Материал и методика исследований

Для проведения молекулярно-генетических исследований у животных были отобраны образцы ткани с ушной раковины площадью 1 смІ. ДНК выделяли с применением набора реагентов DIAtom DNA Prep 100 (ООО «НПФ Генлаб»). Анализ проводили методом ПЦР-ПДРФ (полимеразной цепной реакции — полиморфизм длин рестрикционных фрагментов). ПЦР проводили на амплификаторе «Терцик» (Россия).

Условия ПЦР гена GDF9: первоначальная денатурация — 2 мин при 940С; денатурация 940С — 30с, отжиг 630С — 40с, элонгация 720С — 30 с (35 циклов), завершающая элонгация при 720С 4 мин. ПЦР-ПДРФ анализ фрагмента гена GDF9 длиной 462 н.п., проводили с использованием эндонуклеазы BstHHl (ООО «СибЭнзим-М»).

Условия ПЦР гена GН: предварительная денатурация при 95 °C — 5 мин. и далее 33 цикла: 95 °C — 45 с, 60 °C — 45 с, 72 °C — 45с; заключительный синтез при 72 °C — 10 мин. Рестрикцию амплифицированного фрагмента проводили эндонуклеазой HaeIII.

Условия ПЦР гена CAST: предварительная денатурация при 95 °C — 4 мин. и далее 35 циклов: 94 °C — 45 с, 62 °C — 45 с, 72 °C — 45с; заключительный синтез при 72 °C — 7 мин [15]. Рестрикцию амплифицированного фрагмента CAST длиной 622 bp проводили эндонуклеазой MspI.

Размер полученных рестрикционных фрагментов определяли методом электрофореза в агарозном геле с добавлением бромистого этидия.