Материалы и методы

Для проведения исследований использовали следующие материалы:

• — вирус гриппа, А птиц подтип H5N1 с биологической активностью 9,75 lg ЭИД 50/мл и 8,75 lg ЛД 50 для цыплят и гемагглютинирующей активностью 1:32. Вирус представляет собой вируссодержащую жидкость куриных эмбрионов (КЭ);
• — куриные эмбрионы 8-дневного возраста;
• — забуференный физиологический раствор с рН 7,2−7,4;
• — эритроциты петуха, 1%-ная суспензия;
• — соль поваренная пищевая, ГОСТ Р 51 574 от 2000 г., 0,3%-ный раствор;
• — вода водопроводная нехлорированная из артезианской скважины;
• — спирт-ректификат;
• — парафин;
• — 5%-ный раствор йода;
• — бактериальные среды: МПА, МПБ, среда Сабуро;
• — нейтральный анолит (АНК) с рН 7,0 ± 0,5 и концентрацией активного хлора (к.а.х.) 200 и 500 мг/л, полученный из 0,3%-ного раствора пищевой поваренной соли на установке СТЭЛ-60−03;
• — кислый анолит (АК) с рН 3,0−4,0 и концентрацией активного хлора 500 мг/л, полученный на установке СТЭЛ-1 OAK;
• — щелочной католит с рН 11,0, полученный на установке УДЕЖ;
• — пшеница;
• — тест-объекты: элементы продукции птицеводства, корм, вода, эмитаторы поверхностей помещений и оборудования объектов ветеринарного надзора (скорлупа куриных яиц, перо и кожа кур, зерно, пластинки черного металла, керамика, дерево, керамическая плитка, кирпич).

Эффективность нейтрального анолита (АНК) в отношении обеззараживания объектов ветеринарного надзора, контаминированных вирусом гриппа, А птиц, осуществляли следующим образом. На тест-объекты наносили суспензию вируса и обрабатывали их испытуемым дезинфектантом, а затем выделяли вирус на куриных эмбрионах через различные сроки контакта дезинфектанта с испытуемым объектом.

Для обнаружения вируса гриппа, А кур в испытуемых пробах проводили реакцию гемагглютинации (РГА) с аллантоисной жидкостью зараженных куриных эмбрионов. В РГА использовали 1%-ную суспензию эритроцитов петуха.

Для оценки эффективности обеззараживающего действия нейтрального анолита (АНК) на вирус гриппа, А птиц к 9 мл этого дезинфектанта с концентрацией активного хлора 200 и 500 мг/л добавляли по 1 мл вируссодержащей аллантоисной жидкости, суспензию тщательно перемешивали и выдерживали при комнатной температуре. Пробы для исследования отбирали через 30 и 60 мин. Чтобы обнаружить вирус гриппа, пробами заражали куриные эмбрионы в аллантоисную полость в дозе по 0,1 мл. Наличие вируса выявляли в реакции гемагглютинации (РГА) с эритроцитами петуха.

При оценке эффективности обеззараживающего действия нейтрального анолита (АНК) на вирус гриппа, А птиц, которым контаминировали объекты ветеринарного надзора (дерево, металл, кирпичи, керамику, перо кур, скорлупу куриных яиц, кожу кур), на указанные объекты пипеткой наносили вирус гриппа, А птиц из расчета 1 мл/5 см 2 площади и равномерно распределяли по поверхности тест-объекта. После нанесения вируса тест-объекты подсушивали на воздухе: кожу кур 1 ч; скорлупу куриных яиц 20 мин; куриное перо 20 мин; дерево, кирпич, металл и керамику 1,5 ч. По окончании подсушивания на тест-объекты наносили анолит в виде крупнокапельного аэрозоля из расчета 60 мл/м 2 площади и оставляли на контакт. Пробы отбирали через 10, 15, 20, 30, 60, 90, 120 и 180 мин. После окончания экспозиции тест-объекты помещали в чашки Петри со стерильным физиологическим раствором (20 мл) для элюирования вируса с поверхности тест-объектов. Полученными элюатами заражали куриные эмбрионы для установления присутствия вируса. Наличие гемагглютинации свидетельствовало о присутствии вируса в курином эмбрионе, а отсутствие гемагглютинации свидетельствовало об отсутствии соответствующего вируса.

Эффективность обеззараживания зерна проверяли, погружая его пробы в раствор анолита на глубину не менее 5 см от поверхности и при экспозиции от 30 мин до 3 ч. Для выявления вируса материалом проб заражали куриные эмбрионы и через 72 ч инкубации с аллантоисной жидкостью куриных эмбрионов ставили реакцию гемагглютинации.

Чтобы оценить эффективность обеззараживания вируса гриппа, А птиц в воде, к 980 мл воды добавляли 20 мл анолита АНК с концентрацией активного хлора 500 мг/л, тщательно перемешивали и вносили 1 мл вируссодержащей аллантоисной жидкости. Все содержимое тщательно перемешивали и ставили на контакт при комнатной температуре. Пробы отбирали через 10 и 45 мин и через 2 ч. Материалами проб заражали куриные эмбрионы для обнаружения вируса гриппа; РГА ставили по общепринятой методике с использованием эритроцитов кур.

Во второй серии опытов с водой к 540 мл воды добавляли 60 мл вируссодержащей аллантоисной жидкости. Контаминированную воду распределяли в шесть проб по 100 мл в стерильные флаконы, а затем в пять флаконов внесли анолит АНК в количестве соответственно 5, 10, 20, 40 и 80 мл. Проба № 6 служила контролем вируса; экспозиция составила 1 ч.