Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ высокомолСкулярной Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ Π”ΠΠš. На ΠΏΠ΅Ρ€Π²ΠΎΠΌ этапС исслСдований Π±Ρ‹Π»Π° ΠΏΡ€Π΅Π΄Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π° надСТная ΠΈ Π±Ρ‹ΡΡ‚рая ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ° выдСлСния Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ Π”ΠΠš ΠΈΠ· ΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠ°Π»ΠΎΡ‡ΠΊΠΈ. Для этого ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΠ²ΠΈΡ€ΡƒΡŽΡ‚ Π² ΡΡ€Π΅Π΄Π΅ с Ρ†Π΅Π»ΡŒΡŽ получСния чистой ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Ρ‹. Π‘Ρ‹Π»ΠΎ исслСдовано ряд ΠΏΠΎΠ΄Ρ…ΠΎΠ΄ΠΎΠ² ΠΊ Π²Ρ‹Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡŽ Π”ΠΠš ΠΈ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄, основанный Π½Π° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π»ΠΈΠ·ΠΎΡ†ΠΈΠΌΠ° для Ρ€Π°Π·Ρ€ΡƒΡˆΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½ΠΎΠΉ стСнки, оказался Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ эффСктивным.

Π’ Ρ…ΠΎΠ΄Π΅ Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Ρ‹ Π±Ρ‹Π»Π° Π²Ρ‹Π±Ρ€Π°Π½Π° Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ простая ΠΈ Ρ‚Схнологичная ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ° выдСлСния высокомолСкулярной Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ Π”ΠΠš B. subtilis. ВсС этапы этой ΠΎΠΏΡ‚ΠΈΠΌΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡ€ΠΎΡ†Π΅Π΄ΡƒΡ€Ρ‹ ΠΈΠ·Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½Ρ‹ Π½ΠΈΠΆΠ΅:

Ρ†Π΅Π½Ρ‚Ρ€ΠΈΡ„ΡƒΠ³ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Π°Π»ΡŒΠ½ΡƒΡŽ срСду ΠΈ ΡΠΎΠ±Ρ€Π°Ρ‚ΡŒ Π½Π°Π΄ΠΎΡΠ°Π΄ΠΎΡ‡Π½ΡƒΡŽ ΠΆΠΈΠ΄ΠΊΠΎΡΡ‚ΡŒ. Осадок ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ срСды Π²Ρ‹Π±Ρ€ΠΎΡΠΈΡ‚ΡŒ;

ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΠ²ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ B. subtilis Π² ΡΡ‚ΠΎΠΉ ΠΏΡ€ΠΎΠ·Ρ€Π°Ρ‡Π½ΠΎΠΉ срСдС ΠΏΡ€ΠΈ 30Ρ”Π‘ Π² Ρ‚Π΅Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π½ΠΎΡ‡ΠΈ (ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π½ΠΎ 16 часов), аэробно, Π½Π° ΡˆΠ΅ΠΉΠΊΠ΅Ρ€Π΅ 200 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½;

Ρ†Π΅Π½Ρ‚Ρ€ΠΈΡ„ΡƒΠ³ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ 3 ΠΌΠ» ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Ρ‹ 8000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½ 5 ΠΌΠΈΠ½ΡƒΡ‚, ΡΠ»ΠΈΡ‚ΡŒ Π½Π°Π΄ΠΎΡΠ°Π΄ΠΎΡ‡Π½ΡƒΡŽ ΠΆΠΈΠ΄ΠΊΠΎΡΡ‚ΡŒ;

ΡΡƒΡΠΏΠ΅Π½Π΄ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ осадок Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ Π² 300Β΅l Π±ΡƒΡ„Π΅Ρ€Π° TES (50 mMTris-HCL -20 mMEDTA — 10 mM NaCL, 8,0), внСсти 30Β΅l Π»ΠΈΠ·ΠΎΡ†ΠΈΠΌΠ° (10 ΠΌΠ³/ΠΌΠ», Π±ΡƒΡ„Π΅Ρ€ Π’Π• -10 ΠΌΠœΡ‚Ρ€ΠΈΡ-1ΠΌΠΌ ЭДВА), ΡΠΌΠ΅ΡˆΠ°Ρ‚ΡŒ, ΠΈΠ½ΠΊΡƒΠ±ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ ΠΏΡ€ΠΈ 37Ρ”Π‘ 60 ΠΌΠΈΠ½ΡƒΡ‚;

внСсти 20 Β΅l SDS (10% Π² Π²ΠΎΠ΄Π΅), ΡΠΌΠ΅ΡˆΠ°Ρ‚ΡŒ, ΠΈΠ½ΠΊΡƒΠ±ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ ΠΏΡ€ΠΈ 37Ρ”Π‘ 15 ΠΌΠΈΠ½ΡƒΡ‚;

внСсти Ρ€Π°Π²Π½Ρ‹ΠΉ объСм смСси Ρ„Π΅Π½ΠΎΠ»-Ρ…Π»ΠΎΡ€ΠΎΡ„ΠΎΡ€ΠΌ-ΠΈΠ·ΠΎΠ°ΠΌΠΈΠ»ΠΎΠ²Ρ‹ΠΉ спирт, ΠΌΠ΅ΡˆΠ°Ρ‚ΡŒ 3 ΠΌΠΈΠ½ΡƒΡ‚Ρ‹, Ρ†Π΅Π½Ρ‚Ρ€ΠΈΡ„ΡƒΠ³ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ 10 000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½ 10 ΠΌΠΈΠ½ΡƒΡ‚;

ΠΎΡ‚ΠΎΠ±Ρ€Π°Ρ‚ΡŒ Π²Π΅Ρ€Ρ…Π½ΡŽΡŽ Ρ„Π°Π·Ρƒ Π² Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΡƒΡŽ ΠΏΡ€ΠΎΠ±ΠΈΡ€ΠΊΡƒ;

ΠΏΡ€ΠΈΠ±Π°Π²ΠΈΡ‚ΡŒ Ρ€Π°Π²Π½Ρ‹ΠΉ объСм ΠΈΠ·ΠΎΠΏΡ€ΠΎΠΏΠΈΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ спирта, ΡΠΌΠ΅ΡˆΠ°Ρ‚ΡŒ;

Ρ†Π΅Π½Ρ‚Ρ€ΠΈΡ„ΡƒΠ³ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ, осадок Π”ΠΠš ΠΏΡ€ΠΎΠΌΡ‹Ρ‚ΡŒ 70% этиловым спиртом, ΠΏΠΎΠ΄ΡΡƒΡˆΠΈΡ‚ΡŒ ΠΈ Ρ€Π°ΡΡ‚Π²ΠΎΡ€ΠΈΡ‚ΡŒ Π² 50Β΅l Π±ΡƒΡ„Π΅Ρ€Π° Π’Π•.

Π‘Π»Π΅Π΄ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠΌ этапом гСнотипирования B. subtilis являСтся расщСплСниС ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π”ΠΠš двумя Ρ„Π΅Ρ€ΠΌΠ΅Π½Ρ‚Π°ΠΌΠΈ рСстрикции с ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²Ρ€Π΅ΠΌΠ΅Π½Π½Ρ‹ΠΌ ΠΌΠ΅Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π±ΠΈΠΎΡ‚ΠΈΠ½ΠΎΠΌ. Π˜ΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΠ΅Ρ‚ΡΡ Π΄Π²Π΅ рСстриктазы — крупнощСпящая ΠΈ ΠΌΠ΅Π»ΠΊΠΎΡ‰Π΅ΠΏΡΡ‰Π°Ρ. Поиск in-silico выявил, Ρ‡Ρ‚ΠΎ Π»ΡƒΡ‡ΡˆΠ΅ΠΉ крупнощСпящСй рСстриктазой являСтся SgsI, ΠΈΠΌΠ΅ΡŽΡ‰ΠΈΠΉ сайт узнавания ΠΈ Ρ€Π°ΡΡ‰Π΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ GGvCGCGCC. Π”Π°Π½Π½Ρ‹ΠΉ Ρ„Π΅Ρ€ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ‚ 39 сайтов расщСплСния Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ B. subtilis ΠΈ ΠΏΡ€ΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΡ‚ «Π»ΠΈΠΏΠΊΠΈΠ΅» ΠΊΠΎΠ½Ρ†Ρ‹, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ мСтятся Π±ΠΈΠΎΡ‚ΠΈΠ½ΠΈΠ»ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½Π½Ρ‹ΠΌ дСзоксицитозином (Bio-dCTP) с ΠΏΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒΡŽ Taq-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π°Π·Ρ‹. ΠŸΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π°Π΅ΠΌΡ‹Π΅ Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚Ρ‹ Π”ΠΠš Π½Π΅ ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ Ρ€Π°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½Ρ‹ Π² ΠΎΠ±Ρ‹Ρ‡Π½ΠΎΠΌ Π°Π³Π°Ρ€ΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅, Ρ‚Π°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠ²Π»ΡΡŽΡ‚ΡΡ слишком ΠΊΡ€ΡƒΠΏΠ½Ρ‹ΠΌΠΈ. ΠŸΠΎΡΡ‚ΠΎΠΌΡƒ, Π² Ρ€Π΅Π°ΠΊΡ†ΠΈΡŽ Π²Π²ΠΎΠ΄ΠΈΠΌ ΠΌΠ΅Π»ΠΊΠΎΡ‰Π΅ΠΏΡΡ‰ΡƒΡŽ рСстриктазу. Π’ Ρ€Π΅Π·ΡƒΠ»ΡŒΡ‚Π°Ρ‚Π΅ Ρ‚Π°ΠΊΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π²ΠΎΠΉΠ½ΠΎΠ³ΠΎ расщСплСния Ρ€Π°Π·ΠΌΠ΅Ρ€ Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš являСтся ΠΎΠΏΡ‚ΠΈΠΌΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΌ для раздСлСния Π² Π°Π³Π°Ρ€ΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠžΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒΡŽ мСлкощСпящСй рСстриктазы являСтся Ρ‚ΠΎ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π°Π΅ΠΌΡ‹Π΅ Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚Ρ‹ Π”ΠΠš ΠΈΠΌΠ΅ΡŽΡ‚ Π»ΠΈΠ±ΠΎ Ρ‚ΡƒΠΏΡ‹Π΅, Π»ΠΈΠ±ΠΎ 3ў-Π²Ρ‹ΡΡ‚ΡƒΠΏΠ°ΡŽΡ‰ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ½Ρ†Ρ‹, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ Π½Π΅ ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π²ΠΊΠ»ΡŽΡ‡ΠΈΡ‚ΡŒ Bio-dCTP. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·ΠΎΠΌ, Π² Ρ€Π΅Π°ΠΊΡ†ΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ смСси присутствуСт ΠΎΠ³Ρ€Π°Π½ΠΈΡ‡Π΅Π½Π½ΠΎΠ΅ число ΠΌΠ΅Ρ‡Π΅Π½Ρ‹Ρ… Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ Ρ€Π°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½Ρ‹ ΠΈ Π²ΠΈΠ·ΡƒΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½Ρ‹.

ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΈΡ‡Π΅ΡΠΊΠΈ ΠΏΡ€ΠΎΡ†Π΅Π΄ΡƒΡ€Π° гСнотипирования Π”Π Π˜Πœ Π²ΠΊΠ»ΡŽΡ‡Π°Π΅Ρ‚ 1) Π΄Π²ΠΎΠΉΠ½ΠΎΠ΅ расщСплСниС ΠΈ ΠΈΠ·Π±ΠΈΡ€Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ 2) элСктрофорСз Π² Π°Π³Π°Ρ€ΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅ 3) пСрСнос Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš Π½Π° Π½Π΅ΠΉΠ»ΠΎΠ½ΠΎΠ²Ρ‹ΠΉ Ρ„ΠΈΠ»ΡŒΡ‚Ρ€ 4) Π΄Π΅Ρ‚Π΅ΠΊΡ†ΠΈΡŽ Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš Π½Π° Ρ„ΠΈΠ»ΡŒΡ‚Ρ€Π΅.

Π”Π²ΠΎΠΉΠ½ΠΎΠ΅ расщСплСниС ΠΈ ΠΈΠ·Π±ΠΈΡ€Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ сводится ΠΊ Π²Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡŽ Π² ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΏΡ€ΠΎΠ±ΠΈΡ€ΠΊΡƒ 15 ΠΌΠΊΠ» Π²ΠΎΠ΄Ρ‹, 2 ΠΌΠΊΠ» 10-ΠΊΡ€Π°Ρ‚Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π±ΡƒΡ„Π΅Ρ€Π° R (Fermentas™), 2 ΠΌΠΊΠ» Π²Ρ‹Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ Π”ΠΠš ΠΈ 1 ΠΌΠΊΠ» Ρ„Π΅Ρ€ΠΌΠ΅Π½Ρ‚Π½ΠΎΠΉ смСси (Π΄Π²Π΅ рСстриктазы, Taq-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π°Π·Π° ΠΈ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΊΠ° Bio-dCTP). Π˜Π½ΠΊΡƒΠ±Π°Ρ†ΠΈΡ проводится Π² Ρ‚Π΅Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ 2−3 часов ΠΏΡ€ΠΈ 37 Β°C.

Π­Π»Π΅ΠΊΡ‚Ρ€ΠΎΡ„ΠΎΡ€Π΅Π· происходит Π² 0,8% Π°Π³Π°Ρ€ΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ20 смпри напряТСнии 60 Π’ Π² Ρ‚Π΅Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ 16 часов.

ΠŸΠ΅Ρ€Π΅Π½ΠΎΡ Ρ€Π°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Π² ΡΠ»Π΅ΠΊΡ‚Ρ€ΠΎΡ„ΠΎΡ€Π΅Π·Π΅ Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš Π½Π° Π½Π΅ΠΉΠ»ΠΎΠ½ΠΎΠ²Ρ‹ΠΉ Ρ„ΠΈΠ»ΡŒΡ‚Ρ€ осущСствляСтся Π½Π΅ΠΌΠ΅Π΄Π»Π΅Π½Π½ΠΎ послС элСктрофорСза Π² Π΄ΠΈΡΡ‚ΠΈΠ»Π»ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ΄Π΅ Π½Π° Π²Π°ΠΊΡƒΡƒΠΌΠ½ΠΎΠΌ ΠΏΡ€ΠΈΠ±ΠΎΡ€Π΅ (дСнатурация ΠΈ Π½Π΅ΠΉΡ‚рализация Π”ΠΠš Π½Π΅ Ρ‚рСбуСтся). ДСтСкция Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš Π½Π° Ρ„ΠΈΠ»ΡŒΡ‚Ρ€Π΅ проводится с ΠΏΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒΡŽ ΠΎΠ±Ρ‹Ρ‡Π½ΠΎΠΉ Ρ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠΉ химичСской Ρ€Π΅Π°ΠΊΡ†ΠΈΠΈ, основанной Π½Π° Π²Ρ‹ΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ Ρ‰Π΅Π»ΠΎΡ‡Π½ΠΎΠΉ фосфатазы.

Π Π΅Π·ΡƒΠ»ΡŒΡ‚Π°Ρ‚Ρ‹. ПослС испытания Π³Ρ€ΡƒΠΏΠΏΡ‹ рСстриктаз Π±Ρ‹Π»Π° ΠΎΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π° ΠΎΠΏΡ‚ΠΈΠΌΠ°Π»ΡŒΠ½Π°Ρ комбинация для ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡƒΡŽΡ‰Π΅Π³ΠΎ использования Π² Π³Π΅Π½Π΅Ρ‚ичСской паспортизации ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ² B. subtilis — SgsI ΠΈ Eco32I. РСстриктаза SgsI ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ‚ 39 сайтов расщСплСния Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ B. subtilis (тСорСтичСски максимальноС число Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš Π±ΡƒΠ΄Π΅Ρ‚ 78). ΠŸΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π°Π΅ΠΌΡ‹Π΅ Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚Ρ‹ Π”ΠΠš ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ ΠΏΠΎΠΌΠ΅Ρ‡Π΅Π½Ρ‹ Π±ΠΈΠΎΡ‚ΠΈΠ½ΠΎΠΌ Π² Ρ€Π΅Π°ΠΊΡ†ΠΈΠΈ Π”Π Π˜Πœ. РСстриктаза Eco32I ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ‚ 1684 сайта расщСплСния, Ρ‡Ρ‚ΠΎ Π΄Π°Π΅Ρ‚ срСдний Ρ€Π°Π·ΠΌΠ΅Ρ€ Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚Π° Π”ΠΠš сСнной ΠΏΠ°Π»ΠΎΡ‡ΠΊΠΈ 3000 ΠΏΠ°Ρ€ оснований, Ρ‡Ρ‚ΠΎ являСтся ΠΎΠΏΡ‚ΠΈΠΌΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΌ с Ρ‚ΠΎΡ‡ΠΊΠΈ зрСния раздСлСния Π”ΠΠš Π² 0,8% Π°Π³Π°Ρ€ΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. Π£ΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½Ρ‹Π΅ рСстриктазы Ρ…ΠΎΡ€ΠΎΡˆΠΎ совмСстимы Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌ Π±ΡƒΡ„Π΅Ρ€Π΅ — Π±ΡƒΡ„Π΅Ρ€ R (Fermentas™), Π½Π΅ ΠΏΡ€ΠΎΡΠ²Π»ΡΡŽΡ‚ «Π·Π²Π΅Π·Π΄Π½ΠΎΠΉ» активности, ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½Ρ‹, достаточно спСцифичны ΠΈ Π½Π΅ Π΄ΠΎΡ€ΠΎΠ³ΠΈ.

Π“Π΅Π½ΠΎΡ‚ΠΈΠΏΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ позволяСт Π²Ρ‹ΡΠ²ΠΈΡ‚ΡŒ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ 30 Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš, распрСдСлСниС ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Ρ… спСцифично Π² ΠΎΡ‚Π½ΠΎΡˆΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠ°. ПослС ΠΎΠΏΡ‚ΠΈΠΌΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΠΈ условий провСдСния Ρ€Π΅Π°ΠΊΡ†ΠΈΠΈ Π”Π Π˜Πœ Π½Π° Π΄Π²ΡƒΡ… ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠ°Ρ… сСнной ΠΏΠ°Π»ΠΎΡ‡ΠΊΠΈ, Π±Ρ‹Π»ΠΎ ΠΏΡ€ΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΎ Π³Π΅Π½ΠΎΡ‚ΠΈΠΏΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ 13 ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ².

Π’ Ρ€Π΅Π·ΡƒΠ»ΡŒΡ‚Π°Ρ‚Π΅ Π±Ρ‹Π»ΠΎ выявлСно 6 Π³Ρ€ΡƒΠΏΠΏ (кластСров) гСнотипичСски ΠΈΠ΄Π΅Π½Ρ‚ΠΈΡ‡Π½Ρ‹Ρ… ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ²:

  • 1) Π’10
  • 2) М22, 1И, 2И, 3И, 4И, 5И
  • 3) 1К
  • 4) Π€Π -318
  • 5) Π€Π -327
  • 6) 147/48/314, 110/723, 85/3/8 (Longus niger)

ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ Π”Π Π˜Πœ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ» ΠΈΠ΄Π΅Π½Ρ‚ΠΈΡ„ΠΈΡ†ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ ΡΠ»Π΅Π΄ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠ΅ ΡƒΠ½ΠΈΠΊΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Π΅ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΡ‹ — 1К, Π€Π -318, ΠΈ Π€Π -327. Π’ Ρ‚ΠΎ ΠΆΠ΅ врСмя, ΠΈΠΌΠ΅ΡŽΡ‚ΡΡ Ρ‚Ρ€ΠΈ Π³Ρ€ΡƒΠΏΠΏΡ‹ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ², ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ Π½Π΅ Π±Ρ‹Π»ΠΈ Π΄ΠΈΡ„Ρ„Π΅Ρ€Π΅Π½Ρ†ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½Ρ‹ Π½Π° ΠΎΡ‚Π΄Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹Π΅ Π³Π΅Π½ΠΎΡ‚ΠΈΠΏΡ‹ — это Π³Ρ€ΡƒΠΏΠΏΡ‹ 2 ΠΈ 6 Π² ΡΠΏΠΈΡΠΊΠ΅. Π’ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½Ρ‹ΠΌ объяснСниСм этого ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ гСнСтичСская Π±Π»ΠΈΠ·ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΡƒΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½Ρ‹Ρ… ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ² Π² ΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π°Ρ… ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ Π³Ρ€ΡƒΠΏΠΏΡ‹. ΠŸΡ€ΠΈ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΎΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ числа ΠΌΡƒΡ‚Π°Ρ†ΠΈΠΎΠ½Π½Ρ‹Ρ… ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠΉ Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ²Π»ΡΡŽΡ‚ΡΡ измСнСния ΠΈ Π² Ρ€Π°ΡΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš (Π½Π°ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Ρ€, ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΡ‹ Π€Π -318 ΠΈ Π€Π -327 ΠΎΡ‚Π»ΠΈΡ‡Π°ΡŽΡ‚ΡΡ всСго двумя Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚Π°ΠΌΠΈ Π”ΠΠš). ΠŸΡ€ΠΈ появлСнии Π»ΡŽΠ±Ρ‹Ρ… нСсовпадСний Π² Ρ€Π°ΡΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ Ρ„Ρ€Π°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² Π”ΠΠš Ρƒ Π΄Π²ΡƒΡ… ΠΈΠ·ΡƒΡ‡Π°Π΅ΠΌΡ‹Ρ… ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·Ρ†ΠΎΠ² ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π½Π° 100% ΡƒΡ‚Π²Π΅Ρ€ΠΆΠ΄Π°Ρ‚ΡŒ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·Ρ†Ρ‹ относятся ΠΊ Π΄Π²ΡƒΠΌ гСнСтичСски Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹ΠΌ ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠ±Π½Ρ‹ΠΌ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠ°ΠΌ. Π‘ Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΎΠΉ стороны, Ссли Π΄Π²Π° ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·Ρ†Π° Π½Π΅ Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π°ΡŽΡ‚ся, Π΅ΡΡ‚ΡŒ нСкоторая Π²Π΅Ρ€ΠΎΡΡ‚Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΎΠ½ΠΈ всС-Ρ‚Π°ΠΊΠΈ Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹. НС ΠΈΡΠΊΠ»ΡŽΡ‡Π΅Π½ΠΎ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Ρ‹ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π² ΠΊΠ°ΠΊΠΈΡ…-Ρ‚ΠΎ случаях Π²Ρ‹ΡΠ²ΠΈΡ‚ΡŒ Ρ€Π°Π·Π½ΠΈΡ†Ρƒ. Однако, Π΄Π°Π½Π½Ρ‹Π΅ Π½Π° Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡŒΠΊΠΈΡ… Π²ΠΈΠ΄Π°Ρ… клиничСски Π·Π½Π°Ρ‡ΠΈΠΌΡ‹Ρ… ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² (ΡΠ°Π»ΡŒΠΌΠΎΠ½Π΅Π»Π»Ρ‹, золотистый стафилококк, псСвдомона ΠΈ ΠΊΠ»ΠΎΡΡ‚Ρ€ΠΈΠ΄ΠΈΠΈ) ΡƒΠΊΠ°Π·Ρ‹Π²Π°ΡŽΡ‚, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ Π”Π Π˜Πœ самый Π²Ρ‹ΡΠΎΠΊΠΎΡ‡ΡƒΠ²ΡΡ‚Π²ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΉ Π² ΠΏΠ»Π°Π½Π΅ выявлСния гСнСтичСских Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡ΠΈΠΉ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρƒ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠ°ΠΌΠΈ. Π³Π΅Π½ΠΎΡ‚ΠΈΠΏΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΉ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌ Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·ΠΎΠΌ, ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ позволяСт ΠΈΠ΄Π΅Π½Ρ‚ΠΈΡ„ΠΈΡ†ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ ΠΎΡ‚Π΄Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹Π΅ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΡ‹ ΠΈ Π³Ρ€ΡƒΠΏΠΏΡ‹ близкородствСнных ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ² сСнной ΠΏΠ°Π»ΠΎΡ‡ΠΊΠΈ. ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Ρ€Π΅ΠΊΠΎΠΌΠ΅Π½Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ для контроля идСнтичности Π°Π½Ρ‚ΠΈΡ„ΠΈΡ‚ΠΎΠΏΠ°Ρ‚ΠΎΠ³Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Π±ΠΈΠΎΠΏΡ€Π΅ΠΏΠ°Ρ€Π°Ρ‚ΠΎΠ² Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡ€ΠΈΡ€ΠΎΠ΄Ρ‹ ΠΏΡ€ΠΈ ΠΈΡ… ΠΊΠΎΠΌΠΌΠ΅Ρ€Ρ‡Π΅ΡΠΊΠΎΠΌ производствС. ΠŸΡ€ΠΈ ΠΏΡ€ΠΎΠΌΡ‹ΡˆΠ»Π΅Π½Π½ΠΎΠΌ производствС Π±ΠΈΠΎΠΏΡ€Π΅ΠΏΠ°Ρ€Π°Ρ‚ΠΎΠ² маловСроятна контаминация Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΈΠΌ коммСрчСским ΠΈΠ»ΠΈ гСнСтичСски Π±Π»ΠΈΠ·ΠΊΠΈΠΌ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠΌ. Π‘ΠΊΠΎΡ€Π΅Π΅ всСго, контаминация происходит ΠΊΠ°ΠΊΠΈΠΌ-Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π΄ΠΈΠΊΠΈΠΌ ΠΏΡ€ΠΈΡ€ΠΎΠ΄Π½Ρ‹ΠΌ ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹ΠΉ гСнСтичСски Π·Π½Π°Ρ‡ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ отличаСтся ΠΎΡ‚ ΠΊΠΎΠΌΠΌΠ΅Ρ€Ρ‡Π΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΈ, ΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ, ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ ΠΈΠ΄Π΅Π½Ρ‚ΠΈΡ„ΠΈΡ†ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Π”Π Π˜Πœ.

Π—Π°ΠΊΠ»ΡŽΡ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅

Π‘Ρ‹Π» Ρ€Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Π°Π½ эффСктивный ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ выдСлСния высокомолСкулярной Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ Π”ΠΠš B. subtilis, ΠΎΠΏΡ‚ΠΈΠΌΠΈΠ·ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½Ρ‹ условия провСдСния молСкулярно-гСнСтичСского типирования для ΠΈΠ΄Π΅Π½Ρ‚ΠΈΡ„ΠΈΠΊΠ°Ρ†ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΏΠ°ΡΠΏΠΎΡ€Ρ‚ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΠΈ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… ΡˆΡ‚Π°ΠΌΠΌΠΎΠ².

БиблиографичСский список

  • 1. El-Hamshary O.I.M., Abo-Aba S.E.M., Awad N., Gomaa A.M. Genetic profile of Bacillus subtilis indigenous isolates and their performance as Bio-control agent against the plant pathogen Fusarium oxysporum // Res.J.Cell Mol.Biology. 2008. V. 2. P.30−38.
  • 2. Van Belkum. Guidelines for the validation and application of typing methods for the use in bacterial epidemiology // Clin. Microbial. Infect. 2007. V. 13. P. 1−46.
  • 3. Terletski V., Schwarz S., Carnwath J., and Niemann H. Typing of Salmonella enterica subsp. enterica serovars Choleraesuis, Typhimurium, Dublin and laboratory strains of Escherichia coli using subtracted restriction fingerprinting (SRF) // Microbiol. Res. 2003. V.158. P. 135−142.
  • 4. Terletskiy V., Kuhn G., Francioli P., Blanc D. Application and evaluation of double digest selective label (DDSL) typing technique for Pseudomonas aeruginosa hospital isolates // J. Microbiol. Methods. 2008. V. 72. P. 283−287.
  • 5. Terletskiy V., Tyshchenko V., Martinez-BallesterosI.et al. Validation of Double Digest Selective Label database for sequenced prokaryotic genomes // Bioinformatics. 2010. V. 26. P. 417−418.
  • 6. Hunter P.R., Gaston M.A. Numerical index of the discriminatory ability of typing systems: an application of Simpson’s index of diversity // J. Clin. Microbial. 1988. V. 26. P. 2465−2466.
ΠŸΠΎΠΊΠ°Π·Π°Ρ‚ΡŒ вСсь тСкст
Π—Π°ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡ‚ΡŒ Ρ„ΠΎΡ€ΠΌΡƒ Ρ‚Π΅ΠΊΡƒΡ‰Π΅ΠΉ Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚ΠΎΠΉ