Проведение методики оценки задержки клеточного цикла лимфоцитов периферической крови методом проточной цитометрии

Выделение лимфоцитов периферической крови человека на градиенте фиколл-урографин

В стерильную центрифужную пробирку вносят 1 мл стерильного раствора фиколл-урографина. Кровь в шприце хорошо перемешивают и наслаивают по стенке 4 мл крови. Центрифугируют 25 минут со скоростью 1500 оборотов в минуту при комнатной температуре.

Аккуратно забирают кольцо лимфоцитов с частью плазмы и помещают в чистую стерильную пробирку. Проводят 3-кратную отмывку средой Хенкса (199).

Культивирование лимфоцитов периферической крови человека

Приготовление культуральной среды: подписывают бакпечатки, вскрывают их. Вносят стерильным шприцом в каждую бакпечатку 4 мл среды RPMI, 0.5 мл эмбриональной телячьей сыворотки и 130 мкл ФГА наконечником. Аккуратно перемешивают.

Выделенную клеточную суспензию хорошо перемешивают и равномерно разделяют на две части.

Клеточную суспензию, предназначенную для оценки спонтанного уровня клеток, фиксируют не позднее 30 минут.

Клеточную суспензию, предназначенную для оценки уровня клеток после стимуляции клеток к делению, инкубируют в бакпечатках 42 часа в термостате при температуре +37°C.