Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Полный химический синтез зервамицинов IIВ, меченных стабильными изотопами, с целью изучения их каналообразующих свойств

Диссертация: Полный химический синтез зервамицинов IIВ, меченных стабильными изотопами, с целью изучения их каналообразующих свойств
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Представленная работа является частью исследований, проводимых в Московской Государственной академии тонкой химической технологии им. М. В. Ломоносова на кафедре биотехнологии по теме № 1Б-22−866 «Разработка методов получения природных и синтетических амфифильных веществ и их использование как компонентов лекарственных средств и инструментов моделирования мембранных биологических процессов… Читать ещё >

Полный химический синтез зервамицинов IIВ, меченных стабильными изотопами, с целью изучения их каналообразующих свойств (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • 1. ВВЕДЕНИЕ
  • 2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР «ПЕПТАИБОЛЫ»
    • 2. 1. Общая характеристика пептаиболов
    • 2. 2. Выделение пептаиболов из культур продуцентов и определение их аминокислотных последовательностей
    • 2. 3. Методы получения модифицированных пептаиболов
      • 2. 3. 1. Микробиологическое получение пептаиболов
      • 2. 3. 2. Химический синтез пептаиболов
      • 2. 3. 3. Химико-ферментативный способ получения пептаиболов
    • 2. 4. Вторичная структура пептаиболов и образование их молекулами ионных каналов в мембранах бактерий
    • 2. 5. Роль некоторых аминокислотных остатков в функционировании пептаиболов
    • 2. 6. Зервамицины
      • 2. 6. 1. Гипотезы о моделях ионных каналов, образуемых молекулами зервамицина IIB
      • 2. 6. 2. Методы получения изотопно меченых зервамицинов
        • 2. 6. 2. 1. Микробиологический синтез меченых зервамицинов
        • 2. 6. 2. 2. Химический синтез меченых зервамицинов
  • 3. ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
    • 3. 1. Синтез меченных стабильными изотопами аминокислот, входящих в состав зервамицина IIB
      • 3. 1. 1. Синтез изотопно меченых глутаминов
      • 3. 1. 2. Синтез 15Ы-меченых а, а-диалкилированных аминокислот (/)-изовалина и 2-аминоизобутановой кислоты)
    • 3. 2. Синтез изотопно меченых зервамицинов
    • 3. 3. Изучение 1-меченого зервамидина IIB с помощью ЯМР-спектроскопии
  • 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
    • 4. 1. Синтез меченных стабильными изотопами аминокислот, входящих в состав зервамидина IIB
    • 4. 2. Синтез изотопно меченых зервамицинов
  • 5. ВЫВОДЫ

Актуальность работы. В настоящее время известно огромное количество антибиотиков различного происхождения и строения. Однако поиск новых антибиотиков и изучение механизмов их действия до сих пор остается актуальной задачей. Это связано с тем, что ко многим из них вырабатывается резистентность и требуется их замена на новые, более эффективные. Кроме того, ряд заболеваний по-прежнему не поддается эффективному лечению известными антибиотиками. На основе знаний механизмов действия антибиотиков химикам удается создавать синтетические и полусинтетические производные природных веществ, обладающие более совершенными фармакологическими свойствами.

Одним из основных классов антибиотиков являются пептидные антибиотики. Это очень большая и разнородная группа природных пептидов, различающихся характером строения пептидной цепи (линейные и циклические), наличием аминокислот сложного и необычного строения и специфических непептидных фрагментов. Пептидные антибиотики также различают по механизму антибактериального действия.

К линейным каналообразующим пептидным антибиотикам относится большая группа линейных пептидных антибиотиков, называемых пептаиболами. Они содержат от 12 до 24 аминокислотных остатков. Для них характерно наличие в пептидной последовательности остатков небелковых а, а-диалкилированных аминокислот, в частности, а-аминоизомасляной кислоты (Aib) и изовалина (Iva), и N-концевого аминоспирта. В связи с этими структурными особенностями они и получили название «пептаиболы» (от английского слова «peptaibols», где aib — от «Aib» иol от «alcohol»). Пептаиболы продуцируются в основном микроскопическими грибами различных видов, штаммов и мутантов рода Trichoderma, Hypocrea, Emericellopsis и др. Пептаиболы способны образовывать потенциалзависимые каналы в цитоплазматических мембранах бактерий, что приводит к нарушению электрохимического баланса мембраны и, как следствие этого, вызывает гибель клетки.

Одним из наиболее изученных представителей пептаиболов является зервамицин IIB. Он представляет собой 16-членный антибиотик, выделяемый из культуры клеток Emericellopsis salmosynnemata, эффективный как против грамположительных, так и грамотрицательных бактерий, но безопасный для эукариотических клеток. В связи с этим он привлекает внимание исследователей как потенциальный лекарственный препарат.

Ac Trp1 lie Gin D-Iva He Thr6 Aib Leu Aib Hyp Gin11 Aib Hyp Aib Pro Phi16.

Структура зервамицина ИВ.

Зервамицин IIB, как и все пептаиболы, образует в мембранах бактерий потенциалзависимые ионные каналы. Однако механизм действия этих каналов до конца ещё не ясен. Для конструирования новых аналогов антибиотика, обладающих улучшенными свойствами (растворимость, устойчивость и т. д), необходимым является выяснение механизма его антибактериального действия, а также определение структурно-функциональных отношений в его молекуле. Согласно существующим на сегодняшний день моделям каналы формируются из агрегатов молекул антибиотика,.

11 13 стабилизированных водородными связями между остатками Gin и Hyp. Однако эти модели, основанные на кристаллической структуре антибиотика и на эмпирических молекулярных расчетах, не дают полных ответов на все вопросы, связанные с функционированием ионных каналов зервамицина ИВ. Исключительно ценную информацию на этот счёт можно получить, исследуя меченные стабильными изотопами образцы антибиотика в фосфолипидных бислоях с помощью изотопно-чувствительной техники, в частности, ЯМР-спектроскопии.

В связи с этим представлялось весьма актуальным синтезировать зервамицин IIB, содержащий стабильные изотопные метки в различных положениях пептидной цепи с целью изучения его структуры с помощью ЯМР-спектроскопии.

Представленная работа является частью исследований, проводимых в Московской Государственной академии тонкой химической технологии им. М. В. Ломоносова на кафедре биотехнологии по теме № 1Б-22−866 «Разработка методов получения природных и синтетических амфифильных веществ и их использование как компонентов лекарственных средств и инструментов моделирования мембранных биологических процессов», в рамках гранта Минобразования РФ № 1М-131-В66 по программе «Фундаментальные исследования в области химических технологий» по теме «Разработка биохимических методов получения стабильно меченых биологически активных веществ и использование их в исследовании функционирования биологических мембран», а также при участии Лейденского университета (Нидерланды) в рамках проекта Нидерландской 6 организации научных исследований (NWO)№ 047.006.009.

Цель работы. Синтез 15N-, 13Си 2Н-меченых глутаминов, 15М-?>-изовалина и 15N-2-аминоизобутановой кислоты, а также полный химический синтез меченных стабильными изотопами зервамицинов IIB с целью исследования структуры зервамидина IIB с помощью ЯМР-спектроскопии.

Научная новизна и практическая ценность работы Разработаны подходы к препаративному синтезу изотопно меченых аминокислот, входящих в состав пептаибольного антибиотика зервамидина IIB. Синтезированы глутамины, содержащие 15N-, 13Си 2Низотопные метки из соответствующих глутаминовых кислот с помощью фермента глутаминсинтетазы с выходами 70−80%. Получены |5Ы-изовалин и 15N-2-аминоизобутановая кислота с выходами 65% и 31%, соответственно.

Впервые получены 3- и 4- С-глутамины. При анализе спектров 'Н-ЯМР Немеченых глутаминов показано, что наличие 13С-изотопа в 3 и 4 положениях Gin приводит к расщеплению сигналов протонов в соответствующих положениях с константой спин-спинового взаимодействия, равной 128 Гц.

Изучен применительно к а-[15Н]аминоизобутановой кислоте метод получения а, а-диалкилированных аминокислот по Штрекеру. Показано, что при синтезе аминокислот, исходя из смешивающихся с водой кетонов, существенным фактором является наличие органической фазы. Выявлен необычный путь получения аминокислот из кетонов и производных синильной кислоты без добавления соединений аммония.

Оптимизирован трехстадийный метод синтеза 1)-[15]Г]изовалина исходя из 2-бутанона через получение промежуточного ДХ-аминоизовалерамида с последующим стереоселективным микробиологическим гидролизом с помощью клеток Mycobacterium neoaurum АТСС 25 795, содержащих X-специфическую амидазу.

Синтезированы зервамицины IIB, содержащие 15N-MeTKy в а-положении остатков Gin в 3 и 11 положениях пептидной цепи антибиотика по оригинальной схеме. При этом показано, что в пептидном синтезе с использованием ВОР в качестве активирующего реагента боковая амидная функция Gin не нуждается в защите. Разработана методология для синтеза С-концевого фрагмента зервамидина IIB, исходя из фенилаланинола со свободной спиртовой функцией. Отработаны условия удаления Fmoc-группы с помощью раствора NaOH в смеси растворителей диоксан/метанол/вода, при которых не происходит разрушение связи Pro-Phi.

Проведено полное соотнесение сигналов 'Н-ЯМР-спектра синтезированного зервамидина, меченного по остатку Gin", с помощью двумерной корреляционной ЯМР-спектроскопии (COSY и NOESY), в результате чего было показано влияние 15Ы-метки на вид сигнала, соответствующего 15]ЧН-протону остатка Gin 11.

В рамках проекта Нидерландской организации научных исследований (NWO) синтезированные 151Ч-изовалин и а-[|51Ч]аминоизобутановая кислота были использованы в ГосНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов Складневым Д. А. для микробиологического синтеза меченного зервамицина С использованием полученных меченых зервамицинов проводятся исследования с целью изучения их каналообразующих свойств.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1) Синтез 15N", 13Си 2Н-меченых глутаминов из соответствующих глутаминовых кислот с помощью фермента глутаминсинтетазы.

2) Синтез а-[15″ кг]аминоизобутановой кислоты и ?)-[151Ч]изовалина с использованием химико-ферментативного подхода.

3) Синтез меченных стабильными изотопами зервамицинов IIB по усовершенствованной схеме.

4) Изучение синтезированного меченого зервамицина IIB с помощью двумерной корреляционной ЯМР-спектроскопии.

5. ВЫВОДЫ.

1. Разработаны условия для ферментативного синтеза изотопно меченых глутаминов с помощью глутаминсинтетазы, исходя из соответствующих меченых глутаминовых кислот. Синтезированы с выходами от 70 до 80% и охарактеризованы с помощью ЯМР-спектроскопии I5N-, 2Ни 13С-меченые глутамины.

2. Изучена реакция получения сс, а-диалкилированных аминокислот по методу Штрекера. Синтезированы 1-меченые Aib и /)-Iva с общими выходами 65 и 31%, соответственно.

3. Разработана новая упрощенная схема синтеза антибиотика зервамицина IIB. Синтезированы зервамицины IIB, содержащие а-15]Г-меченый остаток глутамина в положениях 3 или 11 пептидной цепи.

4. Структура синтезированных зервамицинов была доказана с помощью масс-спектрометрии и 'Н-ЯМР-слектроскопии. Проведено полное соотнесение сигналов 'Н-ЯМР-спектра [a-I5N] Gin11-меченого зервамицина с помощью двумерной корреляционной ЯМР-спектроскопии (COSY и NOESY).

Показать весь текст

Список литературы

  1. Lipmann F, Gevers W, Kleinkauf H, Roskoski R. // Polypeptide synthesis on protein templates: the enzymatic synthesis of gramicidin S and tyrocidine. // Adv. Enzymol. Relat. Areas. Mol. Biol., 1971-V. 35, Pl-34.
  2. P., Boggs J., Luciano L., Maass G., Tummler B. // Interaction of Polymyxin В nonapeptide with anionic phospholipids. // Biochemistry, 1989, V. 26, P. 2139−2149.
  3. F. // Bacterial biosynthesis of peptide antibiotics gramicidin S and tyrocidins. // Accountchem. Res., 1978, V. 6, P. 361−365.
  4. P., Seidal H. // Structure and mechanism of action of Nizin antibiotic from Streptococcus lactic. // Arch. Microbiol., V. 127, P. 187−193.
  5. S., Shibahara S., Takahachi S. // Novel linear peptide antibiotics, structural analysis and activity. // J. Amer. Chem. Soc., 1977, P. 6305−6312.
  6. G. Y., Zasedatelev A. S., Zhure A. L. // DNA- dependent RNA synthesis inhibitor-Antibiotic tripeptide netropsin. // Cold spring Harbor Sympos on Qualitative Biol., 1983, P. 367−375.
  7. J., Kato T. // Cerexin peptide antibiotics isolated from Bacillus cereus, structural analysis. // J. Antibiot., 1979, V. 32, P. 313−316.
  8. S., Redaelli S., Arcamone F. // Dystamicin a novel peptide showing antibacterial action, a linear peptide antibiotic with modified C- and N-terminus. // Gazz Chem. Ital., 1974, V. 97, P. 1110−1116.
  9. M., Sigler G. F., Bodanszky A. // Structural elucidation of amfomicin, peptide antibiotic from streptomyces Canus. // J. Amer. Chem. Soc., 1976, V. 95, P. 2352−2358.
  10. J. G., Hughes J., Rocmer G. // Peptide antibiotic from Basius licheniformis, mechanism of antibacterial action. // Nature, 1978, V. 56, P. 272−280.
  11. Kempf C., Klausner R. D., Weinstein J. N., Van Renswonde J., Pincus M., Blumenthal J. // Voltage-dependent trans-layer orientation of melittin. // J. Biol. Chem., 1982, V. 257, P. 24 692 474.
  12. Ю. А. Биоорганическая химия. M.: Просвещение. 1987.
  13. Zidovetzki R, Banerjee U, Harrington D. W, Chan S. I. // NMR study of the interactions of polymyxin B, gramicidin S, and valinomycin with dimyristoyllecithin bilayers. // Biochemistry, 1988, V. 27, P. 5686−5692.
  14. Kim K. S., Vercauteren D. P., Welti M., Chin S., Clementi E. // Interaction of K+ ion with the solvated gramicidin A transmembrane channel // Biophys. J., 1985, V. 47, P. 327−335.
  15. G., Bruckner H., Smitt H. // Structure and activity of natural peptides // Eds. Voelter W., 1. Weitzel G., Berlin, 1981.
  16. E., Aydin M., Lucht N., Konig W., Jung G. // The C-terminal heptapeptides of suzukacillin and alamethiein sequence, conformation and synthesis. // Leibigs Ann. Chem., 1985, P. 365−372.
  17. G., Konig W., Leibfritz D., Katz E., Aydin M. // Isolation of Suzukacillin Antibiotic from Trichoderma viride // Biochem. Biophys. Acta., 1976, V. 433, P. 164−181.
  18. E., Aydin M., Lucht N., Konig W. Jung G. // Sequence and conformation of suzukacillin A//leibigs Ann. Chem., 1985, P. 1041−1062.
  19. Pandey R., Carrer Cook J., Rinehart K. // Alamethiein I, channel forming peptide antibiotic .// J. Am. Chem. Soc., 1977, V. 99, P. 8469−8483.
  20. B. F., Davis D. G., Borowska Z. K., Hall J. E., Kobayashi S. // Synthesis of major component of alamethiein // J. Am. Chem. Soc., 1981, V. 103, P. 6373−6377.
  21. R. C., Cook J. C., Renihart K. L. // High resolution and field desorption mass spectrometry studies and revised structures of alamethicins I and II. // J. Am. Chem. Soc., 1977, V. 99, P. 8469−8480.
  22. D. G., Ginis B. F. // 600 MHz proton magnetic resonance studies of natural and synthetic alamethiein // FEPS Letters, 1981, V. 133, P. 247−260.
  23. Balasubramanian Т. M., Kendrick N. C. E" Taylor M., Marshal G. R., Hall J.E.Yodyanoy I., Resser F. // Synthesis and characterization of the major component of alamethiein. // J. Am. Chem. Soc., 1981, V. 103, P. 6127−6132.
  24. A. D., Dietz A., Jhonson L. E. // Zervamicins I and II, polypeptide antibiotics produced by Emericellopsis salmosynnemata. // The Journal of Antibiotics, 1974, V. 27(5), P. 321−327.
  25. Krishna K., Sukumar M., Balaram P.// Structural chemistry and membrane modifying activity of the fungal polypeptides zervamicins, antiamoebins and efrapeptins. // Pure Appl. Chem., 1990, V. 62, P. 1417−1420.
  26. A. D., Jhonson L. E. // Emerimicins II, III and IV, antibiotics produced by Emericellopsis microsporain in media supplemented with /ram'-4-n-propyl-l-proline. // The Journal of Antibiotics, 1974, V. 27(4), P. 274−277.
  27. Das M. K., Raghothama S., Balaram P. // Membrane channel forming polypeptides. Molecular conformation and mitochondrial uncoupling activity of antiamoebin, an a-aminoisobutyric acid containing peptide. // Biochemistry, 1986, V. 25, P. 7110−7117.
  28. A., Brucker H. // New sequences and new fungal producers of peptaibol antibiotics antiamoebins// J. Pept. Sci., V. 6, P. 149−167.
  29. H. // Chemical synthesis of trichotoxin A, membrane active polypeptide mycotoxin. //
  30. Peptides, 1986, P. 230−235.
  31. El Hajji M., Rebuffat S., Lecommandeur D., Bodo B. // Isolation and sequence determination of trichorzianines A antifungal peptides from trichoderma harzianum. II Int. J. Protein. Res., 1987, Y. 29(2), P. 207−215.
  32. S., Bodo B. // Tricholongins I and II: isolation and amino acid sequence determination. // Peptides, 1988, P. 351−358.
  33. Rebuffat S., Prigent Y., Auvin-Guette C., Bodo B. // Tricholongins BI and BII, 19-residue peptaibols from Trichoderma longibarachiatum. Solution structure from two-dimensional NMR spectroscopy.//Eur. J. Biochem., 1991, Y. 201(3), P. 661−674.
  34. Auvin-Guette C., Rebuffat S., Prigent Y., Bodo B. // Trichogins A IV, an 11-residue lipopeptaibol from Trichoderma longibrachiatum. // J. Am. Chem. Soc., 1992, V. 114, P. 2170−2174.
  35. S., Iida A., Akimoto N., Kanai M., Toyama N., Fujita T. // Structural elucidation of channel-forming peptides, trichorovins, I—XIV from Trichoderma viride. // Chem. Pharm. Bull., 1995, V. 43 (6), P. 910−915.
  36. P., Schlegel R., Dornberger K., Grafe U. // Formation of membrane channels by chrysospermins Ia-d, new peptaibol antibiotics. // Biochem. Biophys. Acta., 1995, V. 1237(1), P. 1−5.
  37. Anders R., Wenschuh H., Soskis V., Fischer-Fruhhols S., Ohlenschlager O., Dornberger K., Brown L. R. // A solution NMR study of the selectively 13C, 15N-labeled peptaibol chrysospermin С in methanol. // J. Pept. Res., 1998, V. 52(1), P. 34−44.
  38. Hulsmann H., HeinseS., RitzauM., Schlegel R., Grafe U. // Isolation and structure of peptaibol, a new peptaibol from sepedonium strains. // Journal of antibiotics, 1998, V. 51(11), P. 10 551 058.
  39. G., Rebuffat S., Bodo B. // Directed biosynthesis of peptaibol antibiotics in two trichoderma strains. II. Structure and elucidation. // J. Antibiotic (Tokyo), 1998, V. 51(2), P. 178−183.
  40. C., Hlimi S., Rebuffat S., Bodo B. // Trichorzins HA and MA, antibiotic peptides from trichoderma harzianum. I. Fermentation, isolation and biological properties. // The Journal of antibiotics, 1995,48(11), 1248−1253.
  41. D., Ridell F. G., Rebuffat S., Platzer N., Bodo B. // Ionophoric activity of the peptaibol trichorzin PA IV: a 23Na- and 35C1-NMR study. // Biochem. Biophys. Acta., 1998, V. 1372(2), P. 370−378.
  42. Т., Hasumi K., Karada Т., Kawasaki N., Endo А. П Clonostachin: a novel peptaibol that inhibits platelet aggregation. // The Journal of Antibiotics, 1197, V. 50(2), P. 105−110.
  43. Rebuffat S., Conraux L., Massias M., Auvin-Guette C., Bodo B. // Sequence and solution conformation of the 20-residue peptaibols, saturnisporins SA II and SA IV. // Int. J. Pept. Protein Res., 1993, V. 41(1), P. 74−84.
  44. Lee S. J., Yeo W. H., Yun B. S., Yoo I. D. // Isolation and sequence of new peptaibol, boletusin, from Boletus spp. //Journal of Peptide Science, 1999, V. 5(8), P. 374−378.
  45. G., Rebuffat S., Bodo B. // Directed biosynthesis of peptaibol antibiotics in two trichoderma strains I. Fermentation and isolation. // J. Antibiotic (Tokyo), 1998, V. 51(2), P. 170−177.
  46. Castro В., Dormoy J.-R., Evin G., Selve C. // Synthesis and application of BOP: a rabid acting coupling reagent for one-stage peptide condensation. // Tetrahedron letters, 1975, V. 15, P. 1219−1223.
  47. Frerot E., Coste J., Pantaloni A., Dufour M.-N., Jouin P. // PyBOP and PyBrop: Two reagents for the difficult coupling of the a, a-dialkyl amino acid, Aib. // Tetrahedron, V. 47(2), P. 259 270.
  48. A., Bloemhoff W., Lugtenburg J., Raap J. // Synthesis of the isotopically labelled C-terminal fragment of zervamicin: Approach to the synthesis of Aib-containing peptides. // Liebigs Ann. Chem., 1997, V. 12, P.41−47.
  49. A., Bloemhoff W., Lugtenburg J., Raap J. // Total synthesis of zervamicin IIB and its deuterium-labelled analogues. //J. Pept. Sci., 1997, V. 3(3), P. 193−208.
  50. K., Tamai Y., Kiso Y. // Efficient synthesis of peptaibol using a chloroimidazolidium coupling reagent, CIP. .// Tetrahedron, 1997, V. 53, P. 567−584.
  51. W., Heimgartner H. // Synthesis of segments of the peptaibol trichotoxin A-50 (G). // Peptides, 1990, P. 107−113.
  52. U., Zabrocki J., Kaczmarek K., Leplawy M. Т., Beusen D. D., Marshal G. R. // Facilitated synthesis of peptaibols: alamethicin via enzymatic segment condensation. // Biopolymers, 1992, Y. 32(11), P. 1461−1470.
  53. Slomczynska U., Beusen D. D., Zarbocki J., Kociolek K., Redlinski A., Reusser F., Hutton W.10
  54. S., Leplawy M. Т., Marshal G. R. 11 Emerimicins III and IV and their Ethylalanine epimers. Facilitated chemical-enzymatic synthesis and qualitative evaluation of their solution structures.// J. Am. Chem. Soc., 1992, V. 114, P. 4095−4106.
  55. M. K., Balaram P. // Alamethicin and related membrane channel forming polypeptides // Molecular and Cellular Biochemistry, 1983, V. 50, P. 47−64.
  56. G., Carver J., Boyd J., Campbell I. D. // High-resolution 'H-NMR study of the solution structure of alamethicin. // Biochemistry, 1987, V. 26, P. 1043−1050.
  57. North C. L., Barranger-Mathys M., Cafiso D. S. // Conformational analysis of the peptaibol antibiotic, alamethicin, in solution and model membranes using NMR spectroscopic data. // Biophysical J., 1995, V. 69, P. 2392−2397.
  58. С. E., Handcock L. J. // Interactions of alamethicin molecules with lipid bilayers. conformation changes of a-Helical structure: H-bonds and parameters. // Biophysical J., 1996, V. 70, P. 1777−2788.
  59. P. // Alamethicin and related peptaibols model ion channels // Eur Biophys. J., 1993, V. 22, P. 105−124.
  60. He Ke, Ludtke S. J., Huang H. W. // Antimicrobial peptide pores in membranes detected by neutron in-plane scattering. //Biochemistry, 1995, V. 34, P. 15 614−15 618.
  61. Archer Sharon J., Ellena J. F., Cafiso D. F. // Dynamics and aggregation the peptide ion channel alamethicin. Measurements using spin-labeled peptides. // Biochem. Biophys. Acta., 1997, V. 1330(2), P. 103−109.
  62. You S., Peng S., Lien L., Breed J., Sansom M. S. P., Woolly G. A. // Engineering stabilized ion channels: Covalent dimers of alamethicin. // Biochemistry, 1996, V. 35, P. 6225−6232.
  63. Benedetti E., Bavoso A., Di Blasio В., Pavone V., Pedone C., Toniolo C., Bonora G. M. // Peptaibol antibiotics: a study on the helical structure of the 2−9 sequence of emerimicins III and IV. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, V. 79, P. 7951−7954.
  64. E., Rebuffat S., Prgent Y., Segalas I., Bondo В., Davoust D. // Three-dimensional structures of the ion-channel forming peptide trichorzianine ТА VII bound to sodium dodecyl sulfate micelles. // Biopolymers, 1998, V. 46(2), P. 75−88.
  65. Le Doan Т., El Hajji M., Rebuffat S., Rajesvari M. R., Bodo B. // Fluoresence studies of the interaction of trichorzianine A III with model membranes. //Biochim. Biophys. Acta, 1986, V. 858(1), P. 1−5.
  66. I., Balaram P. // Membrane channel forming polypeptides. 270-MHz proton magnetic resonance studies of the of aggregation of the 11−21 fragment of suzukacillin in organic solvents. // Biochemistry, 1981, V. 20, P. 7278−7284.
  67. L., Davoust D., Molle Q. // Conformational study of a synthetic analogue of alamethicin. Influence of the conformation of alamethicin on channel lifetimes.// Int. J. Pept. Protein Res., 1995, V. 45(2), P. 164−172.
  68. Breed J, Ken- I. D., Molle G., Duclohier H., Sansom M. S. // Ion channel stability and hydrogen bonding. Molecular modeling of channels formed by synthetic alamethicin analogues. //Biochem. Biophys. Acta., 1997, V. 1330(2), P. 103−109.
  69. G., Duclohier H., Julien S., Spach G. // Synthetic analogues of alamethicin: effect of C-terminal residue substitution and chain length on the ion channel lifetimes. // Biochim.
  70. Biophys. Acta, 1991, V. 1064(2), P. 365−369.
  71. C., Duclohier H., Dathe M., Weschuh H., Beyermann M., Molle G., Bienert M. // Influence of proline position upon the ion channel activity of alamethicin. // Biophys. J., 1997, V. 72, P. 2151−2159.
  72. C., Dathe M., Bienert M. // Functional modifications of alamethicin ion channels by substitution of glutamine 7, glycine 11 and proline 14. // Biochim. Biophys. Acta, 1998, V. 1373(1), P. 137−146.
  73. El Hajji M., Rebuffat S., Le Doan Т., et. al. // Interaction of trichorzianines A and В with membranes and with the amoeba Dictyostelium. // Biochim. Biophys. Acta., 1989, V. 978(1), P. 97−104.
  74. M. K., Balaram P. // Alamethicin and related membrane channel forming polypeptides. // Molecular and Cellular Biochemistry, 1983, V. 50, P. 47−64.
  75. Isabella L., Karle I., Flippen-Anderson J. L., Agarwalla S. Balaram P. // Crystal structure of Leu’jZervamicin, a membrane ion channel peptide. Implications for gating mechanisms. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1991, V. 88, P. 5307−53 011
  76. Balaram P., Krishna K., Sukumar M., Mellor I. L., Sansom M. S. P. // The properties of ion channel formed by zervamicins. // Eur. Biophys. J., 1992, V. 21, P. 117−128.
  77. T. N., Raap J. // Voltage- dependent interaction of the peptaibol antibiotic zervamicin IIB with phospholipid vescels. //Feps letters, 1999, V. 460(3), P. 500−504.
  78. Sanson M. S. P., Balaram P., Karle I. // Ion channel formation by zervamicin IIB. // Eur. Biophys. J., 1993, V. 21, P. 369−383.
  79. M., Brunger A. // Automated modeling of coiled coils: application to the GCN4 dimerization region.//Prot. Engineer., 1997, V. 4, P. 649−659.
  80. Isabella L., Judith L., Karle I., Flippen-Anderson J. L., Agarwalla S., Balaram P. // Conformation of the flexible bent helix of Leu1.-Zervamicin in crystal and possible gating action for ion passage. // Biopolymers, 1994, V. 34, P. 721−735.
  81. Killian J. A., Taylor M. J., Koeppe R. R. E. // Orientation of the valine-1 side chain of the gramicidin transmembrane channel and implication for channel functioning. A 2H NMR study. //Biochemistry, 1992, V. 31, P. 11 283−11 290.
  82. The NMR solution structure of ion channel peptaibol chrysospermin С bound to dodecylphosphocholine miscelles. // Eur. J. Biochem., 2000, V. 267(6), P. 1784−1794.
  83. Е., Складнев Д., Лапшина М., Ерёмин С., Raap J., Швец В. // Биотехнологическое получение стабильно меченых препаратов зервамицина IIB. // Химикофармацевтический журнал, 2000, Т. 34(6), С. 37−40.
  84. Н. R., Matthews К. S., Opella S. J. // Selectively deuterated amino acids analogues, synthesis incorporation into proteins and NMR properties. // Biochim. Biophys. Acta, 1977, V. 497, P. 1−13.
  85. A., Vaselenko A., Lugtenburg J., Raap J. // Enzymatic synthesis of specifically H-labelled L-glutamic acids, 2H, 15N, 13C-labelled glutamines on a preparative scale. // Reel. Trav. Chim. Pays-Bas., 1994, V. 113, P. 369−375.
  86. Cappon J. J., van der Walle G. A. M., Verdegem P. J. E., Raap J., Lugtenburg J. // Synthesis of specifically stable-isotope-labelled L-proline and glutamines via L-glutamic acid. // Reel. Trav. Chim. Pays-Bas., 1992, Y. 113, P. 318−324.
  87. M., Бергерон P., Комияма M. Биоорганическая химия ферментативного катализа. Перевод с английского, М: Мир, 1987.
  88. В. А., Хавин 3. Я. // Краткий химический справочник, «Химия», Ленинградское отделение, 1977.
  89. R. P., Spero D. М. // Synthesis of protected, chiral a, a-disubstituted a-amino acids via a Beckmann rearrangement. //Tetrahedron letters, 1998, V. 39, P. 2475−2478.
  90. A., Fatemi P., Alezadeh A. A. // Lithium perchlorate/Diethylether catalyzed aminocyanation of aldehydes. // Tetrahedron letters, 1998, V. 39, P. 3049−3050.
  91. J., Commeyras A. // Systemes de Strecker et apparients I. Edute de la decomposition en solution aqueuse des a-alcoyl-aminonitriles tertiares. Mechanisme d’elimination du groupement nitrile. // Tetrahedron, 1974, V. 30, P. 127−132.
  92. Kaptein В., Boesten W. H. J., Broxtermann Q. В., Peters P. J. H., Schoemaker H. E.,
  93. J. // Enzymatic resolution of a, a-disubstituted a-amino acid esters and amides. // Tetrahedron: Asymmetry, 1993, V. 4(6), P. 1113−1116.
  94. Chen С. H., Fujimoto Y., Girdaukas G., Sih C. J. // Quantitative analysis of biochemical kinetic resolutions of enantiomers. // J. Am. Chem. Soc., 1982, V. 104, P. 7294−7399.
  95. Y., Kawasaki A. // Mechanistic aspects of Strecker aminonitrile synthesis. // J. Amer. Chem. Soc., 1971, V. 93, P. 325−329.
  96. VanNispen J. W. F. M., Smeet P. J. H., Poll E. H. A, Tesser G. // Investigation of the role of tryptophan in alfa -MSH replacement by pentamethylphenylalanine and L-phenylalanine. // Int. J. Peptide Protein Res., 1977, V. 9, P. 203−212.
  97. Ю9.Якубке X. Д., Ешкайт X. Аминокислоты, пептиды, белки: перевод с немецкого, М.: Мир, 1985.
  98. Le Nguyen D., Nalis D., Castro B. // Peptide synthesis using rabid coupling reagents. Aspects of preparation and application // Int. J. Peptide Protein Res., 1989, V. 33, P. 133−136.
  99. Ten Kortenaar P. B. W" Van Dijk B. G., Petters J. M., Raaben B. J., Adams P. J., Tesser G. I. // Rapid method for the preparation of Fmoc-amino acids starting from 9-fluorenylmethanol. // Int. J. Peptide Protein Res., 1986, V.27, P.398−400.
  100. P. // Modification of tryptophan residues during acidolysis of 4-metoxy-2,3,6-trimethylbenzenesolfonyl groups. Effects of scavengers. // Tetrahedron letters, 1987, V. 28, P. 1637−1640.
  101. Pearson D. A., Blanchette M., Baker M. L., Guindon С. H Trialkylsilanes as scavengers for the trifluoroacetic acid deblocking of protecting groups in peptide synthesis. // Tetrahedron letters, 1989, V. 30, P. 2739−2742.
  102. Э., Майенхофер И., Джоунс Дж., Бодански М., Рич Д., Сингх Ж., Кемп Д. Пептиды. Основные методы образования пептидных связей. Перевод с английского, М.: Мир, 1983.
  103. Э. Современные методы ЯМР для химических исследований. Перевод с английского, М.: Мир, 1992.
  104. I., Balaram P. // Membrane channel forming polypeptides. 270-MHz hydrogen-1 nuclear magnetic resonance studies on the conformation of the 11−21 fragment of suzukacillin. // Biochemistry, 1981, V. 20, P. 4866−4871.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!