ΠΠ΅ΡΠ»Π΅Π²Π°Ρ ΠΈΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ: ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ ΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅
ΠΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. ΠΠ»Ρ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ° LAMP-ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ². Π§Π°ΡΠ΅ Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠΠ³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΡΠΉ Π³Π΅Π»Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±Π°ΡΡΠ²Π°ΡΡ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠΌΠΈ, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΡΠΌ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΈΠ»ΠΈ SYBR Green I. Π’Π°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΡΠΉ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ Ρ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡΠΈΡΠ»Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠ»ΡΠΌΠΈ ΠΠΠ, ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·… Π§ΠΈΡΠ°ΡΡ Π΅ΡΡ >
ΠΠ΅ΡΠ»Π΅Π²Π°Ρ ΠΈΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ: ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ ΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ (ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ°Ρ, ΠΊΡΡΡΠΎΠ²Π°Ρ, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½Π°Ρ)
ΠΠ½Π½ΠΎΡΠ°ΡΠΈΡ
Π‘ΡΠ°ΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠ²ΡΡΠ΅Π½Π° Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΌΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ — ΠΏΠ΅ΡΠ»Π΅Π²ΠΎΠΉ ΠΈΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ (LAMP). Π Π°ΡΡΠΌΠ°ΡΡΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΡ, ΡΡΠ°ΠΏΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ, ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Ρ Π΅Π΅ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΈ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΈ.
ΠΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠ΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ
Π ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π°ΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ»Π΅Π²ΠΎΠΉ ΠΈΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡΡΡ ΠΏΡΠΎΡΡΠΎΡΠ°, ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ, ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, ΡΠΊΠΎΠ½ΠΎΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ. Π ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΎΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π² ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π΅ LAMP ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠ΅ (ΡΠ΅ΡΡΡ) ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°, ΡΡΠΎ ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ Π΅Π³ΠΎ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ. ΠΠ²ΡΠΎΡΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ΅ΡΠΊΠ½ΡΡΠΎ, ΡΡΠΎ LAMP ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π² ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΏΠΎΡΡΠΎΡΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ, Ρ. Π΅. Π΄Π»Ρ Π΅Π³ΠΎ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π½Π΅ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΡΡΠΎΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΎΠ±ΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ, ΠΊΠ°ΠΊ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΎΡ. ΠΠ»Ρ ΠΏΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠΈ LAMP ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠΈΠ±ΠΎΡΡ Π½Π° Π±Π°Π·Π΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΠ±Π»ΠΎΠΊΠ° ΠΈΠ»ΠΈ Π²ΠΎΠ΄ΡΠ½ΡΡ Π±Π°Π½Ρ. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, Π² ΡΡΠ°ΡΡΠ΅ Π΄Π°Π½Π° ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΡ ΠΎ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° Π΄Π»Ρ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ , Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΡΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ Π·Π°Π±ΠΎΠ»Π΅Π²Π°Π½ΠΈΠΉ. ΠΠ° Π΄Π°Π½Π½ΡΠΉ ΠΌΠΎΠΌΠ΅Π½Ρ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½ΠΎ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠ΅ΡΡ-ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌ Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠΠ ΠΈ Π ΠΠ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½ΠΎΠ². ΠΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΠΌ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΌ ΡΠ΅ΡΡ-ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°Π½ΠΈΡ Eiken Chemical.
ΠΠ΅ΡΠ»Π΅Π²Π°Ρ ΠΈΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ (LAMP) ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π½ΠΎΠ²ΡΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π±ΡΠ» ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½ Tsugunori Notomi ΠΈ Π΅Π³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»Π»Π΅Π³Π°ΠΌΠΈ Π² 2000 Π³. [1]. Π‘ΡΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π² ΡΠ΄Π²ΠΎΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ° ΠΠΠ Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ, ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΈ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡΡ Π² ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΏΠΎΡΡΠΎΡΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ. ΠΡΠΈ ΡΠΎΠ²ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠ΅ΠΉ LAMP ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π ΠΠ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ. ΠΠ°Π½Π½ΡΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ Π½Π° Π°Π²ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΌ ΡΠΈΠΊΠ»Π΅ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π° ΠΠΠ ΡΠ΅ΠΏΠΈ ΡΠΎ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π· Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡΠ΅Ρ (ΡΠ΅ΡΡΠΈ) ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ². Π§Π΅ΡΡΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉ-ΠΌΠ΅ΡΠ° ΡΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΡΡΠΎΠ±Ρ Π±ΡΡΡ Π½Π°ΡΠ΅Π»Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π½Π° ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½ΠΎΠ² Π³Π΅Π½Π°-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ. ΠΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ±ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ F3c, F2c ΠΈ F1c Π½Π° 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ ΠΈ Π1Ρ, Π2Ρ ΠΈ Π3Ρ Π½Π° 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅. Π Π°Π·Π»ΠΈΡΠ°ΡΡ Π²Π½Π΅ΡΠ½ΠΈΠ΅ (Outer) ΠΈ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΠΈΠ΅ (Inner) ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ. ΠΠ΅ΡΠ²ΡΠΉ Π²Π½Π΅ΡΠ½ΠΈΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ F3 (Forward Outer Primer) ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· F3 ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½Π°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ΅Π½ F3c ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π³Π΅Π½Π°-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ. ΠΡΠΎΡΠΎΠΉ Π²Π½Π΅ΡΠ½ΠΈΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ Π3 (Backward Outer Primer) ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· Π3 ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½Π°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ΅Π½ Π3Ρ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΡ Π³Π΅Π½Π°-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ. Π’ΡΠ΅ΡΠΈΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ — Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΠΈΠΉ FIP (Forward Inner Primer) ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ F2 ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ Π½Π° 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ΅Π½ F2c, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΠ°ΠΊΡΡ ΠΆΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ F1c ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½ ΠΠΠ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π½Π° 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅. Π§Π΅ΡΠ²Π΅ΡΡΡΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ BIP Backward Inner Primer ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΠΈΠΌ ΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½Π° Π2 Π½Π° 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ ΠΆΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ Π 1Ρ ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½ Π½Π° 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ [2].
ΠΡΠ°ΠΏΡ LAMP ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½Ρ Π½Π° ΡΠΈΡΡΠ½ΠΊΠ΅. Π LAMP-ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ°ΡΡ ΡΡΠΈ ΡΡΠ°ΠΏΠ°:
- 1) ΡΡΠ°ΠΏ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π° Π½Π°ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Π° (starting material producing step);
- 2) ΡΡΠ°ΠΏ ΡΠΈΠΊΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ (cycling amplification step);
- 3) ΡΡΠ°ΠΏ ΡΠ»ΠΎΠ½Π³Π°ΡΠΈΠΈ ΠΈ ΡΠ΅ΡΠΈΠΊΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ (elongation and recycling step).
Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΊΠ°Π΅Ρ Π² ΠΈΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ , ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π·Π° ΡΡΠ΅Ρ ΠΈΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ. Π‘Π°ΠΌΠ° ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ ΠΈΠ½ΠΈΡΠΈΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΠΈΠΌΠΈ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°ΠΌΠΈ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΌΠΈ ΡΠΌΡΡΠ»ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΈ Π±Π΅ΡΡΠΌΡΡΠ»Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΠΠ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ. ΠΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ 60 Β°C F2 ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½Π΅Π³ΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉ-ΠΌΠ΅ΡΠ° FIP Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ, ΠΈ ΡΠ΅ΠΏΡ Π΄ΠΎΡΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ. ΠΠ°ΡΠ΅ΠΌ Π²Π½Π΅ΡΠ½ΠΈΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ F3 ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΊ F3Ρ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ, ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° Π΄ΠΎΡΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°Π΅Ρ ΡΠ΅ΠΏΡ, ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ ΡΠΌΠ΅ΡΠ°Ρ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΡΠΎ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ. Π‘ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡ ΡΠΎΡΠΌΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΏΠ΅ΡΠ»Π΅ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π½ΡΠ΅ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ Π½Π° 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅, ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ F1c ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ F1 ΡΠ΅Π³ΠΈΠΎΠ½ΠΎΠΌ. ΠΠ° 3'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡΡΡ Ρ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ, ΠΈ Π² ΠΈΡΠΎΠ³Π΅ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π½ΠΎΠ²Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡ Ρ ΠΏΠ΅ΡΠ»Π΅ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π½ΡΠΌΠΈ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΌΠΈ Π½Π° ΠΎΠ±ΠΎΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Ρ . Π‘ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ, ΠΏΠΎΡ ΠΎΠΆΠ΅ΠΉ Π½Π° Π³Π°Π½ΡΠ΅Π»Ρ ΠΠΠ Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°Π΅ΡΡΡ Π²ΡΠΎΡΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΠΏ — ΡΠΈΠΊΠ» ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. Π¦Π΅ΠΏΠΈ Ρ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΈΠ½Π²Π΅ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΡΡΠΈΠΌΠΈΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ ΠΠΠ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π±Π»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΠΌ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΠ² Π΄ΠΎΡΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ [3].
ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½Π°Ρ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠ° ΠΏΠ΅ΡΠ»Π΅Π²Π°Ρ ΠΈΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ.
Π¦ΠΈΠΊΠ» ΠΏΡΠΎΠ΄ΠΎΠ»ΠΆΠ°Π΅ΡΡΡ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 1 ΡΠ°ΡΠ° ΠΈ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ 109 ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ ΠΠΠ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ. ΠΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΡΠΉ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΈ ΠΠΠ Ρ ΠΏΠ΅ΡΠ»ΡΠΌΠΈ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ, ΡΠΎΡΡΠΎΡΡΠΈΠ΅ ΠΈΠ· Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π²Π΅ΡΠ½ΡΡΡΡ , ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΡΡΠΈΡ ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΠΎΡΠΈΠ³ΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΠΠ-ΡΠ°Π±Π»ΠΎΠ½Π° (ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ° ΠΏΠΎΡ ΠΎΠΆΠ° Π½Π° ΡΠ²Π΅ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠ°ΠΏΡΡΡΡ).
ΠΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. ΠΠ»Ρ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ° LAMP-ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ². Π§Π°ΡΠ΅ Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠΠ³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΡΠΉ Π³Π΅Π»Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±Π°ΡΡΠ²Π°ΡΡ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠΌΠΈ, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΡΠΌ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΈΠ»ΠΈ SYBR Green I. Π’Π°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΡΠΉ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ Ρ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡΠΈΡΠ»Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠ»ΡΠΌΠΈ ΠΠΠ, ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ Ρ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ ΠΠΠ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π² Π·Π°Π³ΡΡΠ·ΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ Π»ΡΠ½ΠΊΠ΅, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π²ΡΠ³Π»ΡΠ΄ΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΌΠ°Π·ΠΎΠΊ Π½Π° Π²Π΅ΡΡ ΡΡΠΊΠ΅ ΠΏΠ΅ΡΠ»ΠΈ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π³Π΅Π»Ρ. LAMP ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΡΠ΅Π·Π²ΡΡΠ°ΠΉΠ½ΠΎ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΠΠ. ΠΠΎΠ±Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ SYBR Green I Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΡ Π΄Π°Π΅Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠ±ΠΎΡΠ° Π΄Π»Ρ Π£Π€ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π΅ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΡ Π² ΡΠ²Π΅ΡΠ΅ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ°ΡΡΠΈΡ ΡΠ²Π΅Ρ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΊΡΠΎΠ². ΠΠ°Π½Π½ΡΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π½ Π΄Π»Ρ ΠΏΠΎΠ»Π΅Π²ΡΡ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π΅Π½ΠΈΠΉ, Π³Π΄Π΅ Π»ΠΈΠΌΠΈΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠΌ ΡΠ°ΠΊΡΠΎΡΠΎΠΌ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠΡΡΠ³ΠΎΠΉ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠΌΠ°ΡΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΏΠΎΠ±ΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ. Π LAMP-ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΏΠΎΠ±ΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ², ΠΈΠΎΠ½ΠΎΠ² ΠΏΠΈΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ°, ΠΎΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π±Π΅Π»ΡΠΉ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΎΠΊ ΠΏΠΈΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ° ΠΌΠ°Π³Π½ΠΈΡ. ΠΠΎΡΡΠΎΠΌΡ, ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΡ ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠ°, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ·Π½Π°ΡΡ, Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»Π°ΡΡ Π»ΠΈ ΠΠΠ. Π’Π°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ Π² Ρ ΠΎΠ΄Π΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠ»ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ°, Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π΅Ρ ΠΎΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Π½ΠΈΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΎΡΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡ [4].
Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, Π½Π°ΠΌΠΈ Π±ΡΠ»ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠΌΠΎΡΡΠ΅Π½Ρ ΡΠ°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² LAMP, ΠΊΠ°ΠΊ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· + ΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π±ΡΠΎΠΌΠΈΠ΄ΠΎΠΌ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΡ/Π½ΠΈΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ ΡΠ΅ΡΠ΅Π±ΡΠ°; ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡ Π² ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΌΠΈ Π°Π³Π΅Π½ΡΠ°ΠΌΠΈ (SybrGreen, PicoGreen, Yo-Pro-Iodide, PicoGreen) — Optigene ΠΈ ΡΡΡΠ±ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ — ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π½Π΅ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΈΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΈΡΠΎ-ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ°, ΡΡΡΠ±ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡ + ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ Calcein/Naphtol Blue Ρ ΠΏΠΈΡΠΎΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠΌ ΠΌΠ°Π³Π½ΠΈΡ — Eiken. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ BART — ΡΡΡΠ±ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡ + Π»ΡΠΌΠΈΠ½Π΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ — 3 Π, ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ², ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠ½-Π‘Π’Π -ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Ρ Nanogold-ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ°ΠΌΠΈ, Surface Plasmon Resonance, ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎ-ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ.
ΠΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π° LAMP-ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°
- 1. ΠΡΠΎΡΡΠΎΡΠ°. ΠΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΡΡΠ°ΠΏ, Π»Π΅Π³ΠΊΠΎ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ.
- 2. Π‘ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ. ΠΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ ΡΠΆΠ΅ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· 15−60 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ.
- 3. Π‘ΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ. ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ 4 ΠΈΠ»ΠΈ 6 ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΎΠ½ΠΈ ΡΠ·Π½Π°ΡΡ 6 ΠΈΠ»ΠΈ 8 ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Π΅ΠΉ. ΠΠ½ΠΎΠ³ΠΈΠ΅ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΠΈ ΡΠΎΠΎΠ±ΡΠ°ΡΡ ΠΎ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈLAMP Π΄ΠΎ 6 ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ ΠΈΡΠΊΠΎΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π³Π΅Π½Π°, ΡΡΠΎ Π² 10 ΡΠ°Π· ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°Π΅Ρ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠ¦Π .
- 4. ΠΠΊΠΎΠ½ΠΎΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ. ΠΠ΅ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ Π΄ΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΡΡΠΎΡΡΠΈΡ ΡΠ΅Π°Π³Π΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΈ ΠΎΠ±ΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ.
- 5. ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ². Π ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 15−60 ΠΌΠΈΠ½ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ 109-1010ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ ΠΠΠ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ.
- 6. ΠΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ Π ΠΠ. ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΠΏΠΎΠ΄Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π΄Π»Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π ΠΠ ΠΏΡΠΈ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠ°Π·Ρ [5].
Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Ρ ΠΈ ΠΎΠ±ΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»Ρ LAMP
ΠΠ»Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ Bst-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠΉ ΡΡΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΠ΅ΠΉ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ Bacillus stearothermophilus (Eiken, NEB, 3M). ΠΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ° Π΄Π»Ρ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° 60−65Β°Π‘. ΠΠ°Π½Π½Π°Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½Π° ΠΊ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ, ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ Π² Π½Π΅ΠΉ ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΡΡΡ 4−6 ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ², Π½Π°ΡΠ΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ Π½Π° ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΠ΅ Π΅Π΅ Π·Π²Π΅Π½ΡΡ. Π’Π°ΠΊ ΠΆΠ΅ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ Π΄Π»Ρ Π»ΡΠ±ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ, Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Ρ Π±ΡΡΡ ΠΠΠ-ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ° ΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡΠ΅ Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π±ΡΡΠ΅Ρ, Π±Π΅ΡΠ°ΠΈΠ½, ΡΡΠ»ΡΡΠ°Ρ ΠΌΠ°Π³Π½ΠΈΡ.
ΠΠ»Ρ ΠΏΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠΈ LAMP ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠΈΠ±ΠΎΡΡ Π½Π° Π±Π°Π·Π΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΠ±Π»ΠΎΠΊΠ° (Π½Π΅ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΡΠΈΠΊΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ) ΠΈΠ»ΠΈ Π²ΠΎΠ΄ΡΠ½ΡΡ Π±Π°Π½Ρ, Π³ΡΠ°Π΄ΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠ²ΠΎΠ»Π½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΏΠ΅ΡΡ. ΠΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ Π΄ΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΡΡΠΎΡΡΠΈΡ Π°ΠΏΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ² ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π΄ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°.
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ LAMP Π΄Π»Ρ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΉ
Π₯ΠΎΡΡ LAMP Π±ΡΠ» ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π½ Π² 2000 Π³., Π΅Π³ΠΎ ΠΏΠΎΠΏΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΡΠ°Π»Π° ΡΠ°ΡΡΠΈ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠΈΡΠΎΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π²ΠΈΡΡΡΠΎΠ² Π»ΠΈΡ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠΈ ΠΠ°ΠΏΠ°Π΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΠΈΠ»Π° ΠΈ ΡΡΠΆΠ΅Π»ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΏΠΈΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌΠ° (Π’ΠΠ Π‘).
ΠΠ° ΡΠ΅Π³ΠΎΠ΄Π½ΡΡΠ½ΠΈΠΉ Π΄Π΅Π½Ρ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠ΄ΠΈΡΠ΅Π»ΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΈΡ Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΡΡ Π·Π°Π±ΠΎΠ»Π΅Π²Π°Π½ΠΈΠΉ, ΠΊΠ°ΠΊ Π»ΠΈΡ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠ° Π΄Π΅Π½Π³Π΅ [6], ΡΠΏΠΎΠ½ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΠ½ΡΠ΅ΡΠ°Π»ΠΈΡ [7], ΡΠΈΠΊΡΠ½Π³ΡΠ½ΡΡ [8] (ΡΡΠΎΠΏΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΠΊΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π°Ρ Π»ΠΈΡ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠ°), Π»ΠΈΡ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠ° ΠΠ°ΠΏΠ°Π΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΠΈΠ»Π° [9], ΡΡΠΆΠ΅Π»ΡΠΉ ΠΎΡΡΡΡΠΉ ΡΠ΅ΡΠΏΠΈΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΡΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌ — Π’ΠΠ Π‘ [10], Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΠΉ «ΠΏΡΠΈΡΠΈΠΉ Π³ΡΠΈΠΏΠΏ» (H5N1) [11].
ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ LAMP ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΉ. Π Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΊΠΎΠΌΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΡΠ΅ΡΡ-ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ Π΄Π»Ρ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΡ Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠ΄ΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ: Salmonella, Legionella, Listeria, Esherichia coli, ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΡΠΈΡΡΡΡΠ°Ρ Π²Π΅ΡΠΎΡΠΎΠΊΡΠΈΠ½, Campylobacter. Π ΡΠ°Π±Π»ΠΈΡΠ΅ 1 ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ ΡΠΏΠΈΡΠΎΠΊ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½ΠΎΠ², Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ LAMP, Ρ ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΡΠ΅Π½ΡΡ , ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π²ΡΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΡ ΠΈΡ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ [2].
Π Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½ΠΎΠ² Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ»Π΅Π²ΠΎΠΉ ΠΈΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. ΠΠ΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΠΈ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π»ΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΡΡ-ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ Π±ΡΡΡΡΠΎ ΠΈ Π»Π΅Π³ΠΊΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΡΡ Π²ΠΈΠ΄ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ (ΡΠ°Π±Π».2). ΠΡΠΈ Π½Π°Π±ΠΎΡΡ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Ρ Π±ΡΡΠ΅Ρ, Π±Π΅ΡΠ°ΠΈΠ½, Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ, ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ, Bst-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ, MgSO4 Π² ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡΡ . ΠΠΎΡΠΎΠ²ΡΠ΅ Π½Π°Π±ΠΎΡΡ Π΄Π»Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ M. tuberculosis, Campylobacter spp ΠΈ Ρ. Π΄. ΠΊΠΎΠΌΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°Π½ΠΈΠ΅ΠΉ Eiken (Eiken Chemical Co., Ltd) [2].
Π‘ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° LAMP Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΡΡΡΡΡΡ Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈ Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½Ρ, Π½ΠΎ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ, Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΡΠ΅ΠΉΡΠΈΠΌΠΈ. ΠΠ΄Π½ΠΈΠΌ ΠΈΠ· ΡΠ°ΠΊΠΈΡ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½ΠΎΠ² ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΌΠ°Π»ΡΡΠΈΠΉΠ½ΡΠΉ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΠΉ. Π’Π°ΠΊ, Birgit Poschl ΠΈ Π΅Π³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»Π»Π΅Π³ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π»ΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΡ ΡΡΠ΅Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ Π΄Π»Ρ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠ΄ΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ ΠΌΠ°Π»ΡΡΠΈΠΈ: ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΈΡ, Π²Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½Π°Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΠ½Π°Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ (nPCR) ΠΈ LAMP. Π‘ ΡΡΠΎΠΉ ΡΠ΅Π»ΡΡ Π² 105 ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°Ρ ΠΊΡΠΎΠ²ΠΈ ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°, ΡΠΎΠ±ΡΠ°Π½Π½ΡΡ Π² Π‘Π΅Π²Π΅ΡΠ½ΠΎΠΌ Π’Π°ΠΈΠ»Π°Π½Π΄Π΅, ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ»ΠΈ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ Plasmodium falciparum ΠΈ Plasmodium vivax. ΠΠ±ΡΠ΅Π΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ² Plasmodium falciparum ΡΠΎΡΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΠΎ 57 (54%), Π° Plasmodium vivax — 25 (24%). Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΡΡΠ°Π»ΠΎΠ½Π° Π΄Π»Ρ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π±ΡΠ» ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ nPCR. Π§ΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ LAMP Π΄Π»Ρ Plasmodium falciparum ΡΠΎΡΡΠ°Π²ΠΈΠ»Π° 100%. ΠΡΠ΅ nPCR-ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Π΄Π»Ρ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠ΄ΠΈΡΠ΅Π»Ρ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΏΡΠΈ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°ΠΌΠΈ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ ΠΈ LAMP (ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ 100%). ΠΠ»Ρ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ Plasmodium vivax ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½Ρ 15 ΠΈΠ· 23 nPCR-ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ² (ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ 65%), ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ LAMP — 22 ΠΈΠ· 23 (ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ 96%). ΠΠ· 82 nPCR-ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΈΡ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ»Π° Π΄Π²Π° ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ° (ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ 98%). ΠΡΠ΅ 82 nPCR-ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ LAMP (ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ 100%). ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠΎΠ΄ΠΎΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΡ , ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π²ΠΈΠ΄ΠΎΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΡ Π½Π°Π±ΠΎΡΠΎΠ² ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Π΄Π»Ρ LAMP Π΄Π°Π²Π°Π»ΠΎ ΠΎΠ΄Π½ΠΈ ΠΈ ΡΠ΅ ΠΆΠ΅ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ Π²ΠΎ Π²ΡΠ΅Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°Ρ . Π‘Π»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ, Π΄Π»Ρ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ Π²ΠΈΠ΄ΠΎΠ² Plasmodium Π² ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°Ρ ΠΊΡΠΎΠ²ΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠΏΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° LAMP ΡΠ°ΠΊ ΠΆΠ΅ ΠΎΠΏΡΠ°Π²Π΄Π°Π½Π½ΠΎ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ nPCR. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΠΎΠ½ Π½Π°Π΄Π΅ΠΆΠ½Π΅Π΅, ΡΠ΅ΠΌ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΈΡ [5].
Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, Π½Π°ΠΌΠΈ Π±ΡΠ»ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠΌΠΎΡΡΠ΅Π½Ρ ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ, ΡΡΠ°ΠΏΡ ΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΡ Π½ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ — ΠΏΠ΅ΡΠ»Π΅Π²ΠΎΠΉ ΠΈΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. ΠΡΠ»ΠΎ Π²ΡΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΡΠ΄ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ² ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠΌΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°ΠΌΠΈ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ. Π’Π°ΠΊΠΆΠ΅ Π±ΡΠ» ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ ΠΊΡΠ°ΡΠΊΠΈΠΉ ΠΎΠ±Π·ΠΎΡ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΏΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ LAMP Π² Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠ΅ Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΡΡ , Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΉ ΠΈ Π·Π°Π±ΠΎΠ»Π΅Π²Π°Π½ΠΈΠΉ ΠΏΡΠΎΡΠΎΠ·ΠΎΠΉΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ. ΠΠ· Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π²ΡΡΠ΅ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π²ΡΠ²ΠΎΠ΄ ΠΎ ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠ»Π΅Π²Π°Ρ ΠΈΠ·ΠΎΡΠ΅ΡΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠ΅ΡΡΠΏΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΈ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅Ρ Π΄Π°Π»ΡΠ½Π΅ΠΉΡΠΈΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ ΠΏΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π΅Π³ΠΎ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π² ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΠΠ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½ΠΎΠ².
- 1. Notomi T., Okayama H., Masubuchi H., Yonekawa T., Watanabe K., Amino N., Hase T. Loop-Mediated Isothermal Amplification Of DNA // Nucleic Acids Re — 2000. — Vol.28, No.12. — P. E63.
- 2. Saharan P., Dhingolia S., Khatri P., Duhan J.S., Gahlavat S.K. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) based detection of bacteria: Review // African Journal of Biotechnology. — 2014. — 13. — P. 1920;1928.
- 3. Lei Yan, Jie Zhou, Yue Zheng, Adam S. Gamson, Benjamin T. Roembke, Nakayama S., Herman O. Sintim. Isothermal amplified detection of DNA and RNA // Mol. BioSyst. — No.10. — P.970−1003.
- 4. http://aquavitro.org/2013/06/13/sredstva-diagnostiki-zabolevanij-ryb-molekulyarnaya-diagnostika/
- 5. Pdschl B., Waneesorn J., Thekisoe O., Chutipongvivate S., Karanis P. comparative diagnosis of malaria infections by microscopy, nested PCR, and LAMP in northern Thailand // TropMedHyg. — 2010. — 56−60. http://www.ncbi. nlm. nih.gov/pmc/articles/PMC2912576/
- 6. Parida M., Horioke, Ishida H., Dash P.K., Saxena P., Jana A.M., Islam M.A., Inoue S., Hosaka N., Morita K. Rapid detection and differentiation of dengue virus serotypes by a real-time reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification assay // J. Clin. Microbiol. — 2005. — Vol.43. — P.2895−2903.
- 7. Parida M.M., Santhosh S. R., Dash P.K., Tripathi N.K., Saxena P., Ambuj S., Sahni A.K., Lakshmana Rao P.V., Morita K. Development and evaluation of reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification assay for rapid and real-time detection of Japanese encephalitis virus // Journal of Clinical Microbiology. — 2006. — 44. — P.4172−4178.
- 8. Parida M.M., Santhosh S.R., Dash P.K., Tripathi N.K., Lakshmi V., Mamidi N., Shrivastva A., Gupta N., Saxena P., Babu J.P., Rao P.V.L., Morita K. Rapid and Real-Time Detection of Chikungunya Virus by ReverseTranscription Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay // Journal of Clinical Microbiology. — 2007. — 45. — P.351−357.
- 9. Parida M., Posadas G., Inoue S., Hasebe F., Morita K. Real-Time Reverse Transcription Loop mediated isothermal amplification for rapid detection of West Nile Virus // Journal of Clinical Microbiology. — 2004. — 42. — P.257−263.
- 10. Hong T. C., Mai Q. L., Cuong D. V., Parida M., Minekawa H., Notomi T., Hasebe F., Morita K. Development and evaluation of a novel loop-mediated isothermal amplification method for rapid detection of severe acute respiratory syndrome coronavirus // Journal of Clinical Microbiology. — 2004. — 42. — P. 1956;1961.
- 11. Imai M., Ninomiya A., Minekawa H., Notomi T., Ishizaki T., Tu P. V., Tien N. T. K., Tashiro M., Odagiri T. Rapid diagnosis of H5N1 avian influenza virus infection by newly developed influenza H5 hemagglutinin gene-specific loop mediated isothermal amplification method // Virol. Methods. — 2007. — 141. — P.173−180.