1. ΠΡΡΠΌΠΎΠ΅ (ΠΌΠ°Π»ΠΎΡΠ³Π»ΠΎΠ²ΠΎΠ΅) ΡΠ²Π΅ΡΠΎΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΈΠ΅.
ΠΠ΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΎΡ ΠΏΡΡΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ²Π΅ΡΠΎΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΈΡ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅ΡΡΡ ΠΏΠΎ Ρ
ΠΎΠ΄Ρ Π»Π°Π·Π΅ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π»ΡΡΠ° Π·Π° ΠΏΡΠΎΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅ΠΉΠΊΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΈΠ·Π»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π»Π°Π·Π΅ΡΠ°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ΄ ΡΠ³Π»Π°ΠΌΠΈ 2−19 Π³ΡΠ°Π΄ΡΡΠΎΠ². ΠΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠ΄ ΠΌΠ°Π»ΡΠΌ ΡΠ³Π»ΠΎΠΌ ΡΠ²Π΅ΡΠ° ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½Π° ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ. ΠΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΊΡΡΠΏΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΠ²Π΅Ρ ΡΠΈΠ»ΡΠ½Π΅Π΅ ΠΌΠ΅Π»ΠΊΠΈΡ
.
2. ΠΠΎΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ΅ ΡΠ²Π΅ΡΠΎΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΈΠ΅.
ΠΠ½ΡΡΡΠ΅Π½Π½Π΅Π΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΠΌΠΎΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΠΎΠΏΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π½Π΅ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΠΎ. ΠΡΡ Π»Π°Π·Π΅ΡΠ°, ΠΏΡΠΎΡ
ΠΎΠ΄Ρ ΡΠΊΠ²ΠΎΠ·Ρ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ, ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π»ΠΎΠΌΠ»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π²ΠΎ Π²ΡΠ΅ ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Ρ. Π Π΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ·Π»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΡΡΠ΄ΠΈΡΡ ΠΎ ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½Π΅Π³ΠΎ ΡΡΡΠΎΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ (ΡΠΎΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΄ΡΠΎ-ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°, Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ Π³ΡΠ°Π½ΡΠ», Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ
Π²Π½ΡΡΡΠΈΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΡΡ
Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ). ΠΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°ΡΠΈΡ Π±ΠΎΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈ ΠΏΡΡΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ²Π΅ΡΠΎΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΡΡΠ΄ΠΈΡΡ ΠΎ ΠΌΠΎΡΡΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ Π² ΡΠ΅Π»ΠΎΠΌ, Π²ΡΠ΄Π΅Π»ΡΡΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠΏΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ (Π»ΠΈΠΌΡΠΎΡΠΈΡΡ, ΠΌΠΎΠ½ΠΎΡΠΈΡΡ, Π³ΡΠ°Π½ΡΠ»ΠΎΡΠΈΡΡ) Π΄Π»Ρ Π΄Π°Π»ΡΠ½Π΅ΠΉΡΠ΅Π³ΠΎ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°.
3. Π Π΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ.
Π‘ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° Π΄Π»Ρ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠ²Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΡ
ΠΌΠ΅ΡΠΎΠΊ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° ΡΠ²Π΅ΡΠΎΡΠΈΠ»ΡΡΡΠΎΠ² ΠΈ ΡΠΎΡΠΎΡΠΌΠ½ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ, ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΠΈΠ· ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ
ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΈΠ·Π»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π² Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ Π΄Π»ΠΈΠ½ Π²ΠΎΠ»Π½, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ
ΡΠ»ΡΠΎΡΠΎΡ
ΡΠΎΠΌΡ. ΠΡΠ±ΠΎΡ ΡΠΈΠΏΠ° ΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΡ
ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π·Π°Π΄Π°ΡΠ΅ΠΉ Π΄Π»Ρ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ. ΠΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΠΌΠΈ ΡΠΈΠΏΠ°ΠΌΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΈΡ
ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΊΠ»ΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ (FITC, PE, APC, PerCP ΠΈ Π΄Ρ.) Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Π½ΡΡ
ΠΈ ΡΠΈΡΠΎΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ
Π°Π½ΡΠΈΠ³Π΅Π½ΠΎΠ² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ, ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΠΈ, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ ΠΆΠΈΠ·Π½Π΅ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ (7AAD, PI) ΡΠ»ΡΠΎΡΠΎΡΠΎΡΡ, ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΠΈΠ΅ΡΡ Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠΌΠΈ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ (DAPI, Hoechst), pH-ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠΎΡΠΎΡΡ (Fluo-3), ΠΈΠΎΠ½-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠΎΡΠΎΡΡ (Indo-1).
4. Π‘ΠΎΡΡΠΈΡΠΎΠ²ΠΊΠ° ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ.
Π ΠΏΡΠΎΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠΈΡΠΎΠΌΠ΅ΡΡΠ΅, ΠΎΠ±ΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ Π΄Π»Ρ ΡΠΎΡΡΠΈΡΠΎΠ²ΠΊΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ, ΠΏΡΠΎΡΠΎΡΠ½Π°Ρ ΡΡΠ΅ΠΉΠΊΠ° Π·Π°ΠΊΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½Π° Π½Π° ΠΏΡΠ΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΡΠ°Π»Π»Π΅. ΠΡΠΈ ΠΏΠΎΠ΄Π°ΡΠ΅ Π½Π° Π½Π΅Π³ΠΎ Π½Π°ΠΏΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΡΠΈΡΡΠ°Π»Π» Π²ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ Ρ ΡΡΠ΅ΠΉΠΊΠΎΠΉ ΡΠΎΠ²Π΅ΡΡΠ°Π΅Ρ ΠΊΠΎΠ»Π΅Π±Π°Π½ΠΈΡ Ρ Π·Π°Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΎΡΠΎΠΉ, Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΡΡΡΡ ΠΆΠΈΠ΄ΠΊΠΎΡΡΠΈ Ρ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΡΠ°Π·Π±ΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π° ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠ°ΠΏΠ»ΠΈ. ΠΡΠΎΡ
ΠΎΠ΄Ρ ΡΠΊΠ²ΠΎΠ·Ρ Π·Π°ΡΡΠΆΠ°ΡΡΠ΅Π΅ ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠΎ, ΠΊΠ°ΠΏΠ»Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈΠΎΠ±ΡΠ΅ΡΠ°ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π·Π°ΡΡΠ΄ Π² Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΠΎΡ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΠΊΠ°ΠΊΠ°Ρ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ° ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡΡΡ Π²Π½ΡΡΡΠΈ ΠΊΠ°ΠΏΠ»ΠΈ. ΠΡΠΎΠ»Π΅ΡΠ°Ρ ΠΌΠΈΠΌΠΎ ΠΎΡΠΊΠ»ΠΎΠ½ΡΡΡΠΈΡ
ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠ½ ΠΊΠ°ΠΏΠ»Ρ Ρ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΏΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΠΊ Π½ΠΈΠΌ, Π²ΡΡ
ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΈΠ· ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΡΠΎΠΊΠ° ΠΈ ΠΏΠΎΠΏΠ°Π΄Π°Π΅Ρ Π² ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΡ.