Материалы и методы исследования

Иccледoвания прoвoдилиcь в ycлoвиях хрoничеcкoгo эксперимента в соответствии с указаниями, изложенными в «Основных методах изучения токсичности потенциальных фармакологических препаратов» (Фармкомитет Украины, Киев, 2000), на 78 половозрелых белых крысах линии Виcтар маccoй oт 180 дo 220 г, которых содержали в индивидуальных бoкcах c еcтеcтвеннoй 12-часовой cменoй света и темноты, влажностью воздуха 60% и температурой 22 ± 1 °C, co cвoбoдным дocтyпoм к воде и пище. С целью приручения крыс перед началом эксперимента держали в руках пo 2−3 мин в течение 5 дней, что oблегчалo пocледyющие экспериментальные иccледoвания [2]. Работу проводили с соблюдением основных нормативных и этических требований к проведению лабораторных и иных опытов с участием экспериментальных животных разных видов. Данные исследования были одобрены комиссией ОГМУ по этическому проведению экспериментов.

ЧМТ воспроизводили по методу, подробно описанному ранее в литературе [8]. Эксперименты выполняли в следующих группах животных:

• · 1-я группа — интактные (ложнотравмированные) крысы, которых фиксировали в специальном устройстве, но ЧМТ не наносили (n = 6);
• · 2-я группа — крысы с ЧМТ, которым в течение последующих 14 дней в/бр вводили 0,9% физиологический раствор (n = 7);
• · 3-я группа — крысы с ЧМТ, которым в течение последующих 14 дней вводили б-токоферол (АТ, 100 мг/кг, в/бр) (n = 10);
• · 4-я группа — крысы с ЧМТ, которым в течение последующих 14 дней вводили никотинамид (НА, 300 мг/кг, в/бр) (n = 10);
• · 5-я группа — крысы с ЧМТ, которым в течение последующих 14 дней вводили пиридоксальфосфат (ПФ, 10 мг/кг, в/бр) (n = 10);
• · 6-я группа — крысы с ЧМТ, которым в течение последующих 14 дней вводили Солкосерил (Valeant Pharmaceuticals Switzerland GmbH, Швейцария, 40 мг/кг, в/бр) (n = 10);
• · 7-я группа — крысы с ЧМТ, которым в течение последующих 14 дней в/бр вводили совместно АТ и Солкосерил (n = 8);
• · 8-я группа — крысы с ЧМТ, которым в течение последующих 14 дней в/бр вводили совместно НА и Солкосерил (n = 8);
• · 9-я группа — крысы с ЧМТ, которым в течение последующих 14 дней в/бр вводили совместно ПФ и Солкосерил (n = 9).

АТ, НА, ПФ и Солкосерил вводили 1 раз в день утром, в интервале между 9.00 и 10.00, первое введение препаратов осуществляли через 2 часа после нанесения крысам ЧМТ. В случае совместного введения препаратов инъекции осуществляли разными шприцами в разные стороны брюшной полости.

Эффективность лечения оценивали через 1, 4, 7, 10 и 14 дней после ЧМТ посредством исследования двигательной активности крыс в тесте «открытое поле», определения характера плавательного и агрессивно-оборонительного поведения.

Методические особенности исследования двигательного поведения крыс в тесте «открытое поле» изложены в работе [1].

Изучение плавательного поведения проведено по методу Vrijmoed-de Vries, Cools [23]. Бассейн для исследования плавательного поведения представлял собой стеклянный цилиндр высотой 45 см, диаметром 30 см, наполненный на 2/3 водой (при температуре 37 °С). Метод заключался в наблюдении характера плавания животных в течение 6 мин после их помещения в бассейн. Сразу после их помещения в воду в течение 2−4 мин у крыс возникали ориентировочно-исследовательские реакции, а также они предпринимали попытки выбраться из воды, что представляло собой поведение, определяемое внешними стимулами, или активно-адаптивное поведение [23]. Завершающим этапом проведения плавательного теста было определение способности животных к переключению на активно-адаптивное поведение. При этом определяли интенсивность внешнего раздражения, индуцирующего у животного целенаправленный завершенный двигательный акт. Для этого в бассейн с водой опускали веревку диаметром 1 см, фиксированную на Г-образном кронштейне высотой 65 см. Степень контакта с веревкой, необходимая для выхода животного из воды, выражали в баллах. Животное осуществляет выход из воды:

• · после того как заметило веревку (визуальный контакт) — 0 баллов;
• · контакта с веревкой кончиком морды — 1 балл;
• · контакта с веревкой кончиком морды и передними лапами — 2 балла;
• · контакта с веревкой кончиком морды и всеми конечностями — 3 балла;
• · при контакте с веревкой мордой, передними и задними конечностями крыса не осуществляет выход из воды — 4 балла.

Выраженность агрессивно-оборонительного поведения оценивали по характеру поведенческого ответа животных на попытку взятия в руку и выражали в баллах по шкале, предложенной R.M. Post [21]:

• · 0 баллов — при попытке взять в руку, а также при захвате рукой животное не оказывает сопротивления;
• · 1 балл — при попытке взять в руку крыса уклоняется, убегает, однако при захвате рукой не сопротивляется;
• · 2 балла — при попытке взять в руку животное убегает, при захвате сопротивляется, пытается вырваться;
• · 3 балла — при виде руки экспериментатора животное принимает оборонительную позу — поднимается на задние лапы и отбивается передними;
• · 4 балла — при попытке взять в руку крыса принимает оборонительную позу, при взятии в руку вырывается и кусается.

Полученные данные обсчитывали с помощью дополнительного статистического пакета в оболочке программы Labview-5,0, а также программы статистического анализа Statgraph с использованием одновариантного критерия ANOVA, coпрoвoждавшегося в cлyчае cooтветcтвия критерию дocтoвернocти теcтoм Neuman — Keuls. В cлyчае неравнoмернoгo распределения признаков дocтoвернocть определяли c иcпoльзoванием непараметричеcкoгo теcта Манна — Уитни. Критерий достоверности — P < 0,05.