Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Получение и диагностическая ценность биспецифических моноклональных антител к IgG свиньи и флуоресцеину

Диссертация: Получение и диагностическая ценность биспецифических моноклональных антител к IgG свиньи и флуоресцеину
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Разработка и совершенствование гибридомной технологии и успехи, достигнутые в получении продуктов моноклональных линий гибридных клеток, привели к созданию нового вида гибридом, названных гибридомными, или химерными гибридомами, оказавшимися весьма перспективными для иммунохимии, иммунодиагностики и иммунотерапии. Гибридомные гибридомы — триомы и квадромы получают, соответственно, путем… Читать ещё >

Получение и диагностическая ценность биспецифических моноклональных антител к IgG свиньи и флуоресцеину (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • 1. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
  • 2. ВВЕДЕНИЕ
    • 2. 1. Актуальность темы
    • 2. 2. Цель и задами исследования
    • 2. 3. Научная новизна
    • 2. 4. Практическая значимость работы
    • 2. 5. Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту
    • 2. 6. Апробация работы
    • 2. 7. Публикации
    • 2. 8. Объем и структура диссертации
    • 2. 9. Благодарности
  • 3. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.,
    • 3. 1. Бисайтспецифические иммуноглобулины и гибридомные гибридомы
    • 3. 2. Применение бисайтспецифнческих антител
    • 3. 3. Моноклональные антитела в диагностике вирусных болезней
    • 3. 4. Диагностика КЧС
    • 3. 5. Применение органических люминофоров в биологии и медицине

2.1.

Актуальность темы

.

Разработка и совершенствование гибридомной технологии и успехи, достигнутые в получении продуктов моноклональных линий гибридных клеток, привели к созданию нового вида гибридом, названных гибридомными, или химерными гибридомами, оказавшимися весьма перспективными для иммунохимии, иммунодиагностики и иммунотерапии. Гибридомные гибридомы — триомы и квадромы получают, соответственно, путем гибридизации лимфобластов с гибридомой или двух гибридом, каждая из которых продуцирует мономорфные MAbs к различным эпитопам. Продуцируемые триомами и квадромами MAbs являются биспецифическими, имеющими не два одинаковых, как в обычных иммуноглобулинах, а два различных по специфичности антигенсвязывающих центра. При этом один антиген-связывающий центр (сайт) имеет происхождение от одного из партнеров гибридизации, второй — от другого.

Классическая техника соматической гибридизации клеток с целью получения гибридом или квадром требует наличия необходимых родительских клеточных линий, имеющих чувствительность к селективным средам или определенного подхода к скринингу продуктов гибридизации гибридом и, с учетом этого, проведения соответствующих селекционных процедур.

Бивалентные MAbs являются высокоспецифичными реагентами, позволяющими проводить одноэтапную индикацию двух или более антигенных спе-цифичностей, причем одна из этих специфичностей может быть направлена к маркерной молекуле, например ферменту, флуорохрому или веществу, меченному радионуклидами. Это позволяет проводить иммунохимические анализы на более высокой ступени научного исследования, способствуют созданию и совершенствованию новых методов иммунодиагностики, значительно дополняя и углубляя информацию, получаемую с помощью традиционных методов имму-ноанализа.

Основным преимуществом клеточноинженерного метода получения МАЬэ, продуцируемых квадромами, является то, что образуемые ими МАЬб синтезируются и секретируются так же, как и нативные ^ молекулы, обладая при этом двойной специфичностью и молекулярной однородностью. Квадрома или триома может подвергаться криоконсервации и реклонированию с целью получения моноклональных антител в определенные сроки. Для продуктов этой технологии так же характерна доступность гибридомных продуктов в относительно больших количествах при сравнительно низкой себестоимости.

В области диагностики перспективно их использование для методически простого выявления образования комплекса антиген-антитело в иммунофер-ментном и иммунофлуоресцентном анализе. Причем для постановки иммуно-ферментного или иммунофлюоресцентного анализа в этом случае не потребуется приготовления конъюгатов антител с ферментами или флюорохромами. Например, использование в непрямом ИФА биспецифических моноклональных антител, одна из специфичностей которых направлена против метки (флюоро-хрома или иного гаптена), а вторая против определяемого иммуноглобулина, позволит, во-первых, применить одно и то же антитело в МФА и ИФА без какой-либо его дополнительной модификации и, во-вторых, применять в ИФА широкий спектр ферментов, которые просто достаточно пометить гаптеном.

Таким образом, бивалентные МаЬэ можно использовать с научно-практической целью в области общей биологии, медицины и ветеринарии, в частности для лабораторной диагностики вирусных болезней животных. Рядом авторов показано, что использование бисайтспецифичееких МКА в различных иммунологических и серологических вариантов анализа позволяет существенно упростить процедуру и сократить время постановки реакции, а также ликвидировать проблемы, связанные с синтезом и использованием конъюгатов иммуноглобулинов с ферментными или флуоресцентными маркерами.

Одним из ведущих лабораторных тестов в диагностике вирусных болезней животных остается метод иммунофлуоресценции. В непрямом МФА в качестве первых антител используют немеченные антитела, а в качестве вторых — меченные флуорохромом антитела к иммуноглобулинам. Получение бивалентных моноклональных антител, антигенсвязывающий сайт первого плеча которых специфичен к свиньи, а антигенсвязывающий сайт второго — к флуоресцеи-ну, может значительно упростить технологию приготовления диагностикумов. Если учесть, что на молекулах свиньи имеются общие детерминанты с других видов сельскохозяйственных животных, то диапазон применения таких биспецифических антител может быть значительно более широким.

2.2.

Цель и задачи исследования

.

Вышеперечисленными обстоятельствами обусловлен выбор поставленной перед нами цели работы: получение квадром, продуцирующих бивалентные моноклональные антитела, специфичные к свиньи и флуоресцеину, и определение их диагностической ценности.

Для достижения намеченной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. получить мышиные гибридомы — продуценты моноклональных иммуноглобулинов к флуоресцеину и свиньи;

2. создать маркированные субклоны гибридом, секретирующих моноклональные антитела к флуоресцеину и свиньи, дефектные по генам, кодирующим ферменты тимидинкиназу (ТК'-варианты) и гипоксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазу (ГТФРТ-варианты), соответственно;

3. методом соматической гибридизации между клетками дефектных клонов гибридом получить клоны клеток квадром, продуцирующие бисайтспеци-фические моноклональные иммуноглобулины к флуоресцеину и свиньи;

4. определить параметры применения бисайтспецифических моноклональ-ных иммуноглобулинов;

5. определить диагностическую ценность полученных монои биспеци-фических моноклональных антител в диагностических реакциях.

2.3. Научная новизна.

Получены клетки клонов квадром, секретирующие бисайтспецифические моноклональные антитела к флуоресцеину и IgG свиньи. Показано, что биспе-цифические иммуноглобулиновые молекулы сохраняют антигенную специфичность, свойственную родительским клонам.

Продемонстрировано, что специфичность бисайтспецифических моноклональных антител к флуоресцеину позволяет использовать ФИТЦ для индукции связывания этих антител с различными ферментами, меченными ФИТЦ.

Показана возможность использования биспецифических моноклональных антител в диагностических реакциях.

Установлено, что пероксидазные антивидовые конъюгаты, изготовленные из моноклональных антител к IgG свиньи обладают высокой специфической активностью, низкой спонтанной сорбцией и пригодны для диагностических и исследовательских целей.

2.4. Практическая значимость работы.

В ходе исследований адаптирован ряд методических приемов (селекция клеток квадромных клонов, метод частичной хроматографической очистки бисайтспецифических иммуноглобулинов, скрининг би-МКА в double-antigen-ИФА), которые могут быть применены при проведении НИР в области гибри-домной технологии и биотехнологии бисайтспецифических иммунореагентов для белков и гаптенов.

Подготовлены и утверждены директором института «Методические рекомендации по клеточно-инженерному конструированию гибридомных гибридом квадром, триом) — продуцентов бисайтсттецифических моноклональных иммуноглобулинов».

Получены, охарактеризованы и заложены на хранение по два клона гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к флуоресцеину и IgG свиньи, а также два клона квадром, продуцирующих бисайтспецифические моноклональные антитела к флуоресцеину и IgG свиньи.

Пероксидазные конъюгаты моноклональных антител к IgG применяются в диагностических исследованиях на КЧС.

2.5. Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту.

1. Комплекс адаптированных методических приемов позволяет получать квадромы, продуцирующие бисайтспецифические моноклональные требуемой белковой и гаптенной специфичности.

2. Культурально-морфологические, пролиферативные, селективные маркерные свойства и характеристики антителопродукции мутантных HATSсубклонов гибридомных клеток в процессе культивирования in vitro и in vivo сохраняются.

3. Специфичность би-МКА к флуоресцеину позволяет использовать ФИТЦ в качестве гаптенной метки различныых ферментов для использования их в ИФА и иммуноцитохимических методах.

2.6. Апробация работы.

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции, посвященной 40-летию ВНИИВВиМ «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзотическими болезнями животных» (9−10 декабря, 1998 г.), на заседаниях Ученого Совета ВНИИВВиМ {16 апреля 1998 г. и 23 марта 1999 г.), совещаниях научных сотрудников лаборатории «Гибридомной Биотехнологии» ВНИИВВиМ (1998;2001 гг.).

2.7. Публикации.

По результатам теоретических и экспериментальных работ, выполненных по теме диссертации, опубликовано 4 научных работы, в том числе 1 из них в центральном научном журнале «Сельскохозяйственная биология».

2.8. Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 120 листах машинописного текста по общепринятой схеме и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы (126 источников, в том числе 35 — отечественных авторов). Работа иллюстрирована 8 таблицами, 8 рисунками и дополнена приложениями.

7. ВЫВОДЫ.

1. Получены и охарактеризованы по антителопродукции и субклассовой специфичности, 10 линий гибридом, стабильно продуцирующих МКА к флуо-ресцеину. Титр МКА к флуоресцеину в асцитической жидкости двух гибридных клонов F7 и 3D! составлял в ИФА 1:2 048 000 и 1:512 000, соответственно.

2. Получены и охарактеризованы по антителопродукции и субклассовой специфичности 8 линий гибридом, стабильно продуцирующих МКА к IgG свиньи. Антивидовые конъюгаты, изготовленные из МКА и пероксидазы, обладают высокой специфической активностью, низкой спонтанной сорбцией и пригодны для диагностических исследований.

3. Путем ступенчатой селекции к аналогам пуриновых и пиримидиновых нук-леотидов получены стабильные, генетически маркированные субклоны мышиных гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к флуоресцеину и IgG свиньи, с фиксированным фенотипом, пригодные для получения квадром с селекцией только на НАТ-среде. Культурально-морфологические, пролиферативные, селективные маркерные свойства и характеристики анти-телопродукции мутантных субклонов гибридомных клеток в процессе культивирования in vitro и in vivo сохранялись.

4. Получены квадромы, продуцирующие бисайтспецифические моноклональные антитела к флуоресцеину и IgG свиньи. В асцитической жидкости титр антител к IgG свиньи квадромы 4В6 составил 1:8000−1:128 000, квадромы 14F10- 1:16 000−1:256 000, а к флуоресцеину 1:4000−1:16 000 и 1:40 001:32000, соответственно.

5. Показана возможность использования би-МКА в диагностических реакциях. Специфичность к флуоресцеину позволяет использовать ФИТЦ в качестве спейсера с различными ферментами.

8. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Методические рекомендации по клеточно-инженерному конструированию гибридомных гибридом (квадром, триом) — продуцентов бисайтспецифических моноклональных иммуноглобулинов могут быть применены при проведении НИР в области гибридомной технологии и биотехнологии бисайтспецифических иммунореагентов для различных белков.

Заложены на хранение по два клона гибридом, продуцирующих монокло-нальные антитела к флуоресцеину и IgG свиньи, а также субклоны гибридом-ных клеток указанной специфичности с мутантным HATфенотипом, которые можно использовать при конструировании различных квадром.

Пероксидазные конъюгаты с МКА к IgG свиньи могут быть использованы в диагностике вирусных болезней свиней.

Получены и охарактеризованы два клона квадром, продуцирующих би-сайтспецифические моноклональные иммуноглобулины к IgG свиньи и флуо-рецеину. Би-МКА могут быть использованы в диагностических исследованиях.

Показать весь текст

Список литературы

  1. О.Г., Булгарина Т. В. Моноклональные антитела в диагностике ротавирусной инфекции // Тез. докл. мол. ученых ин-та микро-биол. АН Латв. ССР. Рига. — 1987. — С. 9.
  2. И.Ф. Диагностика классической чумы свиней // Ветеринария. 1986.-№ 3.-С. 27−30.
  3. Д.В. Получение и изучение квадром на модели гибридом к вирусу гриппа и пероксидазе : Дис.. канд. биол. наук. Покров, 1999, — 140 с.
  4. A.A., Ключарев J1.A., Лапина Г. Ф. Молекулярно-генетические принципы получения антигенов и антител // Успехи современной биологии. 1983. — Т. 95, вып. 2. — С. 242−254.
  5. . М. Гибридизация соматических клеток,— М.: Мир, 1976. -С. 23−26.
  6. Л.А. Биотехнология получения и применения противовирусных моноклональных иммуноглобулиновых препаратов: Дис. д-ра биол. наук / ВНИИЗЖ МСХиП РФ. -Владимир, 1998. -315 с.
  7. С.М., Пасхин А. И., Стремовский O.A. Генетическая инженерия антител // 1 Нац. конф. Рос. Ассоц. аллергологов и клин, иммунологов «Современные пробемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии.» М., — 1997. — С. 634.
  8. С.М., Поляновский О. Л. Трансфектомы продуценты искусственных антител // Биотехнология. — 1987. — Т. З, № 6. — С. 796−801.
  9. С.М., Поляновский О. Л. Инженерия антител // Молекулярная биология. 1994. — Т. 28. — вып. 6. — С. 1272−1282.
  10. Дин П., Джонсон У., Мидл Ф. Аффинная хроматография: Методы // М. 1988.-278 с.
  11. Изучение антигенсвязывающих свойств биспецифическихмоноклональных антител / Смирнова М. Б., Дергунова H.H., Кизим К. А. и др. // Биохимия. 1997. — Т.62, № 1. — С. 51−59.
  12. Г. X., Юсупов Р. X., Барсков В. Г. Индикация вируса классической чумы свиней методом иммуноферментного анализа // Вирусные болезни с.-х. животных: Тез. докл. Всерос. науч,-практ. конф, — Владимир, 1995. С. 42.
  13. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля- Пер. с нем. А. П. Тарасова. М.: Медицина, 1987. — 472 с.
  14. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций / Под ред. Т. В. Перадзе, П. Халонена. М.: Медицина, — 1985. — 302 с.
  15. ИФА для выявления вируса КЧС и вирусспецифических антител / Шубина Н. Г., Колонцов A.A., Ющенко Ю. А. и др. // Ветеринария.-1999, — № 11. С. 19−25.
  16. .М., Болотин Б. М. Органические люминофоры, — J1.: Химия, 1976. -343 с.
  17. Г. Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. — 352 с.
  18. В. А. Использование моноклональных антител в вирусологии // Вопросы вирусологии. 1983. — № 6. — С. 648−654.
  19. В.М. Моноклональные антитела: Иммунобиотехнологические принципы получения и перспективы их применения // Гематология и трансфузиология. 1990. -№ 4. — С. 410.
  20. Ю.С., Кизим Е. А., Дмитриев А. Д. Новый подход к конструированию гибридных гибридом, основанный на использовании актиномицин-О-резистентной линии миеломы мыши // Бюл. экспер. биологии и медицины. 1991. — № 11. — С. 511−514.
  21. Ю.С., Суханова Л. Л., Кизим Е. А. Получение бифункциональных моноклональных антител к IgG человека и пероксидазе хрена и их использование для тестирования антител к ВИЧ // Бюл. экспер. биологии и медицины. 1994. — Т. 117. — № 3. -С.291−293.
  22. М. И. Успехи микробиологии,— М.: Наука, 1971. — Т. 7.1. С. 3—32.
  23. В. Г. Люминесцентный анализ в медицине. Ташкент: Мед-гиз, — 1963. 170 с.
  24. A.C., Малахова И. В., Гайдамович СЛ. Получение асцитических препаратов моноклональных антител // Вопросы вирусологии. 1985. — № 6 .- С. 749−753.
  25. Д.Н., Корнеева М. Н., Литвиович Н. Е. Дигностические препараты моноклональных антител для реакции прямой иммунофлуо-ресценции // Молекулярная биология вирусов гриппа и гепатита.-М" 1985. Ч. 2. — С.44−48.
  26. Повышение специфичности иммуноферментного анализа за счет использования конъюгата на основе моноклональных антител / Ма-ренникова С.С., Мацевич Г. Р., Хабахпашева H.A. и др. // Вопросы вирусологии -1986, — № 6. С.48−51.
  27. Д., Ван Норден С. Введение в им му, но цитохимию: современные методы и проблемы, — М.: Мир, 1987. 74 с .
  28. Получение и характеристика моноклональных антител к структурным белкам вируса бешенства штамм «ТС-80"/ Недосеков В. В., Вишняков И. Ф., Стрижаков A.A. и др. // Доклады РАСХН. 1999. -№ 4.-С. 38−40.
  29. Селективная солюбилизация мембранных белков клеток костного мозга свиньи / Колонцов A.A., Устин A.B., Бруновленская И. И., Макаров В. В. // Биол. мембраны. 1989. -Т 6, № 7. — С. 699−704.
  30. Р. Методы очистки белков / Пер. с англ. В. К. Антонова М.: Мир, 1985.- 358 с.
  31. Совершенствование лабораторной диагностики классической чумы свиней / Вишняков И. Ф., Хухоров И. Ю., Куриннов В. В., Олейник
  32. Л.Я. // Ветеринария. 1990. -№ 4. — С.28−29.
  33. Стратиева-Танева П. А. Биспецифические моноклональные антитела в иммуноанализе интерлейкина 2: Дие.. канд. биол. наук / Ин-т биоорганической химии им. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН. М., 1992. — 11 1 с.
  34. Теория и практика иммуноферментного анализа / Егоров A.M., Осипов А. П., Дзантиев Б. Б., Гаврилова Е.М. М. Высшая школа, 1991. -288 с.
  35. Afshar A., Dulac G.C., Bouffard A. Application of peroxodase labbeled antibody assay for detection of porcine IgG antibodies to hog cholera and bovine viral diarrhea viruses // J. Virol. Meth. 1989. — Vol.23, № 3. -P.253−262.
  36. Brennan M., Davison P.F., Paulus H. Preparation of bispecific antibodies by chemical recombination of monoclonal immunoglobulin G1 fragments// Science. 1985. — Vol. 229. — P. 81−83.
  37. Brown K.E., Buckley M.M., Cohen B.J. An amplified ELISA for the detection of parvovirus B19 IgM using monoclonal antibody to FITC // J. Virol. Meth. 1989. — Vol. 26. — P. 189−198.
  38. Campbell A.M. Monoclonal antibody and immunosensor technology // Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology. Vol. 23. -1991 — P. 427.
  39. Colijn E. O., Bloemraad M., Wensvoort G. An improved ELISA for detection of antibodies directed against classical swine fever virus in serum. // Thid ESVV Symposium on Pestivirus infections: Progr. and Abstr.- Lelystad, 1996, — P. 105.
  40. Cook A.G., Wood P.J. Chemical sinthesis of bispecific monoclonal antibodies: Potential advantages in immunoassay systems // J. Endocrinol. 1993, — Vol. 137-P. 94.
  41. Cook A.G., Wood P.J. Chemical sinthesis of bispecific monoclonal antibodies: Potential advantages in immunoassay systems // J. Immunol. Meth.- 1994. Vol. 171. — P. 227−237.
  42. Corsaro C.M., Migeon B.R. Gene expression in euploid human hybrid cells: Ouabain resistance is codominant // Somat. Cell Genet. 1998. -Vol. 4 — P. 531−540.
  43. De Boer G.F., Osterhaus A.D.M.E. Application of monoclonal antibodies in the avian leucosis virus gs-antigen ELISA // Avian Pathol.-1985,-Vol.14, №. L- P.39−55.
  44. Production of hybrid hybridomas based on HAT'-neomycin double mutants / De Lau W.B.M., Van Loon A.E., Heije K. et al. // J. Immunol. Meth. 1989.-Vol. 117.-P. 1−8.
  45. Engvall E., Perlmann P. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA): quantitative assay of IgG // Immunochemistry. 1989. — Vol. 8. — P. 871 878.
  46. Fazekas De St. Groth S., Scheidegger D. Production of monoclonal antibodies: strategy and tactics // J. Immunol.Meth.- 1980. Vol. 35. — P. 1−21.
  47. Fell H.P., Yarnold S., Hellstrom I. Homologous recombination in hybridoma cells: Heavy chain chimeric antibody produced by gene targeting // Proc. Natl. Acad. Sci. 1989. — Vol. 86. — P. 8507.
  48. Gherardi E., Milstein C. Original and artificial antibodies // Nature.1989. Vol. 357. — P. 201−202.
  49. Glennie M.J., McBride H.M., Worth A.T. Preparation and performance of bispecific F (ab'y)2 antibody containing thioether-linked Fab’y fragments // J. Immunol. 1987. -Vol. 139. — P. 2367−2375.
  50. Gooding J.V. Antibodi production by hybridomas // J. Immunol. Meth. -1980. Vol. 39, № 4,-P. 285−302.
  51. Haitinger M. Die grundlagen der Fluoreszenzmikroskopie und ihre Anwendung in der Histologie und Chemie.- Leipzig, 1938. 50 p.
  52. Have P. Use of enzyme-linked immunosorbent assay in diagnosis of viral diseases in domestic livestock // Arch. Exper. Vet. Med. -1987. Vol. 41, № 5. — P. 645−649.
  53. Holm Jensen M. Detection of antibodies against hog cholera virus and bovine viral diarrhea virus in porcine serum. A comparative examination using CF, PLA and NPLA assays // Acta Vet. Scand. 1981. — Vol.22, № 1. — P. 85−98.
  54. Hoogenraad N., Helman T., Hoogenraad J. The effect of pre-injection of mice with pristane on ascites tumor formacion and monoclonal antibody production // J. Immunol. Meth. 1983. — Vol. 61. — P. 317.
  55. Patent №.4 678 746. USA. Monoclonal antibodies to epizootic hemorrhagic disease virus antigen / Jochim M.M., Jones S.C. 1987.
  56. Juntti N., Larsson B., Possum C. The use of monoclonal antibodies in enzyme-linked immunosorbent assays for detection of antibodies to bovine viral diarrhoea virus // J. Vet. Med. 1987. — Vol. 34. — P. 356—363.
  57. Inlow D., Lowe D., Howarth B. Improvenments in hybridoma culture and bispecific antibody production// J. Cell. Biochem. 1994. — Suppl. 18d. -P. 188.
  58. Karawajew L., Behrsing O., Kaiser G. Production and ELISA application of bispecific monoclonal antibody against fluorescein isothiocyanate (FITC) and horseradish peroxidase (HRP) // J. Immunol. Meth. 1988. -Vol. 111. — P. 95−99.
  59. Karawajew L., Micheel B., Behrsing O. Bispecific antibody-producinghybrid hybridomas selected by a fluorescence activated cell sorter // J. Immunol. Meth. 1987. — Vol. 96. — P. 265−270.
  60. Kenigsberg R. L., Cuello A.C. Production of a bi-specific monoclonal antibody recognizing mouse kappa light chains and horseradish peroxidase. Applications in immunoassays// Histochemistry. 1990. -Vol. 95. — P. 155−163.
  61. Koler G., Milstein C. Coutinuos cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity //Nature. 1975. — Vol. 256. — P. 495−497
  62. Konieczny L., Bodrzecka K., Laidler P. The combination of IgM subunits and proteolytic IgG fragments by controlled formation of interchain disulphides// Haematologia. -1981. Vol. 14. — P. 95−99.
  63. Kontsekova E., Kolcunova A., Kontsek P. Quadroma-secreted bi (interferon alpha 2 peroxidase) specific antibody suitable for one-step immunoassay// Hybridoma. -1992. — Vol. 11. — P. 461−468.
  64. Koolwijk P., Rozemuller E., Stad R.K. Eurichment and selection of hybrid hybridomas by percoll density gradient centrifugation and fluorescent-activated cell sorting//Hybridoma. -1988. Vol. 7. — P. 217−225.
  65. Korpowski H., Ferrone S., Akbertini A. Biotechnology in diagnostics // Proc. Int. Symp. Imp. Biotech. Dign.- Amsterdam- New York- Oxford: Elsevier, 1985. P. 326.
  66. Kyhse-Andersen J. Electroblotting of multiple gels: a simple apparatus without buffer tank for rapid transfer of proteins from polyacrylamide tonitrocellulose // Jornal of Biochemical and Biophysical Methods. 1984. -№ 10. — P. 203−209.
  67. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. -1970. Vol. 227. — P. 680−685.
  68. Lebegue V., Joron L., Barque J.-P. Production et caracterisation d’anticorps monoclonaux hybrides presentant une double isotypic IgGi/lgGs // C. r. Acad. Sci. 1990. — Ser. 3. — Vol. 310. — P. 377−382.
  69. Littlefield J.W. Selection of hybrids from matings of fibroblasts in vitro and their presumed recombinants // Science. -1964. Vol. 145. — P. 709 710.
  70. Littlefield J.W. The use daig-resistant markers to study the hybridization of mouse fibroblasts // Exp. Cell Res. 1966. — Vol. 41. — P. 190−196.
  71. Leforban Y., Edwards S., Ibata G. A blocking ELISA to differentiate hog cholera virus antibodies in pig sera from those due to other pestivirus // Ann. Rech. Vet. 1990. — Vol.21, № 2. — P. 119−129.
  72. Leforban Y., Have P., Jestin A. Utilisation d' un ELISA pour la mise en evidence des anticorps peste porcine classique dans les serum de pores. // Rec. Vet. Med. 1987. — Vol.163, № 6−7. — P. 667−677.
  73. Massino Yu.S., Kisim E.A., Dergunova N.N. Construction of a quadroma to a-endorphin/hoseradish peroxidase using an actinomycin D-resistant mouse myeloma cell line // Immunol. Lett. -1992. Vol. 33. — P. 217 222.
  74. McKearn T.J. Cloning of hybridoma cells by limiting dilution in fluid phase. // Kennett R.H., McKearn T.J., Bechtol K.B. (Eds.), Monoclonal Antibodies. Hybridomas: A new dimension in biological analises, Plenum Press, 1988. P. 374.
  75. McCullough K. C., Butcher R. Monoclonal antibodies against foot-and-mouth disease virus 146S and 12S particles // Arch. Virol. 1982. — Vol. 74. -№ 1. — P. 1−9.
  76. Milstein C., Cuello A.C. Hybrid hybridomas and their use in immunohistochemistry // Nature. 1983. — Vol. 305. — P. 537−540.
  77. Milstein C., Cuello A.C. Hybrid hybridomas and the production of bi-specific monoclonal antibodies// Immunol. Today. 1984. — Vol. 5. — P. 299−304.
  78. Monoclonal antibodies to identify Zinga as Rift Valley Fever virus / Meegan J.M., Digoute J.P., Peters C.J., Shope R.E. // Lancet. 1983. -Vol. 1. — P. 641.
  79. Moorhead P. S., Nowell P.W., Mellman W.J. Chromosome preparations of leucocytes cultured from human peripheral blood // Exptl. Cell. Res. -1960. Vol. 20. — P. 613−616.
  80. Morrison S. Transfectomas provide novel chimeric antibodies // Science. 1985. Vol. 229. — P. 1202.
  81. Nielsen K.H., Henning M.D. Uses of monoclonal antibodies in veterinary medicine // Genet. Eng. and Biotechnol. 1990. — Vol. 10. — P. 14−18.
  82. Nisonoff A., Rivers M.M. Recombination of a mixture of univalent antibody fragments of different specificity// Arch. Biochem. Biophis. -1960.-Vol. 93. P. 460.
  83. Nolan O., O’Kennedy R. Bifunctional antibodies: cencept, production and applications// Biochim. et biophus. acta. Protein Struct, and Mol. Enzymol.- 1990. -Vol. 1040. P. 1−11.
  84. Ohara Y., Tashiro M., Takase S. Detection of antibodies to M protein of measles virus, patients with subacute sclerosing panencephalits // Microbiol. Immunol.- 1985. Vol.29, №. 8. — P.709−723.
  85. Oi V.T. & Herzenberg L.A. Immunoglobulin-producing hybrid cell lines // Mishell B.B., Shiigi S.M. (Eds.), Selected Methods in Cellular Immunology. 1980. — P. 351−372.
  86. Parham P. In vitro production of a hybrid monoclonal antibody that preferentially binds to cells that express both HLA-A2 and HLA-B7 // Hum. Immunol. 1985. — Vol. 12. — P. 213.
  87. Paulus H. Preparation and biomedical application of bispecific antibodies// Behring Inst. Mitt. 1985. — № 78. — P. 118−132.
  88. Peacock J.S., Colsky A.S., Pinto V.B. Lectins and antibodies as tools for studying cellular interactions// J. Immunol. Meth. 1990. — Vol. 126. — P. 147−157.
  89. Pejsak Z., Kolacz I. Zastosowanie metody ELISA w badaniach przegladowych w kierunku pomoru klasycznego swin. // Med. Wet. -1991. Vol.47. — № 9, P. 400−401.
  90. Portetelle D., BruckC., Mammerickx M. et.al. Use monoclonal antibody in a ELISA test for the detection of antibodies to bovine leukemia virus // J. Virol. Meth. 1983. — № 6. — P. 19—29.
  91. Protein measurement with the folin phenol reagent / Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. // J. Biol. Chem. 1951. — Vol. 193. — P. 265−275.
  92. Raybould T. J. G., Crough C. F., McDougal L. J. Bovine-murine hybridoma that secretes bovine monoclonal antibody of defined specificity // Am. J. Vet. Res. 1985. — Vol. 46, № 2. — P. 426—427.
  93. Roseto A., lantherot J. F., Bobulesko P. Isolement d’hybrides cellulatires secretant des anticorps specifiques du coronavirus enterique bovin // C. r. Acad. Sci. 1982. — Vol 294, № 8. — P. 347—349:
  94. Samoilovich S.R., Dugan C.B., Macario A.J.L. Hybridoma technology: new developments of practical interest // J. Immunol. Meth. 1987. — Vol. 101. — P. 153−170.
  95. Saunders G.C. Development and evaluation of enzyme-labeled antibody test for the rapid detection of hog cholera antibodies // Am. J. Vet. Res. -1977.-Vol.38. -P.21−25.
  96. Schoemaker H., Wall M., Zurawski V. The emergance of monoclonal antibody in diagnosis and therapy//Biotech. 84: World Biotech. Rept.: Proc.Conf. London, May 1984. -N.-Y.Pinner, 1984. Vol.2. — P. 405 420.
  97. Selected methods in cellular immunology / Ed. by Mishell B.B., Shiigi
  98. S.M., W.H. Freeman and Company. San Francisco, 1980. — 486 p.
  99. Shannon A. D., Morrissy C., Mackintosh S. G. Detection of hog cholera virus antigens in experimentally-infected pigs using an antigen-capture ELISA. // Vet. Microbiol. 1993. — Vol.34, № 3. — P. 233 248.
  100. Smith J.S., Summer J.W., Rou/ml lat L. Enzyme immunoassay for rabies antibody in hybridoma culture fluids and its appication to differentiation of street and laboratory strains of rabies virus // J. Clin. Microbiol. 1984. — Vol. 19, № 2. — P. 267—272.
  101. Smith W., Jarrett A.L., Beattie R.E. Immunoglobulins secreted by a hybrid-hybridoma: Analisis of chain assemblies// Hybridoma. 1992. -Vol. 11. — P. 87−98.
  102. Songsivilai S., Lachmann P.J. Bispecific antibodies: A tool for diagnosis and treatment of disease // Clin. Exp. Immunol. 1990. — Vol. 79. — P. 315−321.
  103. Stratieva-Taneeva P.A., Khaidukov S.V., Kovalenko V.A. Bispecific monoclonal antibodies to human interleukin 2 and horseradish peroxidase // Hybridoma. 1993. — Vol. 12, № 3. — P. 271−284.
  104. Stratieva P. A., Khaidukov S.V., Kovalenko V.A. Preparation of tetradomas producing bispecific monoclonal antibodies to human interleukin 2 and horseradish peroxidase // Докл. Болг. АН. Т. 46, № 8. -С. 105−108.
  105. Suresh M.R., Cullo А.С., Milstein С. Bispecific monoclonal antibodies from hybrid hybridomas. // N.O. Kaplan, Colowick S.P. Methods in Enzymol.- 1986. Vol. 121. — P. 210−228.
  106. Tada H., Toyoda Y., Iwasa S. Bispecific antibody-producing hybrid hybridoma and its use in one-step immunoassays for human lymphotoxin // Hybridoma. 1989. — Vol. 8. — P. 73−83.
  107. Tada H., Toyoda Y., Iwasa S. Production and application of bispecific monoclonal antibodies // Phys.-Chem. Biol. 1989. — Vol. 33. — P. 39−45.
  108. Takahashi M., Fuller S.A. Production of murine hybrid-hybridomas secreting bispecific monoclonal antibodies for use in urease-based immunoassays // Clin. Chem. 1988. — Vol. 34. — P. 1693−1696.
  109. Terpstra C., Bloemraad M., Gielkens A.L.J. The neutralizing peroxidase-linked assay for detection of antibody against swine fever virus // Vet: Microbiol. 1984. -Vol.9, № 2.-P. 113−120.
  110. Tijssen P. Practice and theory of enzyme immunoassays: Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology. Vol. 15 / Ed. by Burdon R.H., Knippenberg P.H. Amsterdam- New York- Oxford: Elsevier, 1985.
  111. Van Zaan D., Jzerman J. Monoclonal antibodies against bovine immunog-lodistinguish bovine T and B lymphosytes // Vet. Immunol. Immunopa-thol. 1989. — P. 87−102.
  112. S.H., Goedert J.J., Sarngadharan M.G. // J.A.M.A. 1985. — Vol. 253.-P. 221−225.
  113. Wensvoort G., Bloemraad M., Terpstra C. An enzyme immunoassay employing monoklonal antibodies and detecting specifically antibodies to classical swine fever virus // Vet. Microbiol. 1988. -Vol.17, № 2. — P. 129−140.
  114. Wensvoort G., Terpstra C., Boonstra J. Production of monoclonal antibodies against swine fever virus and their use in laboratory diagnosis. // Vet. Microbiol. 1986. — Vol. 12, № 2. — P. 101−108.
  115. Westenbrink F., Kimman T. G. Immunoglobulin M-specific enzyme-linked immunosorbent assay for serodiagnosis of bovine respiratory syncytial virus infections // Am. J. Vet. Res. 1987. — Vol. 48, № 7. — P. 1132—1137.
  116. Wilkes D. An alternative to monoclonal antibodies? // Lab. Equip. Dig. -1989. Vol. 27. — P. 17−18.
  117. Which of the commonly used marker enzymes gives the best results in colorimetric and fluorimetric enzyme immunoassays: horseradish peroxidase, alkaline phosphatase or (3-galactosidase? / Porstmann B.,
  118. T., Nugel E., Evers U. // J. Immunol. Meth. 1985. — Vol. 79. -P. 27−37.
  119. Wong J.T., R.B. Colvin Bi-specific monoclonal antibody (BSMA) production by fusion of pre-existing hybridomas // J. Allergy Clin. Immunol. 1986. — Vol. 77. — P. 229.
  120. Wong J.T., Colvin R.B. Bi-specific monoclonal antibodies: selective binding and complement fixation to cells that express two different surface antigens // J. Immunol. 1987. — Vol. 139. — P. 1369−1375.
  121. Yolken R.H. Use of monoclonal antibodies for viral diagnosis//New Develop, in Diagn. Virol. -1983. P. 177−195.
  122. Yu L., Liu J. H., Shao M.F. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of antibodies against swine fever virus using horseradish-peroxidase-protein A as conjugate. // Dtsch. Tierarztl. Wschr. 1988. — Vol.95, № 3. -P. 106−107.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!