Заключение. 
Разработка технологии культивирования и применения клеток кожи в лечении длительно незаживающих ран

Среди хирургической патологии раны и гнойные осложнения их занимают третье место среди всех хирургических больных. При эндотоксикозе происходит угнетение как клеточного, так и гуморального иммунитета. А это приводит к нарушению местных репаративных процессов. Нарушение процессов тканевой репарации, особенно у лиц пожилого возраста, ослабленных, имеющих иммунные нарушения, часто замедляет заживление ран.

Большую проблему составляют больные с обширными и глубокими ожогами, поскольку существует дефицит донорской кожи.

Много исследований проводится по выяснению причин хронизации воспалительных явлений. Одни считают причиной хронического длительного течения микроорганизмы их вирулентность. Другие первичную или вторичную недостаточность фагоцитов. Большое значение в хроническом воспалении и длительном заживлении ран отводится иммунной системе. Одним словом, проблема регуляции воспалительных и репаративных процессов весьма актуальна в современной хирургии.

В последние годы появилось много сообщений по лечению ожогов с использованием кожи выращенной в искусственных условиях, использование клеток кожи для закрытия ожоговых ран. Применение клеток кожи эмбриона открывает новые перспективные направления в лечении ран, так как они обладают большим пролиферативным потенциалом. Совершенно новое направление в лечении больных с хирургической инфекцией открывает применение естественного комплекса цитокинов. Цитокины формируют способность, интенсивность и направленность ответа фагоцитарных клеток на патоген.

Все выше сказанное и побудило нас провести исследования влияния на репаративные процессы в ране культивированных фибробластов, эмбриональных клеток кожи и местном применении цитокинов. Сравнить полученные результаты и выработать практические рекомендации по применению предложенных способов в лечении длительно незаживающих ран.

В лабораторных условиях были проведены исследования по возможностям получения культивированных клеток от разных по возрасту больных, в разные периоды воспалительной реакции, с разных участков кожного покрова. Изучались также влияние условий транспортировки, время длительности хранения исходного материала. Проводили исследования по влиянию различных ферментов на жизнеспособность клеток кожи.

Немало важным условием являлась и форма фасовки клеточного материала, который может доставляться быстро до больного или наоборот будет доставлен на длительное расстояние. В результате проведенных исследований доказано, что наибольшей пролиферативной активностью обладает эмбриональная ткань. Стали применять клетки кожи эмбриона. Выяснили, что они выделяют ряд противовоспалительных цитокинов, стали применять и кондиционные среды с естественным комплексом цитокинов.

В процессе исследования, выявили, что основным возбудителем, который поддерживает процесс хронического воспаления, является — стафилококк и палочка сине-зеленого гноя. В 25 — 32% случаев посевы ран, стерильные. Доказано, что культивированные клетки и цитокины обладают выраженной бактерицидностью, по сравнению с антисептиками и мазями на водорастворимой основе. При проведении лабораторных исследований у больных всех групп вывялены: незначительные воспалительные явления в целом организме в виде повышения лейкоцитов и моноцитов крови, повышения СОЭ.

При иммунологических исследованиях выявлено снижение процентного содержания лимфоцитов, абсолютного количества лимфоцитов в периферической крови. При исследовании клеточного звена Тлимфоцитов, выявлено повышение Тлимфоцитов супрессоров, при нормальных показателей общих популяций Тлимфоцитов и Т-хелперов. При исследовании функциональной активности нейтрофилов, выявлено снижение ее на 10%. Недостаточность фагоцитарных и иммунокомпетентных клеток и способствует развитию хронического воспаления в длительно незаживающих ранах.

Применение новых предложенных технологий в лечении длительно незаживающих ран, позволило быстро активизировать макрофагальные и иммунокомпетентные клетки и разорвать патогенез хронического воспаления. Ускорить репаративные процессы в ране по сравнению с традиционными методами в 2 — 3 раза.

Характерно, что во время лечения не отмечено ни одного осложнения.

Особый интерес представляет появление островковой эпителизации в 1 — 3 см от края раны, что никогда не наблюдается при лечении традиционными методами. Считаем что, островковая эпителизация появляется за счет краевого эпителия, который быстро перемещается к центру раны и за счет эпителиальных клеток при пересадки клеток кожи эмбриона. Появление эпителия за счет трансформации фибробластов требуется доказать.

Предложенные новые технологии обладают не только местным эффектом, но и выраженным общим иммунокоррегирующим, дезинтоксикационным действием. Что проявляется в нормализации показателей лейкоцитов, лимфоцитов, моноцитов, Тклеточных популяций.

Преимуществами предложенных технологий являются:

1. Выраженное антимикробное действие. 2. Иммуномодулирующим действием 3. Наличие дегидратационного эффекта. 4. Повышенной стимуляцией ангиогенеза. 5. Повышением миграции эпителиальных клеток к центру раны.

Выводы.

• 1. При заборе и транспортировке донорской кожи существует высокая вероятность контаминации ткани микроорганизмами. Транспортировку и временное хранение донорской кожи целесообразно проводить в физиологическом растворе с добавлением антибиотика в дозе 200 -500 мкг/мл.
• 2. Фибробласты взрослого человека обладают недостаточной пролиферативной активностью и малым сроком жизни (до 20 — 25 пассажей in vitro), поэтому, их следует использовать только для аутотрансплантации. Фибробласты эмбриона обладают высокой жизнеспособностью и высокой пролиферативной активностью (до 45 — 50 пассажей), что позволяет хранить их в банке клеток кожи в режиме «до востребования».
• 3. Разработан метод получения и культивирования клеток кожи (кератиноцитов, фибробластов) в лабораторных условиях на микроносителях, на целлофановой подложке и в геле, что позволяет их использовать в условиях длительной транспортировки и поздних сроков трансплантации.
• 4. При исследовании длительно незаживающих ран у 24% больных наблюдается снижение функциональной активности нейтрофилов в зоне воспаления, что способствует хронизации раневого процесса.
• 5. Культивированные фибробласты кожи человека обладают выраженной бактерицидностью, активируют ангиогенез, стимулируют миграцию краевых эпителиоцитов к центру раны, тем самым усиливают репаративную регенерацию кожной раны в 2 раза по сравнению с лечением традиционными методами.
• 6. Применение клеток кожи эмбриона в лечении длительно незаживающих ран, вызывает выраженную стимуляцию процессов ангиогенеза, появлений краевой и островковой эпителизации в 2,6 раза по сравнению с контрольной группой.
• 7. Использование цитокинов при лечении больных с длительно незаживающими ранами позволяет усилит…