Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Экспериментальная разработка и клиническое применение ксеногенной трансплантации клеток лейдига для лечения тестостерондефицитных состояний у мужчин

Диссертация: Экспериментальная разработка и клиническое применение ксеногенной трансплантации клеток лейдига для лечения тестостерондефицитных состояний у мужчин
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Интерстициальные KJI семенников синтезируют андрогены, с чем связано их влияние на дифференцировку и функцию клеток мужской половой системы. Нарушение сперматогенеза, многие заболевания яичек и нарушение репродуктивной функции можно рассматривать как следствие нарушения активности KJI. Поэтому чрезвычайно актуальным является разработка методов культивирования и способов трансплантации KJI для… Читать ещё >

Экспериментальная разработка и клиническое применение ксеногенной трансплантации клеток лейдига для лечения тестостерондефицитных состояний у мужчин (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • Глава I. Обзор литературы
    • 1. 1. Функции клеток Лейдига
    • 1. 2. Регуляция функции клеток Лейдига
    • 1. 3. Клетки Лейдига in vitro
    • 1. 4. Лечение тестостерондефицитных состояний и бесплодия у мужчин
      • 1. 4. 1. Гормональная терапия
      • 1. 4. 2. Лечение тестерондефицитных состояний и бесплодия у мужчин методом трансплантации
  • Глава II. Материалы и методы исследования
    • 2. 1. Получение суспензии клеток тестикул для культивирования
    • 2. 2. Определение количества и жизнеспособности клеток
    • 2. 3. Получение очищенной фракции клеток Лейдига
    • 2. 4. Морфологическая идентификация клеток Лейдига
    • 2. 5. Культивирование клеток Лейдига
    • 2. 6. Оценка возможных контаминаций клеточных культур
    • 2. 7. Хранение клеток Лейдига
    • 2. 8. Использование замороженных клеточных культур
    • 2. 9. Трансплантация клеток Лейдига
    • 2. 10. Определение тестостерона в сыворотке крови
    • 2. 11. Обследование эякулята
  • Глава III. Результаты исследования и их обсуждение
    • 3. 1. Оптимизация условий культивирования и хранения клеток Лейдига
    • 3. 2. Ксенотрансплантация клеток Лейдига экспериментальным животным
    • 3. 3. Применение ксеногеной трансплантации клеток Лейдига для лечения тестостерондефицитных состояний у мужчин
      • 3. 3. 1. Лечение мужчин, страдающих эректильной дисфункцией и бесплодием
      • 3. 3. 2. Лечение мужчин, страдающих хроническим простатитом
  • Выводы

Спектр нарушений мужской половой системы включает в основном крипторхизм, миоплазию полового члена, гипоплазию и аплазию семенных пузырьков, предстательной железы, монои анорхизм, различные варианты гипоспадии. Пороки развития мужской половой системы сопровождаются тестостерондефицитными состояниями (ТДС) и приводят к бесплодию. Наряду с пороками развития инфертильное состояние мужчин связано с воспалительными заболеваниями половых органов, влиянием вредных факторов внешней среды, аллергическими заболеваниями, бесконтрольным и широким применением лекарственных средств, злоупотреблением алкоголем и никотином и пр. Бесплодие является одной из ключевых проблем андрологии. Проблема мужского бесплодия приобретает в последние годы особую медицинскую и социальную значимость, так как удельный вес бесплодных браков в мире достигает 15%, половина из которых обусловлена бесплодием у мужчин [39].

Полиэтилогичность ТДС и мужского бесплодия, сложность развития заболеваний, функциональная взаимосвязь мужских гонад со всеми системами и органами создают большие трудности в разработке адекватных методов лечения нарушений сперматогенеза.

С давних пор пытаются лечить ТДС и бесплодие у мужчин пересадкой мужской половой железы [6, 17, 18, 31, 43, 81]. В настоящее время вместо пересадки целой железы начинают применять трансплантацию андрогенпродуцирующих клеток Лейдига (KJI) [21, 92, 19], что обусловлено прогрессом в изучении функций различных клеток семенников, успехами выделения и культивирования клеток. Кроме того, нарушения сложных молекулярных внутриклеточных и межклеточных взаимодействий лучше компенсируются клетками, чем отдельными фармпрепаратами.

Интерстициальные KJI семенников синтезируют андрогены, с чем связано их влияние на дифференцировку и функцию клеток мужской половой системы. Нарушение сперматогенеза, многие заболевания яичек и нарушение репродуктивной функции можно рассматривать как следствие нарушения активности KJI. Поэтому чрезвычайно актуальным является разработка методов культивирования и способов трансплантации KJI для лечения ТДС и бесплодия у мужчин.

Цели и задачи исследования. Целями настоящей работы было:

1. изучить возможность трансплантации без иммуносупрессорной терапии ксеногенных KJI экспериментальным животным;

2. разработать оптимальные методы трансплантации KJI;

3. изучить эффективность трансплантации для лечения ТДС у экспериментальных животных;

4. использовать полученные экспериментальные результаты для лечения мужчин, страдающих ТДС и бесплодием.

При этом поставлены следующие задачи исследования:

1. разработать методы забора и хранения трансплантируемого материала;

2. разработать способы хирургической трансплантации КЛ;

3. изучить условия культивирования и их влияние на биологическую активность KJI;

4. осуществить ксеногенную трансплантацию К Л экспериментальным животным;

5. осуществить наблюдение за эффективностью трансплантации;

6. осуществить трансплантацию KJI мужчинам, страдающим ТДС и бесплодием;

7. осуществить наблюдение за успешностью лечения мужчин с помощью трансплантации KJI.

выводы.

1. Разработаны способы выделения и культивирования жизнеспособных, активно пролиферирующих и синтезирующих тестостерон клеток Лейдига животных.

2. Установлено, что культивируемые и выделенные клетки Лейдига, пригодные для трансплантации, возможно подвергать криоконсервации.

3. Разработан метод трансплантации ксеногенных клеток Лейдига под белочную оболочку тестикул реципиентов.

4. Найдено, что ксенотрансплантация клеток Лейдига экспериментальным животным нормализует половую функцию реципиентов.

5. Проведено успешное лечение мужчин, страдающих тестостерондефицитным состоянием, с помощью ксеногенной трансплантации клеток Лейдига.

Показать весь текст

Список литературы

  1. А.В. Диагностика и лечение хронического уретропростатита, осложненного инфекциями урогенитального тракта. // Диссертация к.м.н. М. 1991.
  2. В.И. Пересадка яичка при первичном гипогинадизме. // Автореферат диссертации доктора медицинских наук. М., 1984.
  3. С.А. Пересадка семенных желез.- М.: Сабашкиновы, 1923.
  4. С.А. Старость и омоложение. М.:Л: Госиздат, 1927.
  5. Т.Е. Результаты гомотрансплантации желез внутренней секреции ва 30 лет // В кн. «Трансплантация органов и тканей» / Материалы 5-й Всесоюзной научной конференции по пересадке органов и тканей. Горький, 1970.-С. 168−169.
  6. Г. В., Романова A.M. Наш опыт пересадки желез внутренней секреции. // Вестник хирургии. 1961. — № 12. -С. 71−70.
  7. Гольдин Г. И.// Руссакая клиника. 1929. т. 59.- вып. 11. -С. 378−387.
  8. Д.JI. Определение оптимальных условий сохранности яичка при воздействии на него неспецифических и специфических факторов трансплантации. // В кн.: Материалы Всесоюзной конференции по пересадке органов и тканей. Киев. 1985. -С. 192−193.
  9. Гормонотерапия. / Под ред. Шамбаха X., Кнаппе Г., Карола В. М., «Медицина», 1988. — С. 116−127.
  10. И.Гоциридзе О. А. Реваскуляризация семенников в эксперименте. // В кн. Тезисы докладов Научно-исследовательского института физиологии и патологии женщины. Тбилиси, 1962. — С. 87.
  11. И.Гоциридзе О. А. Хирургические пути восстановления андрогенной и репродуктивной функции яичек. // Автореферат кандидатской диссертации. М., 1978.
  12. Е.С. Культивирование статическим методом стимулированных и не стимулированных тестостеронпродуцирующих интерстициальных клеток Лейдига. // Материалы научной конференции «Актуальные вопросы андрологии». М., 1999. — С. 31.
  13. Е.С. Культуральная аллотрансплантация неонатальных эндокриноцитов семенников. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. М, 1993.
  14. В.Т., Колпаков И. С., Робустов В. В. Пересадка яичка в мошонку. // В кн. «Трансплантация органов и тканей» / Материалы 5-й Всесоюзной научной конференции по пересадке органов и тканей. Горький/ -1970.-С. 170−171.
  15. И.Д. Вопросы андрологии и пересадка яичка. // В кн. Вопросы андрологии и пересадка яичка. -М., 1974.-С. 5−11.
  16. И.Д. Перцизионный паравазальный метод пересадки эндокринных клеток в мужскую половую железу. // Актуальные вопросы андрологии. / Материалы научно-практической конференции. 1999. — М.- С. 22.
  17. И. Д., Горбатюк В. Л. Хирургическая коррекция эндокринной импотенции. / М., 1986. С.9−11.
  18. И.Д., Дендеберов Е. С. Аллотрансплантация культивируемых неонатальных андрогенпродуцирующих клеток Лейдига. // Вест. Российской АМН. 1994.- № 4. -С. 42−46.
  19. И.Д., Дендеберов Е. С. Гипофизарно-тестикулярная регуляция при исследованиях in vitro. // Вопросы биол., мед. и фарм. химии. 2000.- № 3. — С.52−54.
  20. И. Д., Каитова З. С., Лысенко А. И. Пересадка клеток эндокринных органов при мужскомбесплодии. 11 В кн.: Актуальные вопросы андрологии. / Материалы научно-практической конференции. М., 1999. — С. 25−27.
  21. И.Д., Прошин А. З., Кулик В. П., Черкасова М. В. Новый способ пересадки кадавернозного яичка человеку на артерио-венозной ножке. // В кн.: Материалы 1-й научной конференции медицинского факультета УДН им. П. Лумумбы. М., 1967. — С. 11−12.
  22. Г. И., Слонимский Б. Ю. Опыт применения андриола и препарата тестостерона (сустанона-250) при андрогендефицитных состояниях. // Проблемы эндокринологии. 1996. — №. — С.30−32.
  23. Д.М. Семенники. // В кн.: Гормональная регуляция размножения у млекопитающих. / Под ред. К. Остина и 3. Шорта. М., «Мир», 1987. С. 100−117.
  24. Н.А., Даренков А. Т., Махлин Н. В. Новые лекарственные препараты, применяемые в андрологии. // Тезисы доклада симпозиума. М., 1979. — С.120−126.
  25. О. Б. Щепелев П.А., Нестеров С. Н., Абдулаев И. А. Диагностика и лечение эректильных дисфункций. // Анналы хирургии. 1998. — № 4. — С. 19−27.
  26. О.Б., Бажедомов В. А., Сухих Г. Т. Современная концепция лечения мужского иммунного бесплодия. //
  27. Н.С., Белоус A.M. Введение в криобиологию. // Киев: «Hayкова думка», 1975. 340 с.
  28. B.C., Сухих Г. Т. В кн. «Медицинская клеточная биология». //М., 1998. С. 8−32.
  29. К.В., Осадчук А. В., Свечникова И. Г., Ахмерова Л. Г., Соловьева Н. А. Преждевременное снижение эндокринной функции семенников у крыс с наследственной галактоземией. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1996. — № 9. -С. 318−320.
  30. .П. Роль клеток Лейдига в морфогенезе ВПР половой системы. // Тезисы I Белорусского съезда паталогоанатомов и судебных медиков 1−2 октября, 1990. г. Витебск-Минск, 1990. — ч.1, С. 174−175.
  31. Сухих Г. Т, Богданова И. М., Малайцев В. В., Фисенко А. П. Иммунологические аспекты трансплантации фетальных клеток. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1998. т. 126, приложение 1. — С. 178−181.
  32. Тер-Аванесов Г. В., Овсянникова Т. В., Фанченко Н. Д., Балика Ю. Д. Клиническое применение андриола вгормонотерапии мужского бесплодия. // Урология и нефрология/ 1997. — № 4, С. 29−32.
  33. Тер-Ованесов Г. В., Овсянникова Т. В., Фанченко Н. Д., Балика Ю. Д. Клиническое применение препарата андриол в терапии бесплодия. // Проблемы репродукции. 1995. -№ 4. — С. 43−47.
  34. О.Л., Михайличенко В. В. Андрология. // Москва, Медиа Пресс. 1999. — С. 372−382.
  35. Тиктинский O. JL, Новиков И. Ф., Михайличенко В. В. Заболевание половых органов у мужчин. // Ленинград, «Медицина», 1985. С. 247−258.
  36. Ткачу к В.Н., Горбачев А. Г., Агулянский Л. И. / Хронический простатит. Л., 1989. С. 5−14. С. 144−180.
  37. А., Хендлер X., Смит Э., Хилл Р., Лемган И. Основы биохимии. В 3-х томах. // Издательство «Мир». 1981. — т. З.-С. 1529−1702.
  38. А.Н., Бернигер Ю. В., Головин Г. В., Медведев П. М. Пересадка и замещение тканей и органов. // Л.: Медицина, 1960, 43 с.
  39. О.С. Эпидемиология и структура бесплодного брака в г. Томске. // Автореферат диссертации кандидата медицинских наук. Томск, 1995.
  40. А.А. Консервирование клеточных суспензий. / Киев: «Наукова думка», 1983. 240 с.
  41. X., Кроне X. Андрогены и анаболитические стероиды. // В кн.: Гормональная регуляция у млекопитающих. / Под. ред К. Остина и Шорта. М., «Мир», 1987.-С. 116−125.
  42. Эндокринология. / Под редакцией Н.Лавина. «Практика». -М., 1999. С.27−29.
  43. Antony F.F., Aruldhas М.М., Udhaya Kumar R.C., Maran R.R., Govindarajulu P. Inhibition of Leydig cells activity in vivo and in vitro in hypothyroid rats. // J. Endocrinol. 1995. Vol. 144,-N2.-P. 293−300.
  44. Apparailly F., Combarnous Y. Role of sialic acid residues in the in vitro superactivity of humsn choriogonadotropin (hCG) in rat Leydig cells. // Biochim. Biophys. Acta. 1994. — Vol. 1224.-N3.-P. 559−565.
  45. Berthold A.A. Transplantation der Hoden. // MuTler. Archiv. 1849.-P. 42−46.
  46. Bilinska В., Slomezynska M., Kmicikiewiez I. Immunocytochemical demonstration of androgen receptors in Leydig cells of the bank vole. // Acta Histochem. 1996. Vol. 98. -N2.-P. 157−164.
  47. Campbell’s Urology. 6-th Ed./Eds. P.C. Walsh, A.B. Retik, T.A. Stamey, E.D. Vanghau., Jr. Philadelphia. 1992.
  48. Campbell’s Urology. 6-th Ed./Eds. P.C. Walsh, A.B. Retik, T.A. Stamey, E.D. Vanghau., A. J. Wein Jr. Philadelphia. -1998.
  49. Chen H., Hardy M.P., Huhtaniemi J., Zirkin B.R. Age-related decreased Leydig cell testosterone production in the brown Norway rat. // J. Androl- 1994. Vol. 15. -N6. — P. 551−557.
  50. Cudicini C., Lejeune H., Gomez E., Bosnians E., Ballet F., Jegou B. Human Leydig cells and Sertoli cells are producers of interleukins-1 and -6. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1997. -Vol. 82. -N5.-P. 1426−1433.
  51. Degnan B.M., Bourdelat-Parks В., Daniel A., Salata K., Francis G.L. Sphindomyelinase inhibits in vitro Leydig cell function. // Ann. Clin. Lab. Sci. 1996. — Vol. 26. -N3. — P. 234−242.
  52. Dirami G., Cooke B.A. Effect of dopamine agonist on luteinizing hormone receptors, cyclic AMP production and steroidogenesis in rat Leydig cells. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1998. Vol. 150. -N2. -P. 393−401.
  53. Frayne J., Nicholson H.D. Regulation of oxytocin production by purified adult rat Leydig cells in vitro: effects of LH, testosterone and lipoproteins. // J. Endocrinol. 1994. — Vol. 143.-P. 325−332.
  54. Gao H.B., Shan L.X., Monder C., Hardy M.P. Supression of endogenous corticosterone levels in vivo increases thesteroidogenic capacity of purified rat Leydig cells in vitro. 11 Endocrinology.- 1996.-Vol. 137. -N5.-P. 1714−1718.
  55. Ge R.S., Hardy M.P. Variation in the end products of androgen biosynthesis and metabolism during postnatal differentiation of rat Leydig cells. // Endocrinology. 1998. -Vol. 139.-N9.-P. 3787−3795.
  56. Gobel R. Versuche Transplantation des Hodens in die Dauchhole. // Col. Olig. Path and path Anat., Jena. 1898, Vol. 11.-P. 737−739.
  57. Greep J., Fevold O. Hormonal control of reproduction. // Eds. C. R. Austin, R.V. Short. Cambridge, 1984. — P. 100−101.
  58. Grizard G., Arnonne C., Grizard J., Boucher D. Effect of short-term starvation on Leydig cell function in adult rats. // Arch. Androl. 1997. — Vol. 38. — N3. — P. 207−214.
  59. Kanzaki M., Fujisawa V., Okuda Y., Akada H., Arakawa S., Kamidono S. Expression and regulation of neuropepyide Y messenger ribonucleic acid in cultured immature rat Leydig and Sertoli cells. // Endocrinology. 1996. — Vol. 137. -N4. -P. 1249−1257.
  60. Koziel E., Filipiak K., Butowska W., Bilinska В., Warchol J.B. Immuno-endocrine interactions in the testis: possible involvement of Ca 2+ in signal transduction pathway in Leydig cells. Ginekol. Pol. — 1998. — Vol. 69. — N6. P. 441−445.
  61. Lejeune H., Chuzel F., Sanchez P., Durand P., Mather J.P., Saez J.M. Stimulating effect of both human recombinant inhibin A and activin A on immature porcine Leydig cell functions in vitro. // Endocrinology. 1997. — Vol. 138. — N11. -P. 4783−4791.
  62. Lejeune H., Sanchez P., Saez J.M. Enhancement of lond-term testosterone secretion and steroidogenic enzyme expression in human Leydig cells by coculture with Sertoli cell enriched preparations. // Int. J. Androl. 1998. — Vol. 21. — N3. — P. 129−40.
  63. Marie D., Kostie Т., Kovacevie R. Effect of acute and chronic immobilization stress on rat Leydig cell steroidogenesis. // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 1996. — Vol. 58. — N3. — P. 351−355.
  64. Mayerhofer A., Lahr G., Seidl K., Eusterschulte В., Christoph A., Gratzl M. The neural cell adhesion molecule provides clues to the development of testicular Leydig cells. // J Androl. 1996. — Vol. 17. — N3. — P. 223−230.
  65. Mendis-Handagama S.M., Ariyaratne H.B., Teunissen-Van-Manen K.R., Haupt R.L. Differentiation of adult Leydig cells in the neonatal rat testis is arrested by hypothyroidism. // Biol. Reprod.- 1998.- Vol. 59. N2. — P. 351−357
  66. Nagata S., Miyahe Y.I., Nambo Y., Nagamine N., Watanabe G., Tsunodam N., Taniyama H., Hondo E., Yainada J., Taya K. Inhibin secretion in tge stallion. // Equine Vet. J. 1998. -Vol. 30. — N2.-P. 98−103.
  67. Neaves W.B., Billingham R.E. Transplantation of the testis. // Transplantation. 1979. — Vol. 28. — P. 163−165.
  68. Pomerantz D.K., Pitelka V. Nitric oxide is a mediator of the inhibitory effect of activated macrophages on production of androgen by the Leydig cells of the mouse. // Endocrinology. 1998. — Vol. 139. -N3. — P. 922−931.
  69. Pusch H.H. Andriol treatment of oligozoospermia: Results of a double blind trial. // Science Serv. Jnt. -1989.- P. 67−71.
  70. Romanelli F., Filo S., Jsidori A., Conte D. Pituitay adenylate cyclase-activating polypeptide regulates rat Leydig cells function in vitro. // Neyropeptides. 1997. — Vol. 31. — N4. -P. 311−317.
  71. Rouiller Farbe V., Lecref L., Gautier C., Soez J.M., Harbert R. Expression and effect of insulin like growth factor I on rat fetal Leydig cells function and differentiation. // Endocrinology, 1998. Vol. 139. — N6. — P. 2926−2934.
  72. Spraudo R.L., Zirkin B.R. Is Leydig cell stroidogenic function affected by the germ cell content on the seminiferous tubules? // J. Androl. 1997. — Vol. 18. -N4. ~ P. 424−430.
  73. Stnart S., Howards M.D. Tratment of male infertility. // N. Engl. J. Med. 1995. — Vol. 332. — P. 312−317.
  74. Tai J., Johnson H.W., Tze W.J. Sucessful transplantation of Leydig cells in castrated inbred rats. // Transplantation. -1989.- Vol. 47. P.1087−1089.
  75. Tai J., Tze W. J., Johnson H.W. Cryopreservation of rat Leydig cells for in vitro and in vivo studies. // Horm-Metab. Res. 1994. — Vol. 26. — N3. — P. 145−147.
  76. Valenti S., Gnido R., Giusti M., Giordano G. In vitro acute and prolonged effects of melanonin on purified rat Leydig cell steroidogenesis and adenosine 35V-monophosphate production. // Endocrinology. 1995. — Vol. 136. — N5.- P. 5357−5362.
  77. Wang C., Chan C.W., Wong K.K. Comparison of the effectiveness of placebo, clomiphene citrate, mesterolone, pentoxyfyline, and testosterone rebound therapy for the treatment of idiopathic oligosermia. // Fertil. Stetil. J. 1983.-Vol. 40.-P. 358−365.
  78. Wango E.O., Odongo H.O., Oduma J., Oduor-Okelo D. Effect of 6-hydroxydopamine on testosterone production by mouse Leydig cells in vitro. // Acta Biol. Hung. 1995. — Vol. 46. -Nl.-P. 75−85.
  79. Yano K., Okuno A. Constitutively activating mutations in the luteinizing hormone receptor gene in cases of male-limited precocious puberty. // Nippon-Rinsho. 1998. — Vol. 56- N7. -P. 1843−1847.
  80. Zizkin R., Ewing L.L. Leydig cell differentiation during maturation of the rat testis: a stereological study of cell number and ultrastructure. // Anat. Rec. -1987. Vol. 219. — P. 157−163.
  81. Zuni D., Carani C. Further acquisitions on gonadal function in bromcriptine treated hyperprolactinemic male patients. // Pharm. Res Commun. 1986. — Vol. 18. — P. 601−610.
  82. РОСС И ПС Ч л?- '•ЗВЯКСТГ".':?-" ^д
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!