Введение. 
Выделение ДНК из листьев Vitis Vinifera L

Виноградное растение является одним из наиболее привлекательных объектов с точки зрения изучения генетики [16]. Одним из условий его использования для молекулярных исследований является экстрагирование ДНК.

Общей проблемой высших растений при выделении ДНК являются загрязняющие вещества, у винограда — это присутствие повышенного содержания полисахаридов [13, 15, 25] и полифенолов [9, 10, 20, 21]. В процессе экстрагирования ДНК образуется коллоидная гиалосома, которая практически не растворима в водной среде или TE-буфере (10 мМ Tris-HCl, pH 7.5, 1 мМ EDTA).

В дальнейшей работе это влияет на использование ДНК в исследованиях путем угнетения энзимной активности реакции [8]. Также ДНК из выделенных образцов становится не стабильной для длительного хранения [23, 33].

В настоящее время опробовано несколько протоколов по выделению ДНК и удалению полисахаридов из разнообразных источников [3, 7, 11, 14, 18, 22, 25, 26, 27, 30, 31, 32, 33, 34, 40].

Однако, у плодово-ягодных культур, содержащих высокий уровень полисахаридов, таких как рода Vitis, существующие протоколы имеют некоторые ограничения, поэтому их можно использовать при определенных условиях и данная ДНК не всегда амплифицируема в методах полимеразной цепной реакции, секвенирования и других манипуляциях. Присутствие различных ингибиторов в растворе вызывает угнетение ДНК-полимеразной активности [5].

Большинство методов экстрагирования ДНК оптимизированы для простоты и скорости, в то время как другие приспособлены к качественному и количественному анализу. Каждая техника применяется в различных исследованиях и к различным организмам. Поэтому важно проверять и приспосабливать методы экстрагирования для нужд исследователя.

В настоящее время активно используют для выделения ДНК из растений методы с раствором мелкодисперсного оксида кремния «силики» при выделении из агарозных гелей [6, 39], микроорганизмов [2, 24], почв [28, 38] и некоторых эукариот [4, 19, 37].

Эти методы продемонстрировали, что ДНК, выделенная с использованием раствора оксида кремния, может быть использована для проведения ПЦР реакции [17, 38] и других манипуляций с ДНК [37].

В данной работе приводятся усовершенствованные протоколы, комбинирующие различные аспекты обоих предыдущих методов экстракции, а именно методов с использованием раствора СТАБ (цетилтриметиламониум бромид) и с раствором сорбента оксида кремния.

Данное исследование показывает, что извлечение ДНК не всегда является простым и рутинным делом, и что опубликованные протоколы не обязательно являются воспроизводимыми для всех видов растений [29, 35].

Цель исследования — оценка разнообразных методов выделения ДНК, экстрагированной из разных материалов и определение ее качества для молекулярно-генетических исследований винограда.

Задачами являлось определить, какой из трех общих методов выделения ДНК (СИЛИКА-МЕТОД № 1, СИЛИКА-МЕТОД № 2 и SDS-МЕТОД), позволяет выделять ДНК из виноградных листьев и какая стадия развития виноградного растения является наиболее пригодной для их сбора.