ПЦР в режиме реального времени

Метод, который используется для определения концентрации ДНК.

В данном методе реализованы общие принципы ПЦР. Основное отличие состоит в том, что при проведении Real-Time ПЦР одновременно происходят амплификация, детекция и количественное определение специфической последовательности ДНК в образце. Также отличительными чертами данного метода являются отсутствие стадии электрофореза, менее строгие требования к организации ПЦР-лаборатории и автоматические регистрация и интерпретация полученных результатов.

Измерение происходит в реальном времени после каждого цикла амплификации. Можно определять непосредственно количество копий ДНК, либо количество копий относительно внесенной ДНК или дополнительных калибровочных генов.

Для детекции продуктов амплификации в режиме реального времени применяются следующие наиболее распространенные подходы: 1) использование модифицированных олигонуклеотидов (зондов), которые флуоресцируют после гибридизации с комплементарными участками ДНК [TaqMan-зонды (данная методика основана на использовании 5'-экзонуклеазной активности полимеразы; 2) использование флуоресцентных красителей, интеркалирующих в двухцепочечные молекулы ДНК и 3) использование двух зондов с резонансным переносом.

полимеразный амплификация секвенирование вырусный.