Сравнительная оценка информативности инвазивных и неинвазивных методов диагностики хеликобактериоза

Hp ассоциированные заболевания (ЯБ, ХГ, рак желудка) занимают значительную долю в структуре болезней органов пищеварения, представляя собой важную медико-социальную проблему [24]. Ими страдают преимущественно лица молодого и среднего возраста, представляющие основную часть трудоспособного населения, что приводит к значительным экономическим потерям.

Одним из самых актуальных вопросов, является диагностика хеликобактериоза. В настоящее время для выявления хеликобактериоза используется большое количество инвазивных и неинвазивных методов. Однако, с течением времени стало ясно, что ни один из них не является универсальным и у каждого метода есть свои преимущества и недостатки.

В соответствии с I, II и III Маастрихтскими соглашениями (1−1996, II-2000, III-2005) диагностика Hp инфекции рекомендована проводиться неинвазивными методами, преимущественно уреазным дыхательным тестом на основе нерадиактивного изотопа 13С (13С-УДТ).

В отечественной гастроэнтерологии этот метод практически не применяется и для использования в клинической практики он остается недоступным. Наиболее часто для диагностики Hp инфекции, применяется морфологическое исследование и Clo-test (уреазный), оба метода являются инвазивными. За счет этого значительно увеличивается количество эндоскопических исследований, а также вероятность реинфецирования хеликобактериозом. В России проводились единичные исследования 13С-УДТ на основе лазерной спектрометрии с использованием импортной мочевины.

Поэтому чрезвычайно актуальным является исследование диагностических характеристик методов, а также совершенствование и внедрение в практическую гастроэнтерологию новых неинвазивных высокоинформативных методов диагностики хел икобактериоза, основанных на использовании отечественных реагентов для 13С-УДТ.

Цель работы:

Изучить диагностические характеристики инвазивных и неинвазивных методов диагностики инфекции Helicobacter pylori у больных с заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки, до и после эрадикационной терапиимодифицировать и внедрить 13С-УДТ на основе.

13 отечественного реагента «С-Карбамида-Теста» .

Задачи исследования:

1. Сравнить чувствительность, специфичность и точность инвазивных и неинвазивных методов диагностики Hp инфекции, относительно «золотого» стандарта — морфологического метода, до и после антихеликобактерной терапии.

2. Провести корреляционный анализ данных 13С-УДТ мод. (уреазная активность) и результатов гистологического исследования (численность колонии Hp).

3. Провести сравнение результатов 13С-УДТ на основе.

11 модифицированного протокола (отечественный реагент С-мочевина) с данными 13С-УДТ стандартного протокола (импортный.

1 Ч реагент С-мочевина).

4. Изучить диагностическую значимость неинвазивных методов диагностики Hp инфекции (13С-УДТ мод., ПЦР определение ДНК Hp в кале и ИФА диагностика антител Hp в крови) при первичном обследовании и после эрадикационной терапии.

Научная новизна.

Впервые в отечественной гастроэнтерологии проведено усовершенствование 13С-УДТ за счет использования в качестве «пробного» завтрака лимонной кислоты с пониженным содержанием n 1 о изотопа С и отечественного реагента «С-Карбамида-Теста». Впервые исследована динамика выхода 13С в пробах выдыхаемого воздуха при.

13 использовании модифицированного С-УДТ до и после эрадикационной терапии.

В сравнении с морфологическим методом определены диагностические характеристики шести методов детекции хеликобактериоза чувствительность, специфичность и точность), в том числе и нового.

1 ^ модифицированного С-УДТ.

Установлено, что бактериологический метод обладает высокой (100%) специфичностью как до, так и после эрадикационной терапии, но низкой чувствительностью и точностью (50% - 64,3% соответственно).

Впервые исследованы диагностические возможности неинвазивных методов диагностики Hp инфекции (13С-УДТ мод., ПЦР определение ДНК Hp.

1 7 в кале и ИФА диагностика антител Hp в крови). Выявлено, что С-УДТ мод. является наиболее точным, достоверным и удобным методом диагностики хеликобактериоза. В работе продемонстрирована целесообразность использования серологических и молекулярных методов для первичной диагностики Hp инфекции.

Впервые проведено сопоставление между интегральным показателем уреазной активности, выявляемой с помощью 13С-УДТ мод. и степенью колонизации желудка Hp инфекцией, определяемой при морфологическом исследовании. При этом установлена корреляционная связь средней силы.

Практическая значимость.

Разработан и внедрен в клиническую практику новый неинвазивный 13С.

1 7.

УДТ на основе отечественного реагента «С-Карбамида-Теста» .

Установлено, что указанный дыхательный тест является оптимальным методом диагностики хеликобактериоза до и после эрадикационной терапии, обладает высокими диагностическими характеристиками (чувствительность, специфичность и точность). 13С-УДТ мод. позволяет производить количественную диагностику Hp инфекции. Метод безопасен, не имеет противопоказаний, легковоспроизводим и удобен для пациента. Неинвазивность и высокая информативность 13С-УДТ мод. позволяет рекомендовать его для масштабных эпидемиологических исследований.

Модификация 13С-УДТ позволила уменьшить сроки диагностики Hp инфекции в среднем на 3−5 дней, в 3−5 раз уменьшить количество тестпрепарата (с 75−100 до 20 мг) без потери диагностической информативности метода и за счет этого значительно снизить стоимость теста.

Изучена диагностическая значимость неинвазивных методов.

17 диагностики Hp инфекции (С-УДТ мод., ПЦР определение ДНК Hp в кале и ИФА диагностика антител Hp в крови) до и после эрадикиционной терапии. Показана возможность использования серологических и молекулярных методов для первичной диагностики Hp инфекции.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Модифицированный С-УДТ является высокоинформативным, неинвазивным методом, как для диагностики Hp инфекции, так и для контроля эрадикационной терапией.

2. Уровень уреазной активности при проведении 13С-УДТ мод. достоверно коррелирует со степенью обсеменения Hp слизистой оболочки желудка, определяемой морфологическим методом, что позволяет использовать его в качестве количественного метода диагностики Hp инфекции.

3. Молекулярные (ПЦР определение ДНК Hp в биоптате и кале) и иммунологические методы (ИФА диагностика антител Hp в крови) позволяют достоверно определять Hp инфекцию при первичной диагностике. Для контроля эффективности эрадикационной терапией, использование методов основанных на ПЦР в связи с низкими диагностическими характеристиками ограничено. 4. Бактериологический метод диагностики Hp инфекции обладает низкой чувствительностью, но высокой 100% специфичностью, как при первичной диагностике, так и после лечения.

Внедрение в практику Основные положения работы нашли свое практическое применение в отделении гастроэнтерологии МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского.

Апробация работы Проведена на совместной на совместной научно-практической конференции отделений гастроэнтерологии, эндоскопии и терапевтического отделения КДО МОНИКИ, кафедр терапии ФУВ МОНИКИ, эндоскопии ФГУ Учебно-научного МЦ УД Президента РФ и кафедры стоматологии МГМСУ, лаборатории масс-спектрометрии института биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г. К. Скрябина Пущинского научного центра РАН, кафедры микробиологии, вирусологии и биотехнологии Пущинского ГУ, лаборатории импульсных процессов ГНЦ РФ «ТРИНИТИ» (Москва, 14 июня 2006).

Материалы диссертации доложены и представлены на: Научном обществе терапевтов Московской области и клиники гастроэнтерологии МОНИКИ. «Инновационные технологии в диагностике и лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта и печени». г. Москва. 2005 г.- Региональной конференции «Развитие инноваций в Московской области: Приоритеты, Механизмы, Опыт» г. Троицк. 2005 г.- Втором съезде Всероссийского масс-спектрометрического общества. «Масс-спектрометрия и ее прикладные проблемы», г. Москва. 2005 г.- Научном обществе терапевтов Московской области им. Д. Д. Плетнева «Современные методы диагностики и лечения заболеваний желудка, ассоциированных с Helicobacter pylori «. г. Москва. 2005 г.- VI Международном Славяно-Балтийском научном форуме «Санкт-Петербург-Гастро-2004» г. Санкт-Петербург.2004г.- Рабочем совещание. «Неинвазивная диагностика хеликобактерной инфекции у детей», г. Пущино. 2005 г.- Конференции «Медицинская физика». г. Троицк. 2004 г.- Конференции «Фундаментальные науки-медицине». г. Москва. 2003 г.

По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, из них 5 в центральной печати.

Структура и объем работы:

Диссертация изложена на 161 страницах машинописного текста. Состоит из трех глав, введения, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Диссертация содержит 20 таблиц и 32 рисунка. Библиография состоит из 58 отечественных и 156 зарубежных источников.

ВЫВОДЫ.

1. 13С-УДТ с модифицированным протоколом на основе отечественного реагента «13С-Карбамида-Теста» оказался наиболее чувствительным, специфичным и точным методом диагностики Hp инфекции из всех использованных. Его чувствительность до и после эрадикационной терапии составила 98,7%о — 90,9%, специфичность 100%, точность 98,8%о — 96,5%о соответственно.

I Ч.

2. Выявлена полная идентичность результатов С-УДТ мод. 1 отечественный реагент) со стандартным С-УДТ (импортный реагент), как при положительных, так и отрицательных результатах. Совпадение выявлено в 100% случаев, что говорит об их взаимозаменяемости.

3. При первичной диагностике Hp инфекции тремя неинвазивными методами (13С-УДТ мод., ПЦР определение ДНК Hp в кале и ИФА диагностика антител Hp в крови) получены высокие показатели чувствительности и точности (98,78% - 98,85%- 88,1% - 87,5%- 92,9% -87,5% соответственно). После эрадикационной терапии наиболее информативным методом оказался 13С-УДТ мод.

4. Установлена корреляционная связь средней силы (R=0,72- <0,001) между степенью обсеменения Hp слизистой оболочки желудка и.

1 о уровнем уреазной активности при использовании С-УДТ мод., что представляет основу количественной характеристики УДТ.

5. Чувствительность метода ПЦР определения ДНК Hp в кале при первичной диагностике существенно не отличается от метода ПЦР на ДНК Hp в биопсийном материале (87,5 — 94,64% соответственно). После эрадикационной терапии диагностические характеристики методов основанных на ПЦР существенно снизились (чувствительность 81,25%-71,43% и 56% - 57,14% соответственно).

6. Бактериологический метод диагностики Hp инфекции обладает низкой чувствительностью (при первичной диагностике 51,79% и 43,75% после лечения), но высокой 100% специфичностью, как при первичной диагностике, так и после лечения. Его трудоемкость, необходимость высококачественных микроаэрофильных условий, транспортных и питательных сред, а также длительный срок ожидания результатов резко ограничивает использование этого метода в клинической практике.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Для первичной, скрининговой и постэрадикационной диагностики Hp инфекции следует применять неинвазивный модифицированный 13С.

1 о.

УДТ на основе отечественного «С-Карбамида-Теста». Он высокоинформативен, удобен, экологически безопасен и легко воспроизводим для медицинского персонала. По основным диагностическим характеристикам он аналогичен морфологическому методу диагностики Hp инфекции.

2. При невозможности проведения морфологического метода.

13 диагностики Hp инфекции, рекомендуется использование С-УДТ мод., который наряду с качественной оценкой дает количественную характеристику колонизации микроорганизма.

3. Молекулярные (ПЦР определение ДНК Hp в кале и биопсийном материале) и серологические (ИФА диагностика антител Hp в крови) методы рекомендуется использовать при первичной диагностике Hp инфекции. После эрадикационной терапии применение данных методов нецелесообразно в связи со снижением их диагностических характеристик.