Роль гистамина, рецепторов Н1, Н2, Н3/4-типа и оксида азота в регуляции синтеза IgE в норме и при поллинозе

Распространенность аллергических заболеваний во всем мире неуклонно растет, представляя собой серьезную социальную, эпидемиологическую и медицинскую проблему. Ежегодно более 20% населения обращаются за медицинской помощью с клиническими проявлениями аллергических заболеваний. За последние 20−30 лет во всем мире наблюдается устойчивый рост распространенности атопической астмы: в США ее частота достигла 9−11%, в Германии — 7,3−9,3%, в Англии — 10−15%. Массовый характер принимают поллинозыаллергические заболевания, вызываемые пыльцой растений. Вследствие высокой концентрации в воздухе пыльцы сорных трав наиболее высокие показатели заболеваемости пыльцевой аллергией отмечены в СевероКавказском регионе, [М.М Тлехас, В. В. Григорьева, Т. В. Сундатова и соавт., 2002]. Значимость данной проблемы позволяет считать одной из важнейших задач современной медицины разработку эффективных способов диагностики, лечения и профилактики данной патологии. Вместе с тем, их разработка невозможна без расшифровки тонких механизмов развития реакций гиперчувствительности на молекулярном уровне.

Известно, что одним из важнейших медиаторов аллергического воспаления, лежащего в основе ринита, астмы и др., является гистамин, осуществляющий свои эффекты через соответствующие рецепторы различных типов. На сегодняшний день известно четыре типа гистаминовых рецепторов: Hl, Н2, НЗ и Н4 [Hill S. J, Ganellin C. R, Timmerman H. et al., 1997; Jutel M., Watanabe T., Klunker S., et al., 2001; Akdis, C.A., Blaser К., 2003].

Вместе с тем, гистамин, как и ряд других медиаторов нецитокиновой природы, является, не только медиатором ранней фазы воспаления, но и возможным важнейшим фактором, участвующим в регуляции синтеза IgE, гиперпродукция которого лежит в основе аллергических заболеваний преимущественно 1 типа. В частности, известно, что через Н1 рецепторы осуществляется положительная, а через Н2 — негативная регуляция синтеза IgE [Sachs В., Herti М., Merk H.F., 2000]. Наряду с этим, было показано, что гистамин и блокада гистаминовых рецепторов различных типов специфическими антагонистами по-разному модулируют синтез IgE у здоровых доноров и больных аллергическим ринитом [R.Khanferyan et al., 2000;2002, Н. Котова, 2000, 2001].

В последнее время стало известно, что в регуляции синтеза IgE принимают участие не только Н1- и Н2-рецепторы, но и НЗ-рецепторы. Это подтверждается данными о том, что специфический агонист НЗ-рецепторов (R-метилгистамин) и специфический НЗ-антагонист (ципроксифан) приводят к модуляции синтеза IgE у здоровых лиц и у больных атопией и лимфопролиферативными заболеваниями [R.Khanferyan, N. Riger, 2002].

Этот новый класс гистаминовых рецепторов (НЗ) изначально был обнаружен на пресинаптических рецепторах ЦНС, а в последующем — на мононуклеарах периферической крови человека, что доказывается, в частности, методами, основанными на геномной технологии [Y Zhu, D. Michalovich, Н. Wu, 2001].

В последствие был идентифицирован новый класс гистаминовых рецепторов, экспрессируемый преимущественно на лейкоцитах — Н4, а так же установлено его существенное значение в активации лимфоцитов, эозинофилов и тучных клеток [K.Takeshita, K. Sakai, K.B.Bacon, F. Gantner 2003].

Между тем в настоящее время дискутируется вопрос об идентичности НЗи Н4-рецепторов: имеется мнение, что разница между ними условна, как и для рецепторов других типов, и зависит от локализации в различных тканях и клетках, что доказывается, в частности, наличием общих антагонистов, которые в научной литературе имеют обозначение НЗ/Н4 антагонисты [H.K.Takahashi, T. Morichika, H. Iwagaki, 2003] Однако другие исследователи, основываясь на отсутствии ожидаемого ответа искусственно клонированных ими рецепторов на ряд Hl, Н2, НЗ агонистов, утверждают, что эта разница существует. Вместе с тем ими не отрицается блокада данных рецепторов известными НЗ/Н4-антагонистами, как и гомология в их молекулярном строении и в структурной организации кодирующих генов [M.O'Reilly, R. Alpert, SJenkinson, 2002]. Однако в связи с недостаточной изученностью роли НЗ/4-рецепторов в регуляции синтеза IgE и очевидной значимости этого феномена в аллергическом воспалении, представляется целесообразным углубленное исследование данного вопроса.

Кроме того в настоящее время недостаточно изучены механизмы влияния гистамина и блокады гистаминовых рецепторов на синтез IgE, в частности, вовлечения в гистамин-опосредованную регуляцию синтеза IgE важнейших IgE-регуляторных цитокинов (интерлейкинов 4, 13 и гамма-интерферона). Научная литература последних лет позволяет считать, что цитокиновая регуляция при астме не ограничивается ими: полноценными участниками таковой могут быть ИЛ-25, ИЛ-17, диагностическое определение которых еще не полностью вошло в клиническую практику [M.M.Fort, J. Cheung, D. Yen et ail, 2001; S.D.Hurst, T. Muchamuel, D.M.Gorman, 2002].

Наряду с гистамином, при атопических заболеваниях выяснена роль оксида азота (NO), как важнейшего медиатора аллергического воспаления. Известно, например, что продукция NO увеличивается при обострении атопической бронхиальной астмы (АБА) пропорционально нарастанию тяжести заболевания. Основным ферментом синтеза NO является NOS, синтез которой при АБА увеличивается во многих клетках, в том числе — в эпителиоцитах бронхов, альвеолярных макрофагах, альвеолоцитах, тучных клетках, гладких миоцитах мелких бронхов [В.А. Невзорова и соавт., 1998].

В доступной литературе не обнаружена информация о роли NO в регуляции синтеза IgE. Но поскольку ингибитор NO-синтазы ведет к торможению выработки гистамина тучными клетками [A.Daikonya, S. Katsuki, J.B.Wu, S. Kitanaka, 2002], NO можно считать медиатором, опосредующим продукцию гистамина клетками-мишенями аллергической реакции немедленного типа. При этом известно, что эффекты гистамина, в том числе и вазодилятационные, опосредованные Н1-рецепторами, индуцированы активацией NOS, синтезом NO и вторичного медиатора — цГМФ [E.Borda, G. Stranieri, L. Sterin-Borda, 2002; U. Schaefer et al., 2003].

Вместе с тем, данные о проапоптотическом действии NO [Б.Брюне, К. Сандау, А. фон Кнетен, 1998] и уникальности его роли в регуляции различных биологических процессов обуславливают интерес к изучению роли NO в патогенезе аллергического процесса и его возможного влияния на синтез IgE. При этом представляется целесообразным проведение сравнительного изучения патогенетической роли двух наиболее значимых медиаторов нецитокиновой природы — оксида азота и гистамина, а также их взаимовлияния, в механизмах регуляции продукции IgE.

Цель исследования: изучить роль гистамина, рецепторов гистамина Н1, Н2, НЗ/4-типа и оксида азота в регуляции синтеза^Е у здоровых лиц и при атопическом заболевании.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительное исследование влияния гистамина и блокады рецепторов гистамина различных типов (HI, Н2, НЗ/4) на синтез IgE мононуклеарами периферической крови (МГЖ) здоровых лиц и больных поллинозом in vitro.

2. Провести сравнительное исследование влияния гистамина и блокады рецепторов гистамина различных типов (HI, Н2, НЗ/4) на синтез IgE-регуляторных цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-13 и ИФН-у) МГЖ in vitro у здоровых лиц и поллинозом.

3. Изучить влияние гистамина и блокады рецепторов гистамина различных типов (HI, Н2, НЗ/4) на синтез оксида азота МПК in vitro. Исследовать уровень метаболитов оксида азота при блокаде и активации рецепторов гистамина различных типов у изучаемой группы больных и у здоровых лиц.

4. Изучить роль оксида азота в продукции IgE МПК больных амброзийным поллинозом и здоровых лиц in vitro.

Научная новизна исследования:

В данной работе впервые:

1. Проведено сравнительное исследование влияния гистамина и блокады рецепторов гистамина различных типов (HI, Н2, НЗ/4) на синтез in vitro IgE у здоровых лиц и больных поллинозом.

2. Проведено сравнительное исследование влияния гистамина и блокады рецепторов гистамина различных типов (HI, Н2, НЗ/4) на синтез IgE-регуляторных цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-13 и ИФН-у) in vitro у здоровых лиц и больных поллинозом.

3. Изучено влияние гистамина и блокады рецепторов гистамина различных типов (HI, Н2, НЗ/4) на синтез оксида азота in vitro. Проведено сравнительное исследование уровня метаболитов оксида азота при блокаде и активации рецепторов гистамина различных типов у изучаемой группы больных и у здоровых лиц, а также проанализированы возможные механизмы изменения уровня синтеза N0 в изучаемых условиях.

4. Показана роль оксида азота в регуляции продукции IgE в культурах МПК периферической крови больных амброзийным поллинозом. Проведена сравнительная оценка особенностей синтеза N0 в культурах МПК и его места в регуляции IgE-продукции у здоровых доноров и больных поллинозом in vitro.

Теоретическая значимость исследования. Полученные факты углубляют представления о роли гистамина, рецепторов гистамина различных типов (HI, Н2, НЗ/4) и оксида азота в регуляции синтеза IgE у здоровых лиц и при IgE-зависимых аллергических заболеваниях.

Практическая значимость исследования. Выявленные механизмы регуляции синтеза IgE, опосредованные медиаторами нецитокиновой природы (гистамином, оксидом азота), у больных амброзийным поллинозом и их отличительные особенности по сравнению со здоровыми лицами позволяют судить о механизмах формирования IgE-зависимых аллергических заболеваний. Полученные данные могут являться основой поиска новых подходов к лечению атопических заболеваний, а также поводом для пересмотра роли уже используемых в терапии данной патологии лекарственных средств (антигистаминных препаратов).

Основные положения, выносимые на защиту.

1) Рецепторы гистамина различного типа (Н1, Н2, НЗ/4) участвуют в^{Е-регуляторных} эффектах гистамина. Усиление синтеза^Е у больных поллинозом и у здоровых доноров, вызванное низкими концентрациями гистамина (10″ 8М) опосредовано Н1-рецепторами, а угнетающее влияние высоких концентраций гистамина (10″ 5М) на синтез данного класса иммуноглобулина опосредовано влиянием на Н2- и НЗ/4-рецепторы.

2) Гистамин модулирует синтез 1§-Е путем влияния на продукцию^{Е-регуляторных} цитокинов:

2.1 .Блокада рецепторов гистамина Н1, Н2, НЗ/4-типа у здоровых лиц устраняет вызванное гистамином подавление продукции ИФН-у. У больных поллинозом блокада НЗ/4-рецепторов усиливает угнетающее влияние гистамина на синтез ИФН-у.

2.2.Высокие концентрации гистамина (10″ 5М) подавляют продукцию ИЛ-4 у здоровых лиц, а в аллерген-индуцированных культурах происходит стимуляция синтеза ИЛ-4. Низкие концентрации гистамина стимулируют синтез ИЛ-4 как у здоровых лиц, так и у больных поллинозом.

2.3.Блокада рецепторов гистамина Н1-типа снижает синтез ИЛ-4. У больных поллинозом, в отличие от здоровых лиц блокада Н2 рецепторов устраняет супрессирующее влияние высоких концентраций гистамина на синтез ИЛ-4. Антагонист НЗ/4-рецепторов усиливает синтез ИЛ-4.

2.4.Синтез ИЛ-13 под влиянием антагониста Ш-типа снижается. Синтез ИЛ-13 у больных поллинозом под влиянием антагонистов Н2 и НЗ/4-рецепторов усиливается.

3) Влияние гистамина и антагонистов рецепторов гистамина всех типов на синтез N0 разнонаправлено и зависит от соотношения цитокинов.

4) Синтез 1§-Е и синтез N0 находятся в обратно-пропорциональной зависимости.

выводы.

1. Гистамин модулирует IgE-синтез в спонтанных культурах МПК здоровых лиц и больных атопическим заболеванием:

1.1 Высокие концентрации гистамина (10″ 5М) достоверно подавляют синтез IgE у здоровых лиц и у больных поллинозом в стадии ремиссии, а низкие концентрации (10~8М) — стимулируют IgE-антителогенез как в норме, так и более выражено у больных поллинозом.

1.2 В аллерген-индуцированных культурах мононуклеаров гистамин в высоких концентрациях (10″ 5М) стимулирует рост синтеза IgE относительно исходного уровня.

2. Рецепторы гистамина различного типа (HI, Н2, НЗ/4) участвуют в IgE-регуляторных эффектах гистамина. В частности усиление синтеза IgE у больных атопическим заболеванием и у здоровых доноров, вызванное гистамином опосредовано HI-рецепторами, а угнетающее влияние гистамина на синтез данного класса иммуноглобулина опосредовано влиянием на Н2- и НЗ/4-рецепторы.

3. Влияние гистамина на синтез IgE in vitro является цитокин-опосредованным процессом:

3.1 Высокие концентрации гистамина (10″ 5М) снижают уровень синтеза ИЛ-4 МПК как у атопиков в спонтанных культурах, так и более выражено у здоровых лиц. В условиях стимуляции аллергеном МПК больных поллинозом воздействие высоких концентраций гистамина (10″ 5М) не приводит к снижению синтеза ИЛ-4.

3.2 Высокие концентрации гистамина (10″ 5М) снижают уровень синтеза ИЛ-13 в спонтанных культурах МПК больных поллинозом и повышают в аллерген-стимулированных культурах. Q.

3.3 Низкие дозы гистамина (10″ М) достоверно стимулируют синтез ИЛ-4 и ИЛ-13 как в спонтанных культурах МПК больных поллинозом, так и при стимуляции аллергеном.

3.4 Гистамин дозозависимо снижает уровень синтеза ИФН-у как у здоровых лиц, так и, более выражено, у больных поллинозом в спонтанных и аллерген-стимулированных культурах МПК.

4. Влияние гистамина на синтез^{Е-регуляторных} цитокинов опосредовано рецепторами гистамина различного типа (Н1, Н2, НЗ/4):

4.1 Стимулирующие синтез ИЛ-4 (у здоровых и у атопиков) и ИЛ-13 (у атопиков) эффекты гистамина опосредованы Н1-рецепторами, что соответствует данным о опосредованности стимуляции гистамином синтеза 1§-Е рецепторами этого класса. Тогдак как супрессирующие синтез ИЛ-4 и ИЛ-13 эффекты гистамина опосредованы Н2 и НЗ/4-рецепторами.

4.2 Блокада Н1-рецепторов МПК здоровых лиц устраняет эффект дозозависимого подавления синтеза ИФН-у гистамином. У больных поллинозом в условиях блокады Н1-рецепторов данный эффект сохраняется, однако в меньшей степени, чем без воздействия Н1-блокады.

4.3 Блокада Н2-рецепторов устраняет супрессирующее влияние высоких доз гистамина на синтез ИФН-у у здоровых лиц, у атопиков данная супрессия сохраняется.

4.4 У здоровых лиц блокада НЗ/4-рецепторов ведет к отмене супрессирующего влияния гистамина на синтез данного цитокина и росту синтеза ИФН-у. Тогда как у больных поллинозом как в спонтанных, так и в стимулированных культурах МПК блокада НЗ/4 рецепторов усиливает дозозависимое подавление гистамином ИФН-у.

5. Синтез 1§-Е и синтез N0 в значительной мере взаимосвязаны и эти взаимоотношения носят обратно-пропорциональную зависимость. Так супрессирующее влияние высоких доз гистамина (10″ 5М) на синтез в спонтанных культурах МПК больных поллинозом и здоровых лиц сопровождается повышением уровня синтеза N0, индуцированного соответствующими цитокинами. Тогда как в аллерген-стимулированных культурах исчезновение эффекта супрессии синтеза 1§-Е высокими дозами гистамина (10″ 5М) сопровождается снижением синтеза N0.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

В последние десятилетия отмечен наибольший рост распространенности^{Е-зависимых} аллергических заболеваний. Ежегодно 20% населения Земного шара обращаются за медицинской помощью с клиническими проявлениями аллергических заболеваний, наиболее часто из которых встречаются атопические заболевания дыхательных путей — поллиноз и астма [М.М.Тлехас и соавт., 2002]. Значимость данной проблемы делает одной из важнейших задач современной медицины разработку эффективных способов диагностики, лечения и профилактики данной патологии. Вместе с тем, таковая невозможна без выявления тонких механизмов развития реакций гиперчувствительности на молекулярном уровне.

Как известно, основную роль в патогенезе иммунной стадии атопического воспаления, и, в частности, воспаления бронхов при атопической бронхиальной астме, играет цитокинопосредованная гиперпродукция иммуноглобулинов класса Е. Огромный опыт изучения цитокинов при атопических аллергических заболеваниях свидетельствует о бесспорной роли ИЛ-4 и ИФН-у в регуляции синтеза [Н.М.Бережная, 2002]. Так же известно, что ИЛ-13, как и ИЛ-4, индуцирует синтез 1§-Е, хотя гомология этих цитокинов не превышает 30%. О том, что сходство эффектов не подразумевает идентичности рецепторов для данных цитокинов свидетельствуют данные об отсутствии влияния ИЛ-13 на Т-клетки человека, несущие ИЛ-4Яе, и не имеющие рецептора для ИЛ-13 [И.С.Гущин, 2000; БХеуу, С-Кпвгойк, С. Неиззег, 1997].

Вместе с тем известно, что гистамин, как и ряд других медиаторов нецитокиновой природы, является не только медиатором ранней фазы воспаления, но и важнейшим фактором, участвующим в регуляции синтеза иммуноглобулина Е (1§-Е), гиперпродукция которого лежит в основе аллергического ринита и астмы [С.А.Котова и соавт., 1995]. Так преимущественно через HI-рецепторы осуществляется положительная регуляция, а через Н2 — негативная регуляция синтеза IgE [B.Sachs et all, 2000]. В последнее время стало известно, что не только HIи Н2-рецепторы принимают участие в регуляции синтеза IgE, но и НЗ/4-рецепторы [R.Khanferyan, N. Riger, 2002]. С другой стороны известно, что медиатором, опосредующим стимуляцию выработки гистамина тучными клетками является оксид азота (NO) [A.Daikonya et all, 2002], эффекты которого в ходе аллергической воспалительной реакции опосредованы через HI-рецепторы и контролируются активностью NO-синтазы (NOS) [E.Borda, G. Stranieri, L. Sterin-Borda, 2002; U. Schaefer, A. Schneider, C. Rudroff, E. Neugebauer, 2003].

В связи с недостаточной изученностью роли гистамина и блокады гистаминовых рецептов в регуляции синтеза IgE, механизмов гистамин-опосредованного синтеза важнейших IgE-регуляторных цитокинов (интерлейкинов 4, 13 и гамма-интерферона), а роли оксида азота в регуляции синтеза IgE, нами было проведено исследование данных процессов в системе in vitro с МГЖ больных поллинозом и практическиздоровых лиц из числа доноров. Критериями включения субъектов в клиническую группу было наличие у больного в возрасте от 19 до 37 лет поллиноза в стадии ремиссии, а также отсутствие интеркуррентных заболеваний и курения.

Подбор однородной группы больных аллергическими заболеваниями проводили с учетом нозологии и степени тяжести при обострении заболевания (среднетяжелая астма и аллергический риноконъюнктивит при изолированной сенсибилизации к аллергену амброзии), а также уровня синтеза общего IgE при обострении поллиноза и исходный уровень его в период ремиссии. Так при обострении поллиноза содержание общего IgE составило 426,65+/- 22,0 МЕ/мл., а его уровень в ремиссию — 135,15+/-5,8 МЕ/мл.

Диагноз «Поллиноз: среднетяжелая астма и аллергический риноконъюнктивит при изолированной сенсибилизации к аллергену амброзии» устанавливался в соответствии с международными рекомендациями [Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы, 2002].

Поскольку изучение уровня ИЛ-4 и других IgE-регуляторных цитокинов может дать объективную информацию только в ответ на специфическую стимуляцию лимфоцитов [Н.М.Бережная, 2002], мы посчитали целесообразным проводить изучение механизмов синтеза IgE в условиях культивирования мононуклеаров периферической крови больных атопией в стадии ремиссии и при модуляции обострения in vitro с помощью специфического антигена (аллергена амброзии).

Изучая дозозависимый пролиферативный ответ на пыльцевые аллергены (Ставропольский НИИ вакцин и сывороток, 10 000 PNU в 1 мл — ЮОмкг белкового азота в 1 мл), Бережная Н. М. с соавторами определила оптимальную дозу аллергена для специфической стимуляции в реакции бласттрансформации В-лимфоцитов: 0,2 мкг/мл в пересчете на белковый азот. При этом было показано, что под влиянием аллергена признаки активации бласттрансформации B-лимфоцитов (плазмоциты и иммунобласты) аллергиков in vitro отмечаются уже на 2 сутки культивирования, достигая максимума на 4 сутки культивирования и несколько снижаясь — к 6 суткам. Та же кинетика, но на более низком уровне характерна и для спонтанных культур B-лимфоцитов больных поллинозом. Надо отметить, что при стимуляции неспецифическими митогенами (липополисахарид, декстрана сульфат, митоген лаконоса), пролиферация B-лимфоцитов при поллинозе достигает соответствующего уровня лишь к 6 суткам [Н.М.Бережная и соавт., 1997]. У здоровых лиц кинетика ответа лимфоцитов менее выражена и достигает должного уровня на 6−9 сутки. В связи с изложенным мы изучали характер синтеза.

IgE на 6 сутки в спонтанных культурах МПК и при стимуляции причинным аллергеном (в концентрации 15 PNU/ml, при условии кожного ответа в скарификационных пробах), считая данный процесс модуляцией аллергического обострения in vitro. Поскольку использование аллергена амброзии в качестве стимулирующего бласттрансформацию лимфоцитов агента высоко специфично, исследование МПК здоровых доноров производилось только в спонтанных культурах.

Для выявления роли гистамина в регуляции синтеза IgE была использована модель селективной блокады рецепторов Hl-, Н2-, НЗ/4-специфичности на фоне модулирующего действия их селективного агониста — гистамина в высокой (10″ 5М) и низкой (10″ 8М) концентрации [Н.В.Котова, 2002], а также с учетом предсуществующего уровня гистамина в системе МОК (специфическое связывание, поглощение), — без введения гистамина извне [С.А.Котова и соавт., 1995]. Для избирательной блокады HIрецепторов гистамина был использован селективный Н1-блокатор лоратадин, а для селективной блокады Н2-рецепторов гистамина применялся Н2-блокатор ранитидин в концентрации 10~5М. Для селективной блокады НЗ/4-гистаминовых рецепторов применялся блокатор НЗ/4 специфический блокатор FUB 181 hydrogenmaleate в концентрации 10″ 5 М. Концентрации были подобраны на основании предварительно проведенных нами исследований с использованием диапазона концентраций данных блокаторов от 10'5М до 10″ 8 М [R.Khanferyn, D. Lesik, 2004].

Для определения уровня метаболитов оксида азота (N0) в супернатантах МПК определялось содержание конечного стабильного продукта окисления окиси азота (NO), нитрит-аниона (NO2″), а уровень цитокинов в супернатантах МПК изучался с помощью стандартных тест систем для иммуноферментного специфического определения уровня человеческих IL4, IL13, интерферон гамма фирмы BioSource.

Статистическую обработку данных проводили с помощью программы «Statiatica 6.0 for Windows» в блоке непараметрической статистики и с помощью критерия Вилкоксона.

В начальной стадии исследований было показано, что уровень спонтанного синтеза IgE у больных поллинозом в ремиссию достоверно выше по сравнению со здоровыми лицами (р<0,01). В аллерген-индуцированных культурах МПК уровень синтеза IgE возрастает в 2 раза по сравнению со спонтанным (р<0,01) и более чем в 5 раз — по сравнению с таковым у здоровых лиц (р<0,01). Выявлено, что высокие концентрации гистамина (10″ 5М) достоверно подавляют синтез IgE у здоровых лиц (р<0,01) и у больных поллинозом в спонтанных культурах (р<0,05). В аллерген-индуцированных культурах МПК гистамин в высоких концентрациях (10″ 5М) увеличивает синтез IgE относительно исходного уровня (р<0,05). Низкие концентрации гистамина (10″ 8М) стимулируют синтез IgE МПК здоровых лиц (р<0,01). У больных поллинозом эта тенденция более выражена: в спонтанных культурах МПК гистамин в концентрации 10″ 8 М повышает синтез IgE в 1,8 раз (р<0,01), в аллерген-стимульрованных — в 1,5 раза относительно соответствующего исходного уровня (р<0,01).

Показано, что блокада HI-рецепторов МПК отменяет стимулирующее о действие низких концентраций гистамина (10″ М) на синтез IgE. У здоровых лиц уровень синтеза IgE в данных условиях снижается в 1,17 раз относительно уровня при изолированном воздействии низких концентраций гистамина (р<0,01). У больных поллинозом в спонтанных культурах МПК блокада HI-рецепторов в условиях воздействия низких о концентраций гистамина (10* М) снижает синтез IgE в 2Д7 раз (р<0,01) и в стимулированных аллергеном культурах — в 2,58 раз (р<0,01) относительно соответствующего уровня при изолированном воздействии низких концентраций гистамина. Таким образом, стимуляция синтеза IgE МПК о низкими концентрациями гистамина (10″ М) как у больных атопическим заболеванием, так и у здоровых доноров, очевидно, обусловлена Н1-рецепторами.

Блокада Н2-рецепторов при воздействии гистамина в концентрации 10″ 8 М повышает уровень синтеза^Е МПК здоровых лиц относительно синтеза при изолированном воздействии низких концентраций гистамина в 1,13 раза (р<0,05). У больных поллинозом в спонтанных культурах МПК блокада Н2-рецепторов при воздействии гистамина в концентрации 10″ М не дает достоверного изменения синтеза 1§-Е относительно изолированного воздействия низких концентраций гистамина. Н2-блокада без введения гистамина извне также не ведет к изменению синтеза^Е МПК больных поллинозом относительно исходного уровня. Тогда как при стимуляции МПК больных аллергеном амброзии блокада Н2-рецепторов при воздействии гистамина в концентрации 10'8М ведет к повышению уровня синтеза 1§-Е в 1,17 раз относительно изолированного воздействия низких концентраций гистамина (р<0,05) и относительно исходного уровня в 1,78 раз (р<0,01). Н2-блокада без введения гистамина извне в аллерген-стимулированных культурах повышает синтез^Е в 1,57 раз относительно исходного уровня (р<0,01).

Блокада Н2-рецепторов, как и НЗ/4-рецепторов ведет к устранению супрессирующего влияния высоких концентраций гистамина (10″ 5М) как в культурах МПК здоровых лиц, так и в спонтанных культурах больных поллинозом (р<0,01 относительно соответствующего уровня в условиях воздействия высоких концентраций гистамина без блокады Н-рецепторов).

В условиях блокады Н2-рецепторов и воздействия гистамина в концентрации 10″ 5 М уровень синтеза 1§-Е в аллерген-стимулированных культурах МПК больных поллинозом повышается относительно исходного уровня в 1,34 раза (р<0,01), однако не имеет достоверного отличия относительно соответствующего уровня в условиях воздействия высоких концентраций гистамина (10″ 5М) без блокады Н-рецепторов.

В условиях блокады НЗ/4-рецепторов и воздействия гистамина в концентрации 10″ 5 М уровень синтеза в аллерген-стимулированных культурах МПК больных поллинозом повышается как относительно исходного уровня, — в 3,83 раза (р<0,01), так и относительно соответствующего уровня в условиях воздействия высоких концентраций гистамина (10″ 5М) без блокады Н-рецепторов, — в 3 раза (р<0,01).

Таким образом, угнетающее влияние гистамина на синтез опосредовано влиянием на Н2- и НЗ/4-рецепторы как у здоровых лиц, так и у больных атопическим заболеванием. Причем при стимуляции МПК аллергеном роль НЗ/4-рецепторов в отрицательной регуляции синтеза^Е возрастает.

При определении^{Е-регуляторных} цитокинов в супернатантах клеточных культур МПК, исходный уровень синтеза ИЛ-4 в культурах МПК больных поллинозом даже в состоянии ремиссии заболевания оказался достоверно выше (р<0,01) такового у здоровых лиц, а уровень ИЛ-13 в спонтанных культурах МПК здоровых доноров не определялся в связи с его крайне низкой концентрацией (менее 5 нг/мл), тогда как у больных поллинозом в стадии ремиссии в спонтанных культурах он выявляется. Исходный уровень ИФН-у у больных поллинозом в ремиссии в спонтанных культурах МПК достоверно не отличался от такового у здоровых лиц. Обнаруженное изменение соотношения цитокинов подтверждает существующие данные о роли этих факторов в повышении синтеза МПК при атопических заболеваниях. Высокие концентрации гистамина (10″ 5М) снижают уровень синтеза ИЛ-4 МПК как у здоровых лиц (в 1,68 разар<0,01 относительно соответствующего исходного уровня), так и в спонтанных культурах больных поллинозом, но у последних менее выражено (в 1,36 разар<0,01 относительно исходного уровня). В условиях стимуляции аллергеном МПК больных поллинозом воздействие высоких концентраций гистамина (10″ 5М) не приводит к снижению синтеза ИЛ-4. Высокие концентрации гистамина (10″ 5М) снижают уровень синтеза ИЛ-13 в спонтанных культурах МПК больных поллинозом (р<0,01 относительно исходного уровня), и повышают в аллерген-стимулированных культурах (р<0,01 относительно соответствующего исходного уровня в стимулированных культурах). о.

Достоверного влияния низких концентраций гистамина (10″ М) на синтез ИЛ-4 у здоровых лиц не выявлено. В культурах МПК больных поллинозом как в спонтанных, так и при стимуляции аллергеном низкие концентрации о гистамина (10″ М) достоверно стимулируют синтез ИЛ-4, а также ИЛ-13 (р<0,01 относительно соответствующих исходных уровней). Гистамин дозозависимо снижает уровень синтеза ИФН-у как у здоровых лиц (р<0,01), так и, более выражено, у больных поллинозом и в спонтанных культурах МПК (р<0,01) и в условиях стимуляции причинным аллергеном (р<0,01).

При блокаде Н1-рецепторов у здоровых лиц имеется тенденция к снижению синтеза ИЛ-4 МПК (р<0,05). У больных поллинозом в спонтанных культурах МПК блокада Н1-рецепторов снижает синтез ИЛ-4 в 1,57 раза (р<0,01 относительно исходного уровня), в условиях стимуляции аллергеном — в 1,33 раза (р<0,01 относительно соответствующего исходного уровня). Уровень синтеза ИЛ-13 как в спонтанных культурах МПК больных, так и при стимуляции аллергеном в условиях блокады Н1-рецепторов достоверно снижается (р<0,01). При блокаде Н1-рецепторов МПК здоровых лиц имеется достоверная тенденция к росту синтеза ИФН-у (р<0,01) тогда как у больных поллинозом ни в спонтанных, ни в стимулированных культурах МПК Н1-' блокада не влияет на синтез ИФН-у. Высокие концентрации гистамина (10″ 5М) в условиях блокады Н1-рецепторов в культурах МПК здоровых доноров не изменяют уровня синтеза ИЛ-4 относительно уровня при изолированном воздействии данных концентраций гистамина. В культурах МПК больных поллинозом как в спонтанных, так и при стимуляции аллергеном высокие концентрации гистамина (10″ 5М) в условиях блокады Н1-рецепторов достоверно снижают уровень синтеза ИЛ-4 как относительно исходного (р<0,01), так и относительно уровня при изолированном воздействии данных концентраций гистамина (р<0,01). Таким образом, в условиях блокады Н1-рецепторов супрессирующий эффект высоких концентраций гистамина на синтез ИЛ-4 у здоровых лиц сохраняется, в спонтанных культурах МПК больных поллинозом данный эффект усиливается, а в аллерген-стимулированных культурах происходит отмена стимуляции ИЛ-4 данными концентрациями гистамина. Те же тенденции наблюдаются и при определении уровня ИЛ-13 в МПК больных поллинозом в данных условиях. Уровень синтеза ИЛ-4 МПК здоровых лиц при воздействии низких концентраций гистамина (10″ 8М) в условиях блокады Н1-рецепторов не отличается от соответствующего уровня при блокаде Н1-рецепторов без введения гистамина, т. е. остается сниженным относительно исходного (р<0,01), те же тенденции характерны и для МПК больных поллинозом как в спонтанных, так и в стимулированных культурах. Таким образом, блокада Н1-рецепторов ведет к устранению стимулирующего эффекта низких концентраций гистамина (10″ 8М) на синтез ИЛ-4. Те же тенденции наблюдаются и при анализе уровня ИЛ-13 в данных условиях. Таким образом, стимулирующие синтез ИЛ-4 и ИЛ-13 эффекты гистамина опосредованы Н1-рецепторами, что соответствует данным об опосредованности усиления синтеза^Е рецепторами гистамина этого класса. Блокада Н1-рецепторов МПК здоровых лиц устраняет эффект дозозависимого подавления синтеза ИФН-у гистамином. У больных поллинозом в условиях Н1-блокады данный эффект сохраняется, однако в меньшей степени, чем без воздействия блокаторов.

Блокада Ш-рецепторов МПК здоровых лиц и МПК в спонтанных культурах больных поллинозом не приводит к достоверному изменению в синтезе ИЛ-4, тогда как при стимуляции аллергеном МПК больных поллинозом блокада Н2-рецепторов достоверно повышает синтез ИЛ-4 в 1,66 раза (р<0,01). Блокада Н2-рецепторов МПК здоровых лиц не влияет на супрессирующий синтез ИЛ-4 эффект высоких концентраций гистамина (10″ 5М), но устраняет его у больных поллинозом в спонтанных культурах МПК. В аллерген-стимулированных культурах МПК больных поллинозом в условиях блокады Н2-рецепторов эффект повышения синтеза ИЛ-4 высокими концентрациями гистамина сохраняется. Эффект стимуляции о синтеза ИЛ-4 низкими концентрациями гистамина (10″ М) в условиях блокады Н2-рецепторов сохраняется как у здоровых лиц, так и у больных атопическим заболеванием. В аллерген-стимулированных культурах синтез ИЛ-4 в данных условиях значительно возрастает — в 1,35 раза относительно уровня при воздействии низких доз гистамина без блокады рецепторов. В культурах МПК больных поллинозом в данных условиях наблюдается сходная динамика в изменении уровня синтеза ИЛ-13. Блокада Н2-рецепторов устраняет супрессирующее влияние высоких концентраций гистамина на синтез ИФН-у у здоровых лиц, у больных поллинозом данная супрессия сохраняется.

Блокада НЗ/4-рецепторов ведет к достоверному росту синтеза ИЛ-4 как у здоровых, так и более выражено у больных поллинозом (р<0,01). Кроме того, НЗ/4-блокада устраняет описанные выше супрессирующие синтез ИЛ-4 эффекты гистамина и еще более усиливает стимулирующие, сходные изменения происходят и с синтезом ИЛ-13 в соответствующих условиях. У здоровых лиц блокада НЗ/4-рецепторов ведет к росту синтеза ИФН-у и отмене супрессирующего влияния гистамина на синтез данного цитокина. Тогда как у больных поллинозом как в спонтанных, так и в стимулированных культурах МГЖ блокада НЗ/4 рецепторов усиливает дозозависимое подавление гистамином ИФН-у.

При изучении уровня синтеза N0 МПК здоровых лиц и больных поллинозом и в результате корреляционного анализа было установлено, что в культурах МПК здоровых лиц имеется выраженная обратная корреляционная связь между уровнем N0 и IgE (г=-0,79). В спонтанных культурах МПК имеется отрицательная корреляционная зависимость между уровнем N0 и IgE средней силы (г=-0,6), при стимуляции аллергеном амброзии отрицательная корреляционная связь более выражена (г=-0,76). Результаты корреляционного анализа позволяют считать, что синтез IgE и синтез N0 в значительной мере взаимообусловлены и эти взаимоотношения носят обратную зависимость. Наряду с этим, эффект супрессирующего влияния высоких концентраций гистамина (10″ 5М) на синтез IgE в спонтанных культурах МПК больных поллинозом и здоровых лиц может иметь отношение и к повышению* синтеза NO, индуцированного соответствующими цитокинами. Тогда как в аллерген-стимулированных культурах исчезновение этого эффекта сопровождается снижением синтеза N0. Изменения соотношения IgE-регуляторных цитокинов соответствующим образом изменяют синтез NO (повышение уровня ИЛ-4, ИЛ-13 — супрессирует, тогда как ИФН-уусиливает, что соответствует известным фактам о регуляции синтеза NO).

Анализ полученных результатов позволяет считать, что регуляторное влияние гистамина на синтез IgE связано с определенным воздействием на цитокиновый баланс, опосредованным рецепторами гистамина различного типа, в том числе и НЗ/4-типа. В свою очередь, цитокиновый баланс регулирует индукцию NOS и влечет за собой изменения в синтезе N0, который, по-видимому, играет важную роль не только в аллергическом воспалении, но и в регуляции синтеза IgE.