Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Моделирование индивидуальных антигенных детерминант белков вируса гепатита С при помощи технологии фагового дисплея, анализ их антигенной и иммуногенной активности

Диссертация: Моделирование индивидуальных антигенных детерминант белков вируса гепатита С при помощи технологии фагового дисплея, анализ их антигенной и иммуногенной активности
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Получены фаговые клоны, имитирующие антигенные детерминанты белков ВГС. Определены ключевые аминокислотные остатки 11 антигенных детерминант на белках core, NS3, NS4 и NS5, участвующие в связывании с антителами, установлена конформация 6 детерминант. Значительный рост показателей заболеваемости острым гепатитом С, частое поражение лиц молодого возраста, высокий уровень хронизации с возможным… Читать ещё >

Моделирование индивидуальных антигенных детерминант белков вируса гепатита С при помощи технологии фагового дисплея, анализ их антигенной и иммуногенной активности (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • Список сокращений
  • 1. Обзор литературы
    • 1. 1. Молекулярная организация вируса гепатита С
    • 1. 2. Строение и функции вирусных белков
    • 1. 3. Особенности ВГС-инфекции
    • 1. 4. Антигенная структура белков ВГС и методы картирования
  • 2. Материалы и методы
    • 2. 1. Иммуногистохимическая детекция белков
      • 2. 1. 1. Пациенты
      • 2. 1. 2. Исход ОГС
      • 2. 1. 3. Морфологический анализ
      • 2. 1. 4. Выделение МКА из асцитных жидкостей
      • 2. 1. 5. Моноклональные антитела
      • 2. 1. 6. Определение концентрации белка
      • 2. 1. 7. Иммуногистохимическое (ИГХ) окрашивание
    • 2. 2. Картирование антигенных детерминант белков ВГС
      • 2. 2. 1. Фаговая библиотека
      • 2. 2. 2. Аффинный отбор
      • 2. 2. 3. Трансдукция клеток E. coli фагами
      • 2. 2. 4. Иммуноскрининг
      • 2. 2. 5. Выделение одноцепочечной фаговой ДНК и секвенирование
      • 2. 2. 6. Анализ результатов секвенирования
    • 2. 3. Изучение иммуногенности отдельных детерминант
      • 2. 3. 1. Иммунизация мышей
      • 2. 3. 2. Определение активности антител в сыворотках мышей
      • 2. 3. 3. Реакция бласттрансформации спленоцитов
    • 2. 4. Изучение антигенных свойсв отдельных антигенных детерминант
      • 2. 4. 1. Реакция иммуно-ДОТа с сыворотками больных ГС
      • 2. 4. 2. Приготовление лизата E. col
      • 2. 4. 3. Истощение сывороток больных
      • 2. 4. 4. Иммуноферментный анализ. Непрямой ИФА
      • 2. 4. 5. Сендвич-ИФА №
      • 2. 4. 6. Сендвич-ИФА №
      • 2. 4. 7. Статистическая обработка результатов
  • 3. Результаты
    • 3. 1. Выявление натуральных антигенных детерминант в печени больных ОГС
    • 3. 2. Картирование антигенных детерминант
    • 3. 3. Изучение иммуногенных свойств отдельных детерминант
    • 3. 4. Изучение антигенных свойств отдельных детерминант
  • 4. Обсуждение результатов
  • Выводы

Актуальность проблемы.

Значительный рост показателей заболеваемости острым гепатитом С, частое поражение лиц молодого возраста, высокий уровень хронизации с возможным исходом в цирроз и первичный рак печени определяют повышенное внимание к этому заболеванию.

Изучение молекулярных механизмов взаимодействий вируса с клеткой-хозяином, в частности изучение нативных вирусных белков, представляет сложную задачу в связи с низким уровнем накопления вируса в организме хозяина и отсутствием клеточной системы для его культивирования. В то же время выяснение структуры и свойств индивидуальных белков необходимо как для решения теоретических проблем (локализация антигенных и иммуногенных детерминант, определение протективных эпитопов), так и для решения задач практической медицины — создания профилактических средств, терапевтических препаратов и диагностических тест-систем.

Серодиагностика, основанная на определении специфических антител к различным вирусным белкам, сегодня является одним из основных методов диагностики ВГС-инфекции. Однако в некоторых случаях антитела к вирусу могут отсутствовать, например, в период «окна», при запаздывании иммунного ответа и при применении иммуносупрессивной терапии. Высокий уровень генетической вариабельности ВГС может обусловливать ложноотрицательные результаты. Возможно также получение ложноположительных результатов за счет перекрестно-реагирующих детерминант. Часто отмечаются несовпадения в результатах тестирования контрольных панелей сывороток с помощью различных тест-систем. В основе перечисленных недостатков — использование в тест-системах рекомбинантных белков и пептидов, которые по строению не всегда точно соответствуют нативным вирусным белкам, а также неполное знание антигенной структуры возбудителя и особенностей его взаимодействия с иммунной системой хозяина.

Цели и задачи исследования.

Цели данной работы:

— изучение экспрессии белков ВГС в клетках печени больных острым гепатитом С;

— картирование антигенных детерминант белков ВГС методом фагового дисплея и изучение их иммуногенных и антигенных свойств.

Для достижения целей нами были поставлены следующие задачи:

1. С помощью моноклональных антител (МКА) исследовать выявляемость отдельных антигенных детерминант (АД) нативных вирусных белков в клетках печени больных острым гепатитом С (ОГС).

2. Получить фаговые клоны, имитирующие антигенные детерминанты вирусных белков, и картировать эти антигенные детерминанты.

3. Оценить иммуногенные свойства антигенных детерминант белков ВГС, экспонированных на фаговых частицах.

4. Разработать метод детекции антител к отдельным детерминантам в сыворотках больных гепатитом С, используя в качестве антигенов полученные фаговые клоны.

5. С помощью данного метода изучить спектр антител у больных гепатитом С на разных стадиях заболевания.

Научная новизна и практическая значимость.

1. Впервые показано, что отдельные антигенные детерминанты белков ВГС выявляются в клетках печени больных ОГС с различной частотой. Наиболее часто выявляются четыре антигенных детеминанты на белках NS4 и NS5, что может быть связано с пространственной доступностью этих детерминант.

2. Установлена структурная организация 6 антигенных детерминант, не описанных ранее, в составе белков core, NS3, NS4B и NS5A ВГС.

3. Показано, что антигенные детерминанты белков ВГС, экспонированные на поверхности фаговых частиц, индуцируют у мышей развитие вирусспецифического гуморального ответа.

4. Разработан лабораторный метод выявления антител у больных ГС к индивидуальным антигенным детерминантам белков ВГС, экспонированным на фаговых частицах.

5. Показано, что на ранних сроках после манифестации инфекции (до 1 месяца) спектр антител к индивидуальным антигенным детерминантам достоверно шире у пациентов с последующей реконвалесценцией, чем у больных с дальнейшей хронизацией инфекции. Данный критерий может иметь прогностическое значение при оценке исхода острого гепатита С.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Установлено, что частота выявления отдельных антигенных детерминант белков ВГС в клетках печени больных ОГС различается. В целом индивидуальные белки core, NS3, NS4 и NS5 выявляются в клетках печени 100% пациентов с острым гепатитом С.

2. Получены фаговые клоны, имитирующие антигенные детерминанты белков ВГС. Определены ключевые аминокислотные остатки 11 антигенных детерминант на белках core, NS3, NS4 и NS5, участвующие в связывании с антителами, установлена конформация 6 детерминант.

3. Показана иммуногенная активность антигенных детерминант белков ВГС в составе фаговых частиц.

4. Разработана схема детекции антител к отдельным антигенным детерминантам белков ВГС в сыворотках крови больных гепатитом С с использованием фагов, несущих пептиды, имитирующие эти детерминанты (т.н. фаговые мимотопы).

5. Установлено, что у больных ОГС частота выявления антител к отдельным антигенным детерминантам достоверно выше по сравнению с ХГС, что может иметь диагностическое значение при разграничении стадий инфицирования.

1 Обзор литературы.

Выводы.

1. Показано, что антигенные детерминанты на пяти белках ВГС выявляются в клетках печени больных острым гепатитом С in situ с помощью моноклональных антител с различной эффективностью: от 32% до 95%.

2. Суммарно белки ВГС с помощью моноклональных антител в клетках биоптатов печени выявлены у 100% пациентов с острым гепатитом С, что достоверно выше, чем у больных с хроническим гепатитом С.

3. Установлена прямая зависимость между накоплением белков core, NS3 и NS5A в печени и некрозом ткани печени. Показано, что предполагаемая реконвалесценция ассоциирована с увеличением количества клеток печени, содержащих белки NS4A и NS3, в ранние сроки после манифестации острого гепатита С.

4. При помощи технологии фагового дисплея получены фаговые клоны с пептидными вставками, имитирующими 11 антигенных детерминант белков core, NS3, NS4B и NS5A ВГС. При картировании установлено, что 3 антигенные детерминанты являются линейными, остальные содержат элементы вторичной и третичной структуры белков.

5. Показано, что аминокислотные последовательности, представляющие антигенные детерминанты белков ВГС в составе фагов (мимотопы), способны индуцировать у мышей выработку антител, специфичных к вирусным белкам.

6. Разработан метод выявления антител к индивидуальным антигенным детерминантам белков ВГС, экспонированным на фаговых частицах, в сыворотках больных гепатитом С. Установлено, что частота выявления антител к отдельным антигенным детерминантам различается и достоверно выше у больных ОГС по сравнению с ХГС, что может иметь диагностическое значение при разграничении ОГС и ХГС.

7. Показано, что спектр антител к индивидуальным антигенным детерминантам в срок до месяца после манифестации инфекции достоверно шире у пациентов с последующей реконвалесценцией, чем у больных с дальнейшей хронизацией инфекции, что может иметь прогностическое значение при оценке исхода острого гепатита С.

Показать весь текст

Список литературы

  1. А.Г., Масалова О. В., Атанадзе С. Н. и др. Характеристика панели моноклональных антител к рекомбинантному белку NS3 вируса гепатита С. // Вопросы вирусологии. 2002. — Т. 47, № 1. -С. 21−25.
  2. В.А., Ерошкин A.M. Поиск сайтов, содержащих функционально значимые замены в наборах родственных или мутантных белков. // Молекулярная биология. 1997.- Т. 31, № 5. — С. 880 — 887.
  3. И.В., Знойко О. О., Огиенко O.JI. и др. Спектр антител к различным антигенам HCV при разных вариантах течения хронической HCV-инфекции. // Вопросы вирусологии. 2002. — Т47, № 2. — С. 11 — 16.
  4. И.В., Огиенко O.JL, Знойко О. О. и др. Исследование сероконверсии к различным антигенам вируса гепатита С у больных гепатитом С с различными исходами. // Вопросы вирусологии. — 2003. — Т.48, № 2. С. 36 — 40.
  5. О.В., Абдулмеджидова А. Г., Атанадзе С. Н. и др. Характеристика панели моноклональных антител и эпитопное картирование белков вируса гепатита С. // Доклады Академии Наук. -2002. Т. 383, № 4. — С. 545−550.
  6. О.В., Абдулмеджидова А. Г., Шкурко Т. В. и др. Анализ белков вируса гепатита С в клетках печени больных хроническим гепатитом С. // Вопросы вирусологии. 2003. — Т.48, № 1. — С. 9 — 14.
  7. О.В., Кущ А.А. Моноклональные антитела к белкам вируса гепатита С инструмент для картирования антигенных детерминант, диагностики гепатита С и изучения вирусного патогенеза. // Российский Биотерапевтический журнал. 2003. — № 3. — С. 7−23.
  8. В.К. Синтетические пептиды в изучении антителопродукции к белкам вирусов гепатита С и D. // Автореф. канд биол наук. Н.Новгород. 2000.-С. 21.
  9. Agnello V., Abel G., Elfahal M. et.al. Hepatitis С virus and other flaviviridae viruses enter cells via low density lipoprotein receptor. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1999. — V. 96. — P. 12 766 — 12 771.
  10. Andre P., Perlemuter G., Budkowska A. et.al. Hepatitis С virus particles. and lipoprotein metabolism. // Seminars in liver disease. 2005. — V. 25. — N. 1. -P. 93−104.
  11. Ballardini G., De Raffele E., Groff P. et al. Timing of reinfection and mechanisms of hepatocellular damage in transplanted hepatitis С virus-reinfected liver. // Liver Transpl. 2002. — V.8. — P. 10−20.
  12. Barrera JM, Francis B, Ercilla G et al. Improved detection of anti-HCV in posttransfusion hepatitis by a thirdgeneration ELISA. // Vox Sang. 1995. -V. 68. -P. 15−18.
  13. Bartenschlager R., Lohmann V. Replication of hepatitis С virus. // J. Gen. Virol.-2000.-Vol. 81.-P. 1631 1648.
  14. Bassett S.E., Thomas D.L., Brasky K.M., Lanford R.E. Viral persistence, antibody to El and E2, and hypervariable region 1 sequence stability in hepatitis С virus-inoculated chimpanzees. // J. Virol. 1999. — V. 73. — P. 1118 -1126.
  15. Bedossa P., Poynard T. An algorithm for the grading of activity in chronic hepatitis C. // Hepatology. 1996. — V.24. — P.289−293.
  16. Bhattacherjee Y., Prescott L.F., Pike I. et.al. Use of NS4 peptides to identify type-specific antibody to hepatitis С virus genotypes 1, 2, 3, 4, 5 and 6. // Journal of General Virology. 1995. -V. 76. — P. 1737−1748.
  17. Bocharov G., Ludewig В., Bertoletti A. et al. Underwhelming the immune response: effect of slow virus growth on CD8+ -T-lymphocyte responses. // J. Virol. 2004. V. 78. — P. 2247−2254.
  18. Booth J.C., Foster G.R., Levine T. et al. The relationship to genotype in chronic HCV infection.//Liver.-1997.-V. 17. -№ 3. -P. 144−151.
  19. Bowen D.G., Walker C.M. Adaptive immune responses in acute and chronic hepatitis С virus infection. //Nature. 2005. — V. 436. — P. 946−952.
  20. Bukh J., Purcell R.H., Miller R.H. At least 12 genotypes of hepatitis С virus predicted by sequence analysis of the putative El gene of isolates collected worldwide. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1993. -V. 90. — P. 8234−8238.
  21. Bukh J., Purcell R.H., Miller R.H. Sequence analysis of the core gene of 14 hepatitis С virus genotypes. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1994. — V. 91. — P. 82 398 243.
  22. Buolant S., Becchi M., Penin F., Lavergne J.P. Unusual multiple recoding events leading to alternative forms of hepatitis С virus core protein from genotype lb. //J. Biol. Chem. -2003. V. 278. — P. 45 785−45 792.
  23. Cerino A., Boender P., La Monica N. et.al. A human monoclonal antibody specific for the N terminus of the hepatitis С virus nucleocapsid protein. // J Immunol. 1993. -V. 151, № 12. — P. 7005−7015.
  24. Cerny A., Chisari. F.V. Immunological aspects of HCV infection. // Intervirology. 1994. — V. 37. — P. 119−125.
  25. Chan S.W., Bye J.M., Jackson P., Allain J.P. Human recombinant antibodies specific for hepatitis С virus core and envelope E2 peptides from an immune phage display library. // J Gen Virol. 1996. -V. 77. — P. 2531 — 2539.
  26. Chang J.C., Seidel C., Ofenloch B. et.al. Antigenic heterogeneity of the hepatitis С virus NS4 protein as modeled with synthetic peptides. // Virology.1999.-V. 257, N1.-P. 177−190.
  27. Chang K.M. Immunopathogenesis of hepatitis С virus infection. // Clin. Liver Dis. 2003. — V.7. — P.89−105.
  28. Chang SC, Yen J, Kang H. et.al. Nuclear localization signals in the core protein of hepatitis С virus. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994.- V. 205. — P. 1284−1290.
  29. Chen M., Sallberg M., Sonnerborg A. et.al. Limited humoral immunity in hepatitis с virus infection. // Gastroenterology. 1999. — V. 116. — P. 135−143.
  30. Chen M., Sallberg M., Sonnerborg A. et.al. Human and murine antibody recognition is focused on the ATPase/Helicase, but not the protease domain of the hepatitis С virus nonstructural 3 protein. // Hepatology. 1998. — V. 28, N1. -P. 219−224.
  31. Ching W.M., Wychowski C., Beach M.J. et.al. Interaction of immune sera with synthetic peptides corresponding to the structural protein region of hepatitis С virus. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1992. — V. 89, N8. — P. 3190−3194.
  32. Cho H.S., Ha N.S., Kang L.W. et.al. Crystal structure of RNA helicase from genotype lb hepatitis С virus. A feasible mechanism of unwinding duplex RNA. // J. Biol. Chem. 1998. — V. 273. — P. 15 045−15 052.
  33. Choi J., Xu Z., Ou J.H. Triple decoding of hepatitis С virus RNA by programmed translational frameshifting. //Mol. Cell Biol. 2003. — V. 23. — P. 1489−1497.
  34. Choo Q., Kuo G., Weiner AJ. et.al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. // Science. 1989. — V. 244. -P. 359−362.
  35. Choo Q., Richman K.H., Han J.H. et.al. Genetic organization and diversity ofthe hepatitis С virus. //Proc. Natl. Acad. Sci. 1991. -V. 88. — P. 2451−2455.
  36. Choo S.H., So H.S., Cho J.M., Ryu W.S. Association of hepatitis С virus particles with immunoglobulin: a mechanism for persistent infection. // J. Gen. Virol. 1995. — V. 76. — P. 2337−2341.
  37. Chou P.Y., Fasman G.D. Prediction of the secondary strucrure of proteins from their amino acid sequence. // Adv. Enzymol. 1978. — V. 47. — P. 145−148.
  38. Chung R.T., Monto A., Dienstag J.L., Kaplan L.M. Mutations in the NS5A region do not predict interferon-responsiveness in american patients infected with genotype lb hepatitis С virus. // J. Med. Virol. 1999. — V. 58. — P. 353 358.
  39. Cocquerel L., Duvet S., Meunier J.C. et.al. The transmembrane domain of hepatitis С virus glycoprotein El is a signal for static retention in the endoplasmic reticulum. // J. Virol. 1999. — V. 73. — P. 2641−2649.
  40. Cocquerel L., Meunier J.C., Pillez A. et.al. A retention signal necessary and sufficient for endoplasmic reticulum localization maps to the transmembrane domain of hepatitis С virus glycoprotein E2. // J. Virol. 1998. — V. 72. — P. 2183−2191.
  41. Colin C, Lanoir D, Touzet S et.al. Sensitivity and specificity of third-generation hepatitis С virus antibody detection assays: an analysis of the literature. // J. Viral Hepat. 2001. — V. 8. — P. 87−95.
  42. Cooper S, Erickson AL, Adams EJ, et al. Analysis of a successful immune response against hepatitis С virus. // Immunity. 1999. — V. 10. — P. 439−449.
  43. Cwirla, S.E., Peters, E.A., Barrett, R.W., Dower, W.J. Peptides on phage: a vast library for identifying ligands. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1990. — V. 87. — P. 6378−6382.
  44. Darling J.M., Wright T.L. Immune responses in hepatitis C: is virus or host the problem? // Curr. Opin. Infect. Dis. 2004. — V. 17. — P. 193−198.
  45. Deleersnyder V., Pillez A., Wychowski C. et.al. Formation of native hepatitis С virus glycoprotein complexes. // J. Virol. 1997. — V. 71. — P. 697−704.
  46. Devlin J.J., Panganiban L.C., Devlin P.E. Random peptide libraries: a source of specific protein binding molecules. // Science. 1990. — V. 249. — P. 404−406.
  47. Dou X.-G., Talekar G., Chang J. et.al. Antigenic heterogeneity of the hepatitis С virus NS5A protein. // Journal of Clinical Microbiology. 2002. — V. 40, N1. -P. 61−67.
  48. Egger D., Wolk В., Gosert R. et al. Expression of hepatitis С virus proteins induces distinct membrane alteration including a candidate viral replication complex. // J. Virol. 2002. — V.76. — P. 5974−6984.
  49. D.M., Steitz T.A., Goldman A. // Annu. Rev. Biophys. Chem. -1986.-V. 15.-P. 321−353.
  50. Enomoto N., Sakuma I., Asahina Y. et.al. Mutations in the nonstructural protein 5a gene and response to interferon in patients with chronic hepatitis с virus lb infection. // N. Engl. J. Med. 1996. — V. 334. — P. 77−81.
  51. Enshell-Seijffers D., Denisov D., Groisman B. et.al. The mapping and reconstitution of a conformational discontinuous B-cell epitope of HIV-1. // J. Mol. Biol. 2003. — V. 334. — P. 87−101.
  52. Enshell-Seijffers D., Smelyanski L., Gershoni J.M. The rational design of a «type 88» genetically stable peptide display vector in the filamentous bacteriophage fd. // Nucleic Acids Res. 2001. -V. 29, N10. — P. 50−63.
  53. Ferreiro M.C., Dios P.D., Scully C. Transmission of hepatitis С virus by saliva? // Oral. Dis. 2005. — V. 11, N4. — P. 230−235.
  54. Flegelova Z., Krchnak V., Nemecek V. et.al. Epitope mapping of non-structural (NS3/NS4) region of HCV protein using synthetic peptides. // In «Innovation and Perspectives in Solid Phase Synthesis». Mayflower, Kingswinford, UK. -1994.-P. 505−508.
  55. Flint M., Maidens C., Loomis-Price L.D. et.al. Characterization of hepatitis С virus E2 glycoprotein interaction with a putative cellular receptor, CD81. // Journal of virology, Aug. 1999. — V. 73, N8. — P. 6235−6244.
  56. Gallinari P., Brennan D., Nardi C. et.al. Multiple enzymatic activities associated with recombinant NS3 protein of hepatitis С virus. // J. Virol. 1998. — V. 72. — P. 6758−6769.
  57. Garnier J., Osguthorpe D.J., Robson B. Analysis of the accuracy and implications of simple methods for predicting the secondary structure of globular proteins. //J. Mol. Biol. 1978. -V. 120, N1. — P. 97−120.
  58. Gerlach J.T., Diepolder H.M., Jung M.C. et al. Recurrence of hepatitis С virus after loss of vims-specific CD4(+) T-cell response in acute hepatitis C. // Gastroenterology. 1999. — V. 117. — P. 933−941.
  59. Geysen H.M., Rodda S.J., Mason T.J. et.al. Strategies for epitope analysis using peptide synthesis. // J. Immunol. Methods. 1987. — V. 102. — P. 259−274.
  60. Geysen H.M., Mason T.J., Rodda S.J. Cognitive features of continuous antigenic determinants. // J. Mol. Recognit. 1988. -V. 1. — P. 32−35.
  61. Giannelli G., Antonaci S. Immunological and molecular aspects of liver fibrosis in chronic hepatitis С virus infection. // Histol. Histopaphol. 2005. — V. 20. — P. 939−944.
  62. Giannini C., Brechot C. Hepatitis С virus biology. // Cell Death and Differentiation. 2003. — V. 10. — P. 27 — 38.
  63. Goeser Т., Muller H.M., Pfaff E., Theilmann L. Characterization of antigenic determinants of the hepatitis С virus. // Virology. — 1994. — V. 205. — P. 462 469.
  64. Grakoui A., Wychowski C., Lin C. et.al. Expression and identification ofhepatitis С virus polyprotein cleavage products. // J. Virol. 1993. — V. 67. — P. 1385−1395.
  65. Gretch D.R. Diagnostic tests for hepatitis C. // Hepatology. 1997. — V. 26. -P. 43−47.
  66. Grihalde N.D., Jack Chen Y.-C., Golden A. et.al. Epitope mapping of anti-HIV and anti-HCV monoclonal antibodies and characterization of epitope mimics using a filamentous phage peptide library. // Gene. 1995. — V. 166, N2. — P. 187−195.
  67. Heller Т., Rehermann B. Acute hepatitis C: a multifaceted disease. // Seminars in liver disease. 2005. — V. 25. — P. 7−17.
  68. Hoofnagle J.H. Course and outcome of hepatitis C. // Hepatology. 2002. —V. 36.-P. 21−29.
  69. Hope R.G., McLauchlan J. Sequence motifs required for lipid droplet association and protein stability are unique to the hepatitis С virus core protein. //J. Gen. Virol.-2000.-V. 81.-P. 1913−1925.
  70. Jolivet-Reynaud C., Adida A., Michel S. et.al. Characterization of mimotopes mimicking an immunodominant conformational epitope on the hepatitis С virus NS3 helicase. // Journal of Medical Virology. 2004. -V. 72. — P. 385−395.
  71. P.A., Schulze G.E. //Naturwissenshaften. 1985. — V. 72. — P. 212−223.
  72. Khudyakov Yu.E., Khudyakova N.S., Jue D.L. et.al. Linear B-cell epitopes of the NS3-NS4-NS5 proteins of the hepatitis С virus as modeled with synthetic peptides. // Virology. 1995. — V. 206. — P. 666−672.
  73. Kim J.L., Morgenstern K.A., Lin C. et.al. Crystal structure of the hepatitis С virus NS3 protease domain complexed with a synthetic NS4A cofactor peptide. // Cell. 1996. — V. 87. — P. 343−355.
  74. Kim J.L., Morgenstern K.A., Griffith J.P. et.al. Hepatitis С virus RNA helicase domain with a bound oligonucleotide: the crystal structure provides insights into the mode of unwinding. // Structure. 1998. — V. 6. — P. 89−100.
  75. Kittlesen D.J., Chianese-Bullock K.A., Yao Z.Q. et.al. Interaction between complement receptor gClqR and hepatitis С virus core protein inhibits T-lymphocyte proliferation. // J. Clin. Invest. 2000. — V. 106, N10. — P. 1239 -1249.
  76. Kuo G., Choo Q.L., Alter H.J. et al. An assay for circulating antibodies to a major etiologic virus of human non-A, non-B hepatitis. // Science. 1989. — V. 244.-P. 362−364.
  77. Kyte I., Doolittle R.F. A simple method for displaying the hydropathic character of a protein. // J. Mol. Biol. 1982. — V. 157. — P. 105−132.
  78. Lanford R.E., Notvall L., Chavez D. et.al. Analysis of hepatitis С virus capsid, El, and E2/NS1 proteins expressed in insect cells. // Virology. 1993. — V. 197.-P. 225−235.
  79. Large M.K., Kittlesen D.J., Hahn Y.S. Suppression of host immune response by the core protein of hepatitis С virus: Possible implications for hepatitis С virus persistence. //J. Immunol. 1999. -V. 162. — P. 931−938.
  80. Lechner F., Wong D.K., Dunbar P.R. et al. Analysis of successful immune responses in persons infected with hepatitis С virus. // J. Exp. Med. 2000. — V. 191.-P. 1499−1512.
  81. Lerat H., Berby F., Trabaud M.A. et.al. Specific detection of hepatitis С virus minus strand RNA in hematopoietic cells. // J. Clin. Invest. 1996. — V. 97. -P. 845−851.
  82. Levy S., Todd S.C., Maecker H.T. CD81 (TAPA-1): a molecule involved in signal transduction and cell adhesion in the immune system. // Annu. Rev. Immunol. 1998.-V. 16.-P. 89−109.
  83. Liu Q., Bhat R.A., Prince A.M. et al. The hepatitis С virus NS2 protein generated by NS2−3 autocleavage is required for NS5A phosphorylation. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. -V. 254. — P. 572−577.
  84. Liu Q., Tackney C., Bhat R.A. et.al. Regulated processing of hepatitis. С virus core protein is linked to subcellular localization. // J. Virol. 1997. — V. 71, N1. -P. 657−662.
  85. Lo S., Masiarz F., Hwang S.B. et.al. Differential subcellular localization of hepatitis С virus core gene products. // Virology. 1995. — V. 213. — P. 455 461.
  86. Longombardo G., Ferri C., Marchi S. et.al. Immune response to an epitope of the NS4 protein of hepatitis С virus in HCV-related disorders. // Clin. Immunol. Immunopathol. 1998. — V. 87, N2. — P. 124−129.
  87. Major M.E., Feinstone S.M. The Molecular Virology of Hepatitis C. // Hepatology. 1997.-V. 25, N6.-P. 1527−1538.
  88. Marusawa H., Hijikata M., Chiba Т., Shimotohno K. Hepatitis С virus core protein inhibits Fas- and tumor necrosis factor alpha-mediated apoptosis via NF-kappaB activation. // J. Virol. 1999. — V. 73, N6. — P. 4713^1720.
  89. Masalova O.V., Atanadze S.N., Samokhvalov E.I. et.al. Detection of hepatitis С virus core protein circulating within different virus particle populations. // Journal of Medical Virology. 1998. — V. 55. — P. 1−6.
  90. Masalova O.V., Lakina E.I., Abdulmedzhidova A.G. et al. Characterization of monoclonal antibodies and epitope mapping of the NS4 protein of hepatitis С virus. // Immunol. Letters. 2002. — V.83. — P. 187−196.
  91. McKinney M.M., Parkinson A. A simple, non-chromatographic procedure to purify immunoglobulins from serum and ascites fluid. // J. Immunol. Methods. 1987. — V. 96, N2. — P. 271−278.
  92. McLauchlan J. Properties of the hepatitis С virus core protein: a structural protein that modulates cellular processes. // Journal of Viral Hepatitis. -2000. V. 7.-P. 2−14.
  93. Menez R., Bossus M., Muller B.H. et.al. Crystal structure of a hydrophobic immunodominant antigenic site on hepatitis С virus core protein complexed to monoclonal antibody 19D9D6. // The Journal of Immunology. -2003.-V. 170.-P. 1917−1924.
  94. Meola, A., Delmastro P., Monaci P. et.al. Derivation of vaccines from mimotopes: immunologic properties of HBsAg mimotopes displayed on filamentous phage. // J. Immunol. 1995. — V. 154. — P. 3162−3172.
  95. Minenkova O., Gargano N., Tomassi A.D. et.al. ADAM-HCV, a new-concept diagnostic assay for antibodies to hepatitis С virus in serum. // Eur. J. Biochem. 2001. — V. 268. — P. 4758−4768.
  96. Mondelli M.U., Cerino A., Boender P. et.al. Significance of the immune response to a major, conformational B-cell epitope on the hepatitis С virus NS3 region defined by a human monoclonal antibody. // J. Virol. 1994. — V. 68, N8.-P. 4829−4836.
  97. Moradpour D., Englert C., Wakita Т., Wands JR. Characterization of cell lines allowing tightly regulated expression of hepatitis С virus core protein. //
  98. Virology. 1996. -V. 222. — P. 51−63.
  99. Moradpour D., Gosert R., Egger D. et.al. Membrane association of hepatitis С vims nonstructural proteins and identification of the membrane alteration that harbors the viral replication complex. // Antiviral research. -2003.-V. 60.-P. 103−109.
  100. Moriya K., Fujie H., Shintani Y. et.al. The core protein of hepatitis С virus induces hepatocellular carcinoma in transgenic mice. //Nat. Med. 1998. -V. 4.-P. 1065−1067.
  101. Murphy F.A., Fauquet C.M., Bishop D.H.L. et al. Virus taxonomy, sixth report of the international committee on taxonomy of viruses. // Vienna & New York: Springer. 1995. — P. 424−426.
  102. Neddermann P., Tomei L., Steinkuhler C. et.al. The nonstructural proteins of the hepatitis С virus: structure and functions. // Biol. Chem. 1997. -V. 378.-P. 469−476.
  103. Neumann A.U., Lam N.P., Dahari H. et.al. Hepatitis С viral dynamics in vivo and the antiviral efficacy of interferon-alpha therapy. // Science. 1998. -V. 282.-P. 103−107.
  104. Nikolaeva L.I., Blokhina N.P., Tsurikova N.N. et.al. Virus-specific antibody titers in different phases of hepatitis С virus infection. // Journal of Viral Hepatitis. 2002. — V. 9. — P. 429−437.
  105. Okuda M., Li K., Beard M.R. et.al. Mitochondrial injury, oxidative stress, and antioxidant gene expression are induced by hepatitis С virus core protein. // Gastroenterology. 2002. -V. 122. — P. 366−375.
  106. Olenina L.V., Nikolaeva L.I., Sobolev B.N. et.al. Mapping and characterization of В cell linear epitopes in the conservative regions of hepatitis С virus envelope glycoproteins. // J. Viral. Hepat. 2002. — V. 9, N3. — P. 174 182.
  107. Park H.J., Byun S.M., Ha Y.J. et.al. Identification of immunodominant epitopes in the Core and nonstructural region of hepatitis С virus by enzymeimmunoassay using synthetic peptides. // J. Immunoassay. 1995. — V. 16. — P. 167−181.
  108. Pavio N., Lai M.M. The hepatitis С virus persistence: how to evade the immune system? // J. Biosci. 2003. — V. 28. — P.287−304.
  109. Pawlotsky J.M., Germanidis G. The non-structural 5 A protein of hepatitis С virus. // Journal of Viral Hepatitis. 1999. — V. 6. — P. 343−356.
  110. Penin F., Combert C., Germanidis G. et.al. Conservation of the conformational and positive charges of hepatitis С virus E2 envelop glycoprotein hypervariable region 1 points to a role in cell attachment. // J. Virol. -2001. -V. 75. P. 5703−5710.
  111. Penin F., Dubuisson J., Rey F.A. et.al. Structural biology of hepatitis С virus. // Hepatology. 2004. — V. 39, N1. — P. 5−19.
  112. Pereboeva L.A., Pereboev A.V., Wang L.F., Morris G.E. Hepatitis С epitopes from phage-displayed cDNA libraries and improved diagnosis with a chimeric antigen. // Journal of Medical Virology. — 2000. V. 60. — P. 144— 151.
  113. Pereboeva L.A., Pereboev A.V., Morris G.E. Identification of antigenic sites on three hepatitis С virus proteins using phage-displayed peptide libraries. // Journal of Medical Virology. 1998. — V. 56. — P. 105−111.
  114. Petrenko V.A., Vodyanoy V.J. Phage display for detection of biological threat agents. // Journal of Microbiological Methods. 2003.- V. 53. — P. 253 -262.
  115. Pileri P., Uematsu Y., Campagnoli S. et.al. Binding of hepatitis С virus to CD81. // Science. 1998. — V. 282. — P. 938−941.
  116. Prezzi C., Nuzzo M., Meola A. et.al. Selection of antigenic and immunogenic mimics of hepatitis С virus using sera from patients. // The Journal of Immunology. 1996. -V. 156. — P. 4504 — 4513.
  117. Ray R., Khanna A., Lagging L.M. et.al. Peptide immunogen mimicry of putative El glycoprotein-specific epitopes in hepatitis С virus. // J. Virol. —1994. V. 68, N7. — P. 4420−4426.
  118. Ray R.B., Lagging L.M., Meyer K. et.al. Transcriptional regulation of cellular and viral promoters by the hepatitis С virus core protein. // Virus Res. —1995.-V. 37.-P. 209−220.
  119. Ray R.B., Ray R. Hepatitis С virus core protein: intriguing properties and functional relevance. // FEMS Microbiology Letters. 2001. — V. 202. — P. 149−156.
  120. Realdon S., Gerotto M., Dal Pero F. et al. Proapoptotic effect of hepatitis С virus core protein in transiently transfected cells is enhanced by nuclear localization and is dependent on PKR activation. // J. Hepatol. — 2004. — V. 40. -P.77−85.
  121. Reed K.E., Gorbalenya A.E., Rice C.M. The NS5A/NS5 proteins of viruses from three genera of the family flaviviridae are phosphorylated by associated serine/threonine kinases. // J. Virol. 1998. — V. 72. — P. 6199−6206.
  122. Rice C.M. Flaviviridae: The viruses and their replication. In: Fields BN, Knipe DM, Howley PM, et al. // Fields Virology, 3rd edition. Philadelphia: Lippincott-Raven. 1996. — P. 931−959.
  123. Rollier C., Depla E., Drexhage J. et al. Control of heterologous hepatitis С virus infection in chimpanzees is associated with the quality of vaccine-induced periferal T-helper immune response. // J. Virol. — 2004. — V. 78. — P.187−196.
  124. Rosa C., Osborne S., Garetto F. et.al. Epitope mapping of the NS4 and NS5 gene products of hepatitis С virus and the use of a chimeric NS4-NS5 synthetic peptide for serodiagnosis. // Journal of Virological Methods. 1995. -V. 55.-P. 219−232.
  125. Sagnelli E., Coppola N., Marrocco C. et.al. Diagnosis of hepatitis С virus related acute hepatitis by serial determination of IgM anti-HCV titres. // Journal of Hepatology. -2005. V. 42. — P. 646−651.
  126. Saito I., Miyamura Т., Ohbayashi A. et.al. Hepatitis С virus infection is associated with the development of hepatocellular carcinoma. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1990. — V. 87. — P. 6547−6549.
  127. Sansonno D., Iacobelli A.R., Cornacchiulo V. et.al. Immunohistochemical detection of hepatitis С virus-related proteins in liver tissue. // Clin. Exp. Rheumatol. 1995. — V. 13. — P. 29−32.
  128. Santolini E., Migliaccio G., La Monica N. Biosynthesis and biochemical properties of the hepatitis С virus core protein. // J. Virol. 1994. — V. 68. — P. 3631−3641.
  129. Scheuer P.J., Ashrafzadeh P., Sherlock S. et al. The pathology of hepatitis C. // Hepatology. 1992. — V. 15. — P. 567−571.
  130. Scognamiglio P., Accapezzato D., Casciaro M.A. et al. Presence of effector CD8+ T cells in hepatitis С virus-exposed healthy seronegative donors. // J. Immunol. 1999. — V. 162. — P. 6681−6689.
  131. Scott J.K., Smith G.P. Searching for peptide ligands with an epitope library. // Science. 1990. — V. 249. — P. 386−390.
  132. Seeff L.B., Buskell-Bales Z., Wright E.C. et al. Long-term mortality after transfusion-associated non-A, non-B hepatitis. // N. Engl. J. Med. 1992. — V. 327.-P. 1906−1911.
  133. Sela M. Antigenicity: some molecular aspects. // Science. — 1969. V. 166.-P. 1365−1374.
  134. Shimizu Y.K., Igarashi H. Kiyohara T. et al. A hyperimmune serumagainst a synthetic peptide corresponding to the hypervariable region 1 of hepatitis С virus can prevent viral infection in cell cultures. // Virology. 1996. -V. 223.-P. 409412.
  135. Siemoneit K., Cardoso M.S., Wolp A. et.al. Isolation and epitope characterization of human monoclonal antibodies to hepatitis С virus core antigen. // Hybridoma. 1994. — V. 13, N1. — P. 9−13.
  136. Simmonds P.E., Holmes C., Cha T.-A. et.al. Classification of hepatitis С virus into six major genotypes and a series of subtypes by phylogenetic analysis of the NS5 region. //J. Gen. Virol. 1993. -V. 74. — P. 2391−2399.
  137. Smith G.P., Petrenko V.A. Phage display. // Chem. Rev. 1997. — V. 97. -P. 391−410.
  138. Smothers J.F., Henikoff S., Carter P. Affinity selection from biological libraries. // Science. 2002. — V. 298. — P. 621−622.
  139. Sung V. M-H, Shimodaira S., Doughty A.L. et.al. Establishment of B-cell lymphoma cell lines persistently infected with hepatitis С virus in vivo and in vitro The apoptotic effects of virus infection. // J. Virol. 2003. — V. 77. — P. 2134−2146.
  140. Takamizawa A., Mori C., Fuke I. et.al. Structure and organization of the hepatitis С virus genome isolated from human carriers. // J. Virol. 1991. — V. 65.-P. 1105−1113.
  141. Taylor D.R., Shi S.T., Romano P.R. et.al. Inhibition of the interferon-inducible protein kinase PKR by HCV E2 protein. // Science. 1999. — V. 285. -P. 107−110.
  142. Tellinghuisen T.L., Marcotrigiano J., Gorbalenya A.E., Rice C.M. The
  143. NS5A protein of hepatitis С virus is a zinc metalloprotein. // The Journal of Biological Chemistry. 2004. — V. 279, N 47. — P. 48 576−48 587.
  144. Tellinghuisen T.L., Rice C.M. Interaction between hepatitis С virus proteins and host cell factors. // Curr. Opin. Microbiol. 2002. — V. 5. — P. 419 427.
  145. Teo M., Hayes P. Management of hepatitis C. // British Medical Bulletin. -2004.- V. 70.-P. 51−69.
  146. Thimme R., Bukh J., Spangenberg H.C. et al. Viral and immunological determinants of hepatitis С virus clearance, persistence, and disease. // PNAS. -2002.-V. 99.-P. 15 661−15 668.
  147. Thimme R., Oldach D., Chang K.-M. et al. Determinants of viral clearance and persistence during acute hepatitis С virus infection. // J. Exp. Med.-2001.-V. 194.-P. 1395−1406.
  148. Tomei L., Failla C., Santolini E. et.al. NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis С virus polyprotein. // J. Virol. — 1993. V. 67. — P. 4017−4026.
  149. Ueno Т., Misawa S., Ohba Y. et.al. Isolation and characterization of monoclonal antibodies that inhibit hepatitis С virus NS3 protease. // J'. Virol. — 2000. V. 74, N14. — P. 6300−6308.
  150. Urbanelli L., Fortugno P., Bartoli F. et.al. 'Affinity maturation' of ligands for HCV-specific serum antibodies. // J. Immunol. Methods. 2000. — V. 236.-P. 167−176.
  151. Wang L.-F., Yu M. Epitope identification and discovery using phage display libraries: application in vaccine development and diagnostics. // Current Drug Targets. 2004. — V. 5. — P. 1−15.
  152. Welling G.W., Weijer W.J., van der Zee R., Welling-Wester S. Prediction of sequential antigenic regions in proteins. // FEBS Lett. 1985. — V. 188, N2.-P. 215−218.
  153. Wienhues U., Ihlenfeldt H.-G., Seide C. et.al. Characterization of a linearepitope in the nonstructural region 4 of hepatitis С virus with reactivity to seroconversion antibodies. // Virology. 1998. — V. 245. — P. 281−288.
  154. Wright P.E., Dyson H.J. Inrinsically unstructured proteins: re-assessing the protein structure-function paradigm. // J. Mol. Biol. 1999. — V. 293. — P. 321−331.
  155. Xu Z., Choi J., Yen T.S. et.al. Synthesis of a novel hepatitis С virus protein by ribosomal frameshift. // EMBO J. 2001. — V. 20. — P. 3840−3848.
  156. Yagnik A.T., Lahm A., Meola A. et.al. A model for the hepatitis С virus envelop glycoprotein E2. // Proteins. 2000. — V. 40. — P. 355−366.
  157. Yamanaka Т., Kodama Т., Doi T. Subcellular localization of HCV core protein regulates its ability for p53 activation and p21 suppression. // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2002. — V. 294. — P. 528−534.
  158. Yamanaka Т., Uchida M., Doi T. Innate form of HCV core protein plays an important role in the localization and the function of HCV core protein. // Biochemical and Biophysical Research Communications. — 2002. — V. 294. — P. 521−527.
  159. Yasui K., Wakita Т., Kohara K.-T. et.al. The native form and maturation process of hepatitis С virus core protein. // J. Virol. 1998. — V. 72. — P. 60 486 055.
  160. Yip Y.L., Smith G., Ward R.L. Comparison of phage pill, pVIII and GST as carrier proteins for peptide immunisation in Balb/c mice. // Immunology Letters. 2001. — V. 79. — P. 197−202.
  161. Zhang Z.-X., Chen M., Sonnerborg A. et.al. Distinguishing acute from symptomatic chronic hepatitis С virus infection by site-directed of the HCV structural proteins. // J. of Infectious Deseases. — 1995. — V. 171. — P. 13 561 359.
  162. Zhu Z.Y., Minenkova O., Bellintani F. et.al. In vitro evolution of ligands for HCV-specific serum antibodies. // Biol. Chem. 2000. — V. 381. — P. 245 254.
  163. Zibert A., Kraas W., Meisel H. et.al. Epitope Mapping of antibodies directed against hypervariable region 1 in acute self-limiting and chronic infections due to hepatitis С virus. // Journal of Virology. 1997. — V. 71, N 5. -P. 4123−4127.
  164. Zibert A., Kraas W., Ross R.S. et.al. Immunodominant B-cell domains of hepatitis С virus envelope proteins El and E2 identified during early and late time points of infection. // J. Hepatol. 1999. — V. 30, N 2. — P. 177−184.
  165. Zibert A., Meisel H., Kraas W. et al. Early antibody response against hypervariable region 1 is associated with acute self-limiting infections of hepatitis С virus. // Hepatology. 1997. -V. 25. — P. 1245−1249.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!