Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Синтез гетерологичных функционально активных GPCR в клетках метилотрофных дрожжей Pichia pastoris

Диссертация: Синтез гетерологичных функционально активных GPCR в клетках метилотрофных дрожжей Pichia pastoris
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Таким образом, в настоящем литературном обзоре описаны основные достижения фундаментальной науки, направленные на изучение рецепторов, сопряженных с G-белком и их функциональной активности. В целом, дано поверхностное изложение физиологического значения данных белков, но, несмотря на это, очевидно, что роль их велика и многообразна. Затруднения, возникающие при изучении GPCR, в первую очередь… Читать ещё >

Синтез гетерологичных функционально активных GPCR в клетках метилотрофных дрожжей Pichia pastoris (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • Глава 1. Обзор литературы
    • 1. 1. Основные сведения о рецепторах, сопряженных с G-белком
      • 1. 1. 1. Общие представления о рецепторах семейства GPCR
      • 1. 1. 2. Механизмы активации рецепторов и трансдукции
      • 1. 1. 3. Физиологическая роль рецепторов, сопряженных с G-белком
    • 1. 2. Основные подходы получения мембранных рецепторов
      • 1. 2. 1. Получение рецепторов из природных источников
      • 1. 2. 2. Гетерологичная экспрессия генов рецепторов семейства GPCR
      • 1. 2. 3. Выделение и очистка мембранных белков
      • 1. 2. 4. Основные методы восстановления липидной среды для мембранных рецепторов

Способность воспринимать и распознавать информацию, получаемую из окружающей среды, является одним из важнейших свойств живых организмов. На сегодняшний день подробно изучены физиологические основы сигнальных механизмов, однако, их понимание невозможно без детальных биофизических и биохимических исследований всех вовлеченных молекулярных структур, к числу которых относятся рецепторы, сопряженные с G-белком.

Рецепторы, сопряженные с G-белком, (GPCR или 7ТМ-рецепторы) представляют собой крупнейшее семейство интегральных трансмембранных белков человека. Эти рецепторы являются ключевыми элементами механизмов молекулярного распознавания и саморегуляции эукариот. Взаимодействуя с такими лигандами, как гормоны (адреналин, норадреналин), цитокины (лимфокины, интерлейкины), хемокины, аттрактан-ты (феромоны, различные запахи) и нейротрансмиттеры (ГАМК, допамин, серотонин), рецепторы, расположенные на специализированных клетках, участвуют в большинстве физиологических процессов в организме, а их дисфункция приводит к серьезным патологиям. Последние фундаментальные исследования в области биохимии, молекулярной и клеточной биологии показывают их важную роль во многих слабоизученных внутриклеточных механизмах.

Важно отметить, что рецепторы семейства GPCR являются молекулярными мишенями для более половины известных лекарственных препаратов, вследствие чего проявляется их терапевтический эффект. Следовательно, любые исследования, направленные на изучение структурных особенностей, свойств и механизмов функционирования GPCR, являются предпосылками для создания лекарств нового поколения.

Несмотря на уникальность, многообразие и важность рецепторов, на сегодняшний момент имеются подробнее данные о кристаллических структурах родопсинов человека и быка, бета1- и бета2-адренергических, аденозинового Агл и хемокинового CXCR4, гистаминового Hi рецепторов человека. Этот факт объясняется низким уровнем экспрессии GPCR в хозяйских клетках, гетерогенностью и нестабильностью молекул вне липидного бислоя. Применение методов генетической инженерии и подходов гетерологичной экспрессии генов помогает получить требуемое количество целевых белков для изучения молекулярных участников процесса передачи сигнала.

Использование клеточной системы Е. coli позволяет наработать достаточные количества GPCR, однако, бактериальные клетки зачастую не способны синтезировать рецепторы с нативной третичной структурой, осуществлять их процессинг, вследствие чего, значительно уменьшается или не наблюдается их функциональная активность. Длительность, трудоемкость и дороговизна — характерные черты экспрессии при использовании клеточных линий млекопитающих и насекомых.

Перспективной является система экспрессии на основе клеток метилотрофных дрожжей Pichia pastoris. Клетки низших эукариот данного вида обладают развитой системой шероховатого эндоплазматического ретикулума для осуществления разнообразных посттрансляционных модификаций белков и схожим с клетками млекопитающих строением цитоплазматической мембраны. Как показывает практика, системы на основе Р. pastoris идеально подходят для получения высокотоксичных трансмембранных белков, поскольку дрожжи можно выращивать в больших объемах до высоких плотностей и эффективно контролировать уровень транскрипции целевых генов, используя строго индуцибельные промоторы. В этой связи весьма актуальным является проведение работ, посвященных получению перспективных штаммов-продуцентов для синтеза гетерологичных GPCR, в количествах, требуемых для структурных и молекулярно-биологических исследований.

Целью настоящей диссертационной работы является разработка эффективных систем гетерологичной экспрессии генов GPCR на основе клеток метилотрофных дрожжей Р. pastoris, изучение их функциональной активности и разработку подходов для выделения и очистки функционально активных рецепторов.

Для этого в работе решались следующие задачи:

1. Получение экспрессионных конструкций, содержащих рекомбинантные гены бета2-адренергического (hADRb2), дофаминового (hDRD3), галанинового (hGALRl) рецепторов, рецептора 174 (hGPR174), рецептора-2 меланокортинов (hMC2R) человека.

2. Создание штаммов Р. pastoris — продуцентов данных интегральных мембранных протеинов и оптимизация условий их культивирования.

3. Разработка эффективных протоколов выделения и очистки гетерологичных рецепторов (на примере бета2-адренергического рецептора и рецептора — 2 меланокортинов) из мембранной фракции дрожжей, создание аффинных сорбентов для отделения функционально-активных форм молекул и изучение гомогенности полученных белковых препаратов.

4. Разработка метода тестирования функциональной активности рецепторов с лигандами пептидной природы, на примере рецептора — 2 меланокортинов, 1 который включает в себя создание эффективной системы экспрессии на основе клеток Е. coli для его природного лиганда — адренокортикотропного гормона (АСТН).

В настоящей диссертационной работе предложены новые стратегии получения рецепторов в клетках Р. pastoris, позволяющие наработать миллиграммовые количества функционально активных белков для структурных и биологических исследований.

Разработан оригинальный подход тестирования функциональной активности рецепторов с лигандами белковой природы. Впервые показано, что рецептор меланокор-тинов, локализованный в мембранной фракции дрожжей, способен связываться с адре-нокортикотропным гормоном. Специфичность взаимодействия была подтверждена расчетом величины константы связывания рецептора с АСТН. Установлено, что, hMC2R, продуцируемый в клетках Е. coli и локализованный в бактериальной мембране, не связывается с лигандом.

Разработан оригинальный метод получения адренокортикотропного гормона и его производных для решения различных молекулярно-биологических задач.

Показана возможность использования гетерологичного hADRb2 в качестве антигена при разработке тест-систем для определения антител к рецептору, что может иметь большое значение в клинической медицине, и определяет практическую значимость данной работы. Изучены особенности взаимодействия гетерологичного hADRb2 с его аутоантителом в присутствии агонистов и антагониста рецептора.

выводы.

1. На основе клеток метилотрофных дрожжей Р1сЫа раз^ш получены эффективные системы гетерологичной экспрессии, обеспечивающие биосинтез целевых белков в количестве свыше 20 мг/л среды при оптимизированных условиях культивирования.

2. На основе бактериальной системы экспрессии разработаны оригинальные методы получения АСТН и его производных АСТН-ВЮ и АСТН-У5. Выход очищенных гормонов составил не менее 100 мг/л для АСТН и АСТН-У5 и не менее 15 мг/л для его биотинилированной формы.

3. Разработан подход для тестирования функциональной активности меланокорти-нового рецептора. Впервые показано, что ЬМС2К, локализованный в мембранной фракции дрожжей, функционально активен. Измеренная величина константы связывания с АСТН составила 0,23 нМ.

4. Разработаны методы аффинной хроматографии для выделения ЬМС2Я и ЬАОЯЬ2 в функционально активном состоянии. Выход активного белка составил более 1 мг/л.

5. Показано использование рекомбинантного 11АОГ1Ь2 для определения титра ауто-антител, а также влияние лекарственных субстанций — альпренолола, кленбуте-рола и сальбутамола на аффинность антитела.

1.3.

Заключение

.

Таким образом, в настоящем литературном обзоре описаны основные достижения фундаментальной науки, направленные на изучение рецепторов, сопряженных с G-белком и их функциональной активности. В целом, дано поверхностное изложение физиологического значения данных белков, но, несмотря на это, очевидно, что роль их велика и многообразна. Затруднения, возникающие при изучении GPCR, в первую очередь, связаны со сложностью исследования мембранных рецепторов, которые требуют мультидисциплинарных знаний и владения экспериментальной техникой на высоком уровне. Примером этому может служить родопсин — первый, хорошо изученный представитель данного семейства. Muller в 1851 году впервые отметил, что клетки, располагающиеся на глазной сетчатке, окрашены в темно-красный цвет. Этот факт вошел в историю как первое упоминание о родопсине — «зрительном пурпуре». Несмотря на развитие методов белковой химии, полная аминокислотная последовательность молекулы и ее топология в мембране определена лишь в 1983 году сотрудниками лаборатории института Биоорганической химии им. М. М. Шемякина АН СССР под руководством Ю. А. Овчинникова. Рентгеноструктурный анализ высокого разрешения (2,8 ангстрем) для бычьего родопсина в темновой фазе был получен лишь в 2000 году. Он подтвердил и дополнил существующие на тот момент представления о механизмах взаимодействия мембранного белка с ретиналем, особенности белок-липидных взаимодействий (Palzcewski, 2000). В данный полуторовековой интервал исследования одной молекулы было сделано и множество других важных открытий, однако, и на сегодняшний день изучение зрительного пигмента остается актуальным.

Благодаря методам генетической инженерии, вторая уникальная структура — бе-та2-адренергического рецептора получена лишь в 2007 году. Поэтому любые исследования, посвященные получению, очистке, стабилизации, анализу функциональной активности рецепторов, сопряженных с G-белком считаются ценным фундаментальным инструментом, для накопления информации о самом представительном классе белков человека.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Реактивы и оборудование.

В процессе работы было использовано следующее оборудование. Центрифуга «BR 4i» (Jouan Thermo Electron Corporation, США) — настольные микроцентрифуги: «5414», «5415С» (Eppendorf, Германия). Термомиксер «Thermomixer Comfort 5355» (Eppendorf, Германия) — термоциклер для ПЦР «Mastercycler® Personal 5332» (Eppendorf, Германия) — термостат водяной «TW-2» (Sky Line ELMI, Латвия) — термостат «Гном» (ДНК-Технология, Россия). Магнитные мешалки «MR 3000», «MR 3001» (с подогревом) (Hiedolph, Германия), рН-метр 440 (Аквилон, Россия). Источник тока «Эльф-4» (ДНК-Технология, Россия), горизонтальная камера для электрофореза нуклеиновых кислот «SE-1» (Helicon, Россия) Россиявертикальная камера для электрофореза белков «MiniProtean3» (Bio-Rad, Германия). Аквадистиллятор ДЭ-10 «789» (Электромедобору-дование, Россия) — установки для очистки воды «Milli-Q EASYpurell» (UV/UF ultrapure water system), «REVERSINO» (Werner, Германия). Напольный инкубатор-шейкер «CERTOMAT® BS1» (Sartorius laboratory, Германия), инкубатор-шейкер «INNOVA® 44» (New Brunswick Scientific, США) — воздушный термостат «ТС-1/20» (Смоленское СКТБ СПУ, Россия), шейкер «Unimax 2010» (Hiedolph, Германия). Кельвинатор «MDF-381-АТ» (Sanyo, США) — холодильник «S-233» (Stinol, Россия). Ламинарный бокс «CAT ВЗ-1000» (KOJAIR, Финляндия) — автоклав «MLS-3780» (Sanyo, США). Спектрофотометр «GENESIS 10» (Thermo Electron Corporation, США) — весы «UW2200H» (Shimadzu, Япония), сверхточные весы «BP211D» (Sartorius laboratory, Германия) — электропоратор «2510» (Eppendorf, Германия). Вакуумный насос «ASHCROFT» (Millipore, США), система для препаративной хроматографии «АКТА EXPLORER» (GE Healthcare, Швеция), устройство для нанесения образцов на мембрану для дот-блота «DOT®Apparatus» (BioRad, США). Набор автоматических пипеток «Pipetman® Р20, PI00, Р200, PI000» (Gil-son, США), вортексы «VD-6» (Sky Line ELMI, Латвия), «REAX» (Hiedolph, Германия).

В процессе работы была использована следующая посуда и расходные материалы. Стаканы, цилиндры, конические колбы фирм («Simax», Чехия), кварцевые кюветы фирмы (Carl Roth, Германия) — мембраны из нитроцеллюлозы «HyBond С» и PVDF мембраны «HyBond Р» (GE Healthcare, Швеция) для иммуноблотинговых исследований, шприцевые насадки для фильтрования «Millex® GV, PVDF» 0.45 цт, 0.22 (im и 0.1 цт фирмы (Millipore, США) — системы для фильтрования «Stericup® GP Express Plus» объемом 250 мл, 500 мл (Millipore США). Воронки Бюхнера и склянки для дегазирования растворов («Schott Duran», Германия).

Полипропиленовые пробирки емкостью 0.25, 0.6, 1.7 и 2.0 мл, наконечники для автоматических пипеток, полипропиленовые пробирки емкостью 15 и 50 мл (Corning, США), наконечники для дозатора 5, 10, 25 и 50 мл фирмы, чашки Петри с крышкой, микробиологические петли и иглы (Greiner Bio-One, Германия). Лабораторная пленка «Parafilm® М» (American National Can, США), кюветы для электропорации (диаметр зазора 2.0 мм) (Eppendorf, Германия), стеклянные шарики (диаметром 500 мкм) фирмы (Sigma, Германия). Планшеты для ИФА среднего связывания «Costar» (Corning, США). Латексные перчатки (Kimberly-Clark Professional, США).

В ходе были использованы реактивы высокой степени чистоты и удовлетворяющие фармакопейным стандартам. Кислота ледяная уксусная о.с.ч. (Химический реактив, Россия), Кислота соляная х.ч. (Сигма Тек, Россия). Для приготовления микробиологических сред использовались бакто-пептон, бакто-агар, дрожжевой экстракт (Becton Dickinson Германия), (Difco, США), YNB без витаминов и аминокислот (Sig-maAldrich, США) — глюкоза, лактоза, глицерин (Рапгеас Испания), метанол (Merck, Германия), сорбитол (Serva Feinbiochemica, Германия), изопропил-в-D-l-тиогалактопиранозид (ИПТГ), пара-аминобензойная кислота, кальция пантотенат, ци-анкобаламин, биотин, альфа-липоевая кислота, рибофлавин, пиридоксин, фолиевая кислота, тиамин, ниацин (SigmaAldrich, США). Антибиотики «Zeocin®» (Invitrogene, США) — ампициллин, канамицин, хлорамфеникол, тетрациклин (Gerbu, Германия), ди-метилсульфоксид (Рапгеас Испания). Реактивы для приготовления буферов: дигидро-фосфат калия (натрия), гидрофосфат дикалия (динатрия), хлорид натрия (калия), 2-амино-2-гидроксиметилпропан-1,3-диол (трис), ацетат натрия (Рапгеас, Испания) — ЭД-ТА, 2-меркаптоэтанол, DTT, HEPES, карбонат (гидрокарбонат) натрия (SigmaAldrich, Германия). Агароза для ДНК-работ, бромистый этидий (Helicon, Россия), борная кислота, акриламид (бисакриламид) (Сигма Тек, Россия), маркер молекулярных весов я/Hindlll фрагментов ДНК Сибэнзим (Россия), смесь dNTP (GE Healthcare, Швеция), персульфат аммония (Bio-Rad, США). Детергенты: додецилсульфат натрия, лаурил саркозин, холат натрия, гемисукцинат холестерина, дезоксихолат натрия, 1,2-дипальмитоил-ли-глицеро-З-фосфохолин (SigmaAldrich, Германия), Triton Х-100, Tween 20, 80 (Рапгеас Испания), н-додецил-Ь-О-мальтозид (Anatrace, США), дигитонин, CHAPS (AppliChem, Германия). Моноклональные антитела мыши против гистидиново-го тага, против константной части мышиного антитела, конъюгированный с щелочной фосфатазой, пероксидазой хрена, моноклональные антитела мыши против эпитопа V5 (SigmaAldrich, США), субстраты NTB, BCIP-T, бычий сывороточный альбумин (V фракция), ТМВ (SigmaAldrich, США), сухое обезжиренное молоко (Fluka, Германия). Коктейль из ингибиторов (SigmaAldrich, США), PMSF (AppliChem, Германия). Изо-пропанол-2, этанол, хлороформ, фенол (Merck, Германия). Альпренолол, кленбутерол, сальбутамол, пропранолола гидрохлорид, дофамина гидрохлорид (SigmaAldrich, США). Натрия боргидрид, 1,4 — бутандиолдиглициловый эфир, персульфат калия (SigmaAldrich, США). Сорбенты для хроматографии белков «Ni-sepharose FF», «Ni-sepharose HP», «Streptavidin-sepharose HP» (GE Healthcare, Швеция), «Ni-NTA» (QIAGEN, Германия), керамический гидроксиапатит «CHT II» (Bio-Rad, США), колонки для обессоливания «PD10» (GE Healthcare, Швеция), мембраны для концентрирования белков на центрифуге «Amicon®Ultra» (MCWO 100 Kda) (Millipore США).

2.2. Ферменты и коммерческие наборы.

Набор реактивов для выделения и очистки ДНК: «QIAprep® Spin Miniprep Kit», «GelElute® Plasmid Miniprep Kit», «MinElute® PCR Purification Kit» (QIAGEN, Германия). Набор для выделения белков методом металлохелатной аффинной хроматографии «Ni-NTA Spin Columns Kit» (QIAGEN, Германия).

В работе были использованы эндонуклеазы рестрикции фирм New England Biolabs (США), Fermentas (Литва) — ДНК-лигаза фага Т4 Fermentas (Литва) — термостабильная Pfui ДНК-полимераза (Promega, США) — термостабильная Taq ДНК-полимераза (Ев-роген, Россия) — полинуклеотид-киназа фага Т4 Fermentas (Литва).

2.3. Штаммы используемых микроорганизмов.

В настоящей работе использовались штаммы P. pastoris и Е. coli, которые приведены в следующей таблице:

Показать весь текст

Список литературы

  1. A.A. Болдырев. Биомембранология. Издание: Кар. НЦ РАН. 2006. С. 170−210.
  2. С.С. Воюцкий. Курс коллоидной химии. Издание 2-е, перераб. и доп. М., «Химия». 1975. С. 400−414.
  3. A.C., Шульга A.A. Синтез гетерологичных рецепторов, связанных с G-белком, в клетках метилотрофных дрожжей P. pastoris. 2011.
  4. С. А., Шульга АА. 2009. Бактериальный синтез, очистка и солюбили-зация мембранного белка KCNE3 регулятора потенциалзависимых калиевых каналов. Биохимия. 74. С. 1650 — 1656.
  5. Е. К. Ланцова В.Б. Миастения. М. 2008. С. 145 147.
  6. В.А., Новикова Е. К., Эльдаров М. А. 2011. Экспрессия модифицированной оксидазы D-аминокислот Trigonopsis variabilis в метилотрофных дрожжах Pichia pastoris. Прикл. Биохим. Микробиол.47. С. 39 45.
  7. Л.Е. Петровская, A.A. Шульга. 2010. Экспрессия G-белок сопряженных рецепторов в Escherichia coli для структурных исследований // Биохимия. 75. С. 881 -891.
  8. А. В. Финкельштейн, О. Б. Птицын Физика белка. 3-е изд., испр. и доп. — М.: КДУ, 2005. С. 147- 159:
  9. S. N. Agathos. 1996. Insect cell bioreactors // Cytotechnology. 20 (1−3). 173−189.
  10. M. Akermoun, M. Koglin, D. Zvalova-Iooss, N. Folschweiller, S. J. Dowell, К. L.
  11. Gearing. 2005. Characterization of 16 human G protein coupled receptors expressed in baculovirus-infected insect cells // Protein Expression Purif. 44 (1). 65−74.
  12. B. Andersen, R. C. Stevens. 1998. The human D1A dopamine receptor: heterologous expression in Saccharomyces cerevisiae and purification of the functional receptor // Protein Expr. Purif. 13. 111−119
  13. G. J. Babcock, T. Mirzabekov, Wojtowicz W. and Sodroski J. 2001. Ligand binding characteristics of CXCR4 incorporated into paramagnetic proteoliposomes // J. Biol. Chem. 276. 38 433−38 440
  14. S. E. Bane, J. E. Velasquez, A. S.Robinson. 2006. Expression and purification of milligram levels of inactive G-protein coupled receptors in E. coli // Protein Expresssion Purif.
  15. J. L. Baneres, D. Mesnier, A. Martin, L. Joubert, A. Dumuis, Bockaert, J. 2005. Molecular characterization of a purified 5-HT4 receptor A structural basis for drug efficacy // J. Biol. Chem. 280 (21). 20 253−20 260.
  16. T.H. Bayburt, S.G. Sligar. 2010. Membrane protein assembly into nanodiscs // FEBS Lett. 584. 1721−1727.
  17. M. J. Benton and F. J. Ayala. Dating the tree of life. 2003 //Science 300(5626). 16 981 700.
  18. B. W. Berger, R. Y. Garcia, A. M. Lenhoff, E. W. Kaler, C. R. Robinson. 2005. Relating surfactant properties to activity and solubilization of the human adenosine A (3) receptor. Biophys. J. 89 (1). 452−464.
  19. S.M. Bhairi. 1997. A guide to the properties and uses of detergents in biological system // Calbiochem Novabiochem corporation.
  20. J. Bockaert, L. fangi, A. Dumius, P. Marin. 2004. GPCR interacting proteins // Pharm. Therap. 103. 203−221.
  21. E. T. Bodor, Waldo G. L., Hooks S. B., Corbitt J., Boyer J. L. and Harden T. K. 2003. Purification and functional reconstitution of the human P2Y12 receptor // Mol. Pharmacol. 64. 1210−1216
  22. P.J. Booth, S.L. Flitsch, L.J. Stern, D.A. Greenhald, P. S. Kim, H.G. Khorana. 1995.
  23. Intermediates in the folding of membrane protein bacteriorhodopsin // Nat. Struct. Biol. 2. 139−143
  24. C. Bouchard, P. Ribeiro, F. Dube, Anctil M. 2003. A new G protein-coupled receptor from a primitive metazoan shows homology with vertebrate aminergic receptors and displays constitutive activity in mammalian cells //J Neurochem 86(5). 1149−1161
  25. A.A. Brian, H.M. McConnell. 1984. Allogeneic stimulation of cyto-toxic t-cells by supported planar membranes // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.—Biol. Sci. 81. 61 596 163
  26. P. Bucher, A. Fischer, P.L. Luisi, T. Oberholzer, P. Walde. 1998. Giant vesicles as biochemical compartments: the use of microinjection techniques // Langmuir 14. 2712−2721
  27. A.M. Buhl, N.L. Johnson, N. Dhanasekaran, G.L. Johnson. 1995. G alpha 12 and G alpha 13 stimulate Rho-dependent stress fiber formation and focal adhesion assembly // J. Biol. Chem. 270. 24 631−24 634
  28. J. A. Butz, R. T. Niebauer, Robinson A. S. Co-expression of molecular chaperones does not improve the heterologous expression of mammalian G-protein coupled receptor expression in yeast // Biotechnol. Bioeng. 2003. 84 (3). 292−304
  29. J. C. Cardoso, V. C. Pinto, F. A Vieira, Clark, M. S., Power D. M. 2006 Evolution of secretin family GPCR members in the metazoa // BMC Evol Biol. 6. 108
  30. M.G., Lefkowitz R.J. 1976. Solubilization and characterization of the b2-adrenergic receptor binding sites of frog erythrocytes // J. Biol. Chem. 251, 2374 -2384
  31. P. Chelikani, P. J. Reeves, U. L. Rajbhandary, Khorana H. G. 2006. The synthesis and high-level expression of a beta (2)-adrenergic receptor gene in a tetracycline-inducible stable mammalian cell line // Protein Sci. 15 (6). 1433−1440
  32. V. Cherezov, J. Clogston, Y. Misquitta, W. Abdel-Gawad, M. Caffrey. 2002. Membrane protein crystallization in meso: lipid type-tailoring of the cubic phase // Biophys. J. 83. 3393−3407
  33. E.Y.T. Chien, W. Liu, Q. Zhao, V. Katritch, G. Won Han, M.A. Hanson, L. Shi, A.H. Newman, J.A. Javitch, V. Cherezov, R.C. Stevens. 2010. Structure of the human dopamine D3 receptor in complex with a D2/D3 selective antagonist // Science. 330. 1091−1095
  34. H.W. Choe, Y.J. Kim, J.H. Park, T. Morizumi, E.F. Pai, N. Krausz, K.P. Hofmann, P. Scheerer, O.P. Ernst. 2011. Crystal structure of metarhodopsin II //Nature. 471. 651 655
  35. K.H. Christoffers Li H. Howells R. D. 2005. Purification and mass spectrometric analysis of the delta opioid receptor // Brain Res. Mol. Brain Res. 136. 54−64
  36. K. H. Christoffers, Li H., Keenan S. M., Howells R. D. 2003. Purification and mass spectrometric analysis of the mu-opioid receptor // Brain Res. Mol. Brain Res. 118. 119−131
  37. K. Van Craenenbroeck, P. Vanhoenacker, J. E. Leysen, G. Haegeman. 2001. Evaluation of the tetracycline- and ecdysone-inducible systems for expression of neurotransmitter receptors in mammalian cells // Eur. J. Neurosci. 14 (6). 968−976
  38. Cregg J. M, Higgins D.R. 1995. Production of foreign proteins in the yeast Pichia pastoris // Canadian J. Botany Supp. 73, 5981 5987
  39. P. S. Cremer, S.G. Boxer. 1999. Formation and spreading of lipid bilayers on planar glass supports // J. Phys. Chem. B 103, 2554−2559
  40. C. E. Dann, J. C. Hsieh, Rattner A., Sharma D., Nathans J., Leahy D. J. (2001) Insights into Wnt binding and signaling from the structures of two Frizzled cysteine-rich domains//Nature 412. 86−90
  41. R.W. Davis, A. Flores, T.A. Barrick, J.M. Cox, S.M. Brozik, G.P. Lopez, J.A. Brozik. 2007 Nanoporous microbead supported bilayers: stability, physical characterization, and incorporation of functional transmembrane proteins // Langmuir 23, 3864−3872
  42. D. Davis., X. B. Liu, D. L. Segaloff. 1995. Identification of the sites of N-linked gly-cosylation on the follicle-stimulating-hormone (Fsh) receptor and assessment of their role in Fsh receptor function // Mol. Endocrinol. 9 (2). 159−170
  43. B. Deslauriers, C. Ponce, Lombard C., Larguier R. Bonnafous, J. C. Marie, J. 1999. N-Glycosylation requirements for the AT (la) angiotensin II receptor delivery to the plasma membrane // Biochem.J., 339, 397−405
  44. C. Dong, C. M. Filipeanu, Duvernay M. T., Wu, G. 2006. Regulation of G proteincoupled receptor export trafficking. // Biochim. Biophys. Acta
  45. S.J. Dowell, A.J. Brown. 2002. Yeast assays for G-protein-coupled receptors // Receptors Channels. 8(5−6). 343−52
  46. M., Stadlmann J. 2009. The effect of temperature on the proteome of recombinant Pichia pastoris // J. Proteome Res. 8, 1380 1392
  47. M.T. Drake. 2006. Trafficking of G protein-coupled receptors // Circ. Res. 99. 570 582
  48. D. Drew. 2003. Assembly and overexpression of membrane proteins in E. coli II Biochim. Biophys. Acta. 1610. 3 10
  49. M. T. Duvernay, C. M. Filipeanu, G. Y. Wu. 2005. The regulatory mechanisms of export trafficking of G protein-coupled receptors // Cell. Signalling.17 (12). 1457−1465
  50. M. R. Eckart, C. M. Bussineau. 1996. Quality and authenticity of heterologous proteins synthesized in yeast // Curr. Opin. Biotechnol. 7 (5). 525−530
  51. E. A. Elion. 2000. Pheromone response, mating and cell biology // Curr Opin Microbiol 3(6). 573−581
  52. C. Eroglu, P. Cronet, Panneels V., Beaufils P. and Sinning I. 2002. Functional reconstitution of purified metabotropic glutamate receptor expressed in the fly eye // EMBO Rep. 3. 491196
  53. S. Faham, J.U. Bowie. 2002. Bicelle crystallization: a new method for crystallizing membrane proteins yields a monomeric bacteriorhodopsin structure // J. Mol. Biol. 316. 1−6
  54. D. F. Feng, G. Cho and Doolittle R. F. 1997. Determining divergence times with a protein clock: update and reevaluation // Proc Natl Acad Sci U S A 94(24). 13 028— 13 033
  55. W. Feng, H. Cai, W. M. Pierce, Z. H. Song. 2002. Expression of CB2 cannabinoid receptor in Pichia pastoris // Protein Expression Purif. 26 (3). 496−505
  56. S.S. Ferguson. 1996. Role of beta-arrestin in mediating agonistpromoted G proteincoupled receptor internalization // Science 271. 363−366
  57. R. Flachmann W. Kuhlbrandt. 1996. Crystallization and identification of an assembly defect of recombinant antenna complexes produced in transgenic tobacco plants // Proc. Natl.Acad. Sci. USA 93. 14 966−14 971
  58. A. Fischer, T. Oberholzer, P.L. Luisi. 2000. Giant vesicles as models to study the interactions between membranes and proteins, BBA Biomembranes. 1467. 177−188
  59. M. J. Fraser 1992. The baculovirus-infected insect cell as a eukaryotic gene expression system // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 158. 131−172
  60. N. J. Fraser. 2006. Expression and functional purification of a glycosylation deficient version of the human adenosine 2a receptor for structural studies // Protein Expression Purif. 49 (1). 129−137
  61. R. Fredriksson, M.C. Lagerstru, m, L.-G. Lundin, H.B. Schiu, th. 2003. The G-protein coupled receptors in the human genome form five main families. Phylogenetic analysis, paralogon groups, and fingerprints // Mol. Pharmacol. 63. 1256−1272
  62. M. Freissmuth, E. Selzer, S. Marullo, W. Schutz, Strosberg A. D. 1991. Expression of 2 human a-adrenergic receptors in Escherichia coli-functional interaction with 2 forms of the stimulatory G-protein // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88 (19). 8548−8552
  63. Y. Fujisawa, H. Kato, Y. Iwasaki. 2001. Structure and function of heterotrimeric G proteins in plants // Plant Cell Physiol. 42(8). 789−794
  64. H. Furukawa, Haga T. 2000. Expression of functional M-2 muscarinic acetylcholine receptor in Escherichia coli // J. Biochem. 127(1). 151−161
  65. R.M. Garavatio, S. Ferguson-Miller. 2001. Detergent as tool in membrane biochemistry // J. Biol. Chem. 276. 32 403 32 406
  66. Y. Giga-Hama, Kumagai H. 1998. Foreign gene expression in fission yeast S. pombe II Seikagaku. 70 (4). 300−304
  67. G. Gimpl, U. Klein, H. Reilander, Fahrenholz F. 1995. Expression of the human oxytocin receptor in baculovirus-infected insect cells high-affinity binding is induced by a cholesterol cyclodextrin complex // Biochemistry. 34 (42). 13 794−13 801
  68. P. Ghanouni, H. Schambye, R. Seifert, Lee T. W., Rasmussen S. G., Gether U. 2000. The effect of pH on beta (2) adrenoceptor function: evidence for protonation-dependent activation // Biol. Chem. 275. 3121−3127
  69. K.J. Glover, J.A. Whiles, G.H. Wu, N.J. Yu, R. Deems, J.O. Struppe, R.E. Stark, E.A. Komives, R.R. Void. 2001. Structural evaluation of phospholipid bicelles for solution-state studies of membrane-associated biomolecules // Biophys. J. 81. 2163−2171
  70. O.B. 1996. beta-Arrestin acts as a clathrin adaptor in endocytosis of the beta2-adrenergic receptor //Nature. 383. 447−450
  71. Y. Gohon, J. L. Popot. 2003. Membrane protein-surfractant complexes // Curr. Opin. Colloid Interface Sci. 8. 15 22
  72. T. E. Gookin, J. Kim, S. M. Assmann. 2008 Whole proteome identification of plant candidate G-protein coupled receptors in Arabidopsis, rice, and poplar: computational prediction and in-vivo protein coupling // Genome Biol 9(7). R120
  73. R. Grisshammer, Tucker J. 1997. Quantitative evaluation of neurotensin receptor purification by immobilized metal affinity chromatography // Protein Expr. Purif. 11. 5360
  74. R. Grisshammer, J. Little, Aharony D. 1994. Expression of ratNk-2 (neurokinin-a) receptor in Escherichia coli // Recept. Channels, 2 (4). 295−302
  75. S. Grunewald, H. Reilander, Michel H. 1996. In vivo reconstitution of dopamine D-2S receptor-mediated G protein activation in baculovirus-infected insect cells: Preferred coupling to G (il) versus G (i2) // Biochemistry. 35 (48). 15 162−15 173
  76. P.C. Gufler, D. Pum, U.B. Sleytr, B. Schuster. 2004. Highly robust lipid membranes on crystalline S-layer supports investigated by electrochemical impedance spectroscopy//BBA-Biomembranes. 1661. 154−165
  77. M.A. Hanson, V. Cherezov, M.T. Griffith, C.B. Roth, V.-P. Jaakola, E.Y.T. Chien, J. Velasquez, P. Kuhn, R.C. Stevens. 2008. A specific cholesterol binding site by the 2.8 A structure of thr human b2-adrenergic receotor // Structure. 16. 897 905
  78. M. Han. 2001. Crystal structure of beta-arrestin at 1.9 A: possible mechanism of receptor binding and membrane translocation // Structure 9 869−880
  79. J.A. Hirsch. 1999. The 2.8 A crystal structure of visual arrestin: a model for arrestin’s regulation // Cell. 97. 257−269
  80. J. I. Hasegawa, H. H. Loh, N. M. Lee. 1987. Lipid requirement for i-opioid receptor binding // J. Neurochem., 49 (4), 1007−1012
  81. D. L. Hay, D. R. Poyner, Sexton P. M. 2006. GPCR modulation by RAMPS // Pharmacol. Ther. 109 (1−2). 173−197
  82. M. K. Hayashi, T. Haga 1996. Purification and functional reconstitution with GTP-binding regulatory proteins of hexahistidine- tagged muscarinic acetylcholine receptors (m2 subtype).J. Biochem. (Tokyo) 120. 1232−1238
  83. A. Helenius, K. Simons. 1975. Solubilization of membranes by detergents // Biochim. Biophys. Acta. 415. 29−79
  84. J. Hescheler, W. Rosenthal, W. Trautwein, G. Schultz. 1987. The GTPbinding protein, Go, regulates neuronal calcium channels //Nature 325.445^-47
  85. R. A. Hill, Sillence M. N. 1997. Improved membrane isolation in the purification of a (2)-adrenoceptors from transgenic Escherichia coli // Protein Expression Purif 10 (1). 162−167
  86. E. Hochuli 1988. Large-scale chromatography of recombinant proteins // J. Chroma-togr. 444. 293−302
  87. T. Hunter. 2000. Signaling—2000 and beyond // Cell. 100. 113−127
  88. E. C. Hulme, Curtis C. A. 1998. Purification of recombinant Ml muscarinic acetylcholine receptor // Biochem. Soc. Trans. 26 (4). S361
  89. V.P. Jaakola, M.T. Griffith, M.A. Hanson, V. Cherezov, E.Y.T. Chien, J.R. Lane, A.P. Izerman, R.C. Stevens. 2008. The 2.6 angstrom crystal structure of a human A2A adenosine receptor bound to an antagonist // Science. 322. 1211−1217
  90. S. Jayadev, R. D. Smith, G. Jagadeesh, A. J. Baukal, Hunyady L., Catt K. J. 1999. N-Linked glycosylation is required for optimal AT-(la) angotensin receptor expression in COS-7 cells // Endocrinology. 140 (5), 2010−2017
  91. L.C. Johansson, A.B. Wohri, G. Katona, S. Engstrom, R. Neutze. 2009. Membrane protein crystallization from lipidic phases // Curr. Opin. Struct. Biol. 19. 372−378
  92. R. Janknecht, Martynoff G. de, Lou J., Hipskind R. A., Nordheim A. and Stunnen-berg H. G. 1991. Rapid and efficient purification of native histidine-tagged protein expressed by recombinant vaccinia virus // Proc. Natl. Acad. Sci. USA .88. 8972−8976
  93. R. Kage, A. D. Hershey, Krause, J. E. Boyd, N. D. Leeman, S. E. Characterization of the Substance-P (Nk-1). 1995. Receptor in Tunicamycin-Treated Transfected Cells Using A Photoaffinity Analog Of Substance-P // J. Neurochem., 64 (1), 316−321
  94. N. Kahya, E.I. Pecheur, W.P. de Boeij, D.A. Wiersma, D. Hoekstra. 2001. Reconstitution of membrane proteins into giant unilamellar vesicles via peptide-induced fusion//Biophys. J. 81. 1464−1474
  95. N. Kahya. 2010. Protein-protein and protein-lipid interactions in domain-assembly: lessons from giant unilamellar vesicles // Biochim. Biophys. Acta (BBA) Biomembranes. 1798. 1392−1398
  96. V. Katritch, R. Abagyan. 2011. GPCR agonist binding revealed by modeling and crystallography // Trends Pharm. 32. 637 643
  97. S.Kaushal, K. D. Ridge, H. G. Khorana 1994. Structure and function in rhodopsin -the role of asparagine-linked glycosylation // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91 (9). 4024−4028
  98. Kiefer, J. Krieger, J. D. Olszewski, G. vonHeijne, G. D. Prestwich, Breer H. 1996. Expression of an olfactory receptor in Escherichia coli: Purification, reconstitution, and ligand binding // Biochemistry. 35 (50), 16 077−16 084.
  99. T. Kigawa, T. Yabuki, Y. Yoshida, M. Tsutsui, Y. Ito, T. Shibata, S.Yokoyama. 1999. Cell-free production and stable-isotope labeling of milligram quantities of proteins // FEBS Lett. 442 (1), 15−19.
  100. J. Y. Kim, P. V. Haastert and P. N. Devreotes. 1996. Social senses: G-protein-coupled receptor signaling pathways in Dictyostelium discoideum // Chem Biol 3(4). 239−243.
  101. T. K. Kim, R. D. Zhang, W. Feng, H. Cai, W. Pierce, Z. H. Song. 2005. Expression and characterization of human CB1 cannabinoid receptor in methylotrophic yeast Pichia pastoris // Protein Expression Purif. 40 (1). 60−70.
  102. B. K. Kobilka 1995. Amino and carboxyl terminal modifications to facilitate the production and purification of a G protein-coupled receptor // Anal. Biochem. 231. 269−271
  103. B. K. Kobilka. 2009. The effect of ligand efficacy on the formation and stability of a GPCR-G protein complex // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106. 9501−9506
  104. M. Kohno, N. Fukushima, A. Yoshida, H. Ueda. 2000. G (il) and G (oA) differentially determine kinetic efficacies of agonists for d-opioid receptor // FEBS Lett. 473 (1). 101−105
  105. T.A. Kohout. 2001. beta-Arrestin 1 and 2 differentially regulate heptahelical receptor signaling and trafficking // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98. 1601−1606
  106. A. Korepanova, F. P. Gao, Y. Z. Hua, H. J. Qin, R. K. Nakamoto, T. A. Cross. 2005 Cloning and expression of multiple integral membrane proteins from Mycobacterium tuberculosis in Escherichia coli // Protein Sci., 14 (1), 148−158
  107. T. A. Kost, J. P. Condreay, D. L. 2005. Jarvis Baculovirus as versatile vectors for protein expression in insect and mammalian cells // Nat. Biotechnol. 23 (5). 567−575
  108. M. P. Krebs, E. N. Spudich, Spudich J. L. 1995. Rapid high-yield purification and liposome reconstitution of polyhistidine-tagged sensory rhodopsin I // Protein Expr. Purif. 6. 780−788
  109. B. Kuehn, Gudermann T. 1999. The luteinizing hormone receptor activates phopholipase C via preferential coupling to Gi2. Biochemistry. 38. 12 490−12 962
  110. R. D. Kulkarni, M. R. Thon, H. Pan, R. A. Dean. 2005 Novel G-protein-coupled receptor-like proteins in the plant pathogenic fungus Magnaporthe grisea II Genome Biol 6(3).R24
  111. T. Kusui, R. Benya, V. J. F. Battey, Jensen, R. T. 1994. Glycosylation of bombesin receptors characterization, effect on binding, and G-protein coupling // Biochemistry. 33 (44). 12 968−12 980
  112. M. M. Kwatra, J. Schreurs, Schwinn D. A., Innis M. A., Caron M. G. Lefkowitz R. J. 1995. Immunoaffinity purification of epitope-tagged human beta 2-adrenergic receptor to homogeneity // Protein Expr. Purif. 6. 717−721
  113. R. M. Lacatena, A. Cellini, F. Scavizzi, Tocchinivalentini G.P. 1994. Topological analysis of the human a (2)-adrenergic receptor expressed in Escherichia coli // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 91 (22). 10 521−10 525
  114. U.K. 1970.Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature, 227, 680−685
  115. B. Lagane, G. Gaibelet, E. Meilhoc, J. M. Masson, Cezanne L., Lopez A. 2000. Role of sterols in modulating the human i-opioid receptor function in Saccharomyces cerevisiae II J. Biol. Chem., 275 (43). 33 197−33 200
  116. P. M. Lanctot, P. C. Leclerc, Escher, E. Guillemette, G. Leduc R. 2006. Role of N-glycan-dependent quality control in the cell-surface expression of the AT (1) receptor // Biochem. Biophys. Res. Commun. 340 (2). 395−402
  117. E.M. Landau, J.P. Rosenbusch. 1996. Lipidic cubic phases: a novel concept for the crystallization of membrane proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93. 14 532−14 535
  118. P. A. Lawrence, G. Struhl, J. Casal. 2007. Planar cell polarity: one or two pathways? // Nat Rev Genet 8(7). 555−563
  119. P.A. Lawrence, G. Struhl, J. Casal. 2008. Planar cell polarity: A bridge too far? // Curr Biol 18(20). 1555−1564
  120. G. Lee. 2004. How lipids affect the activities of integral membrane proteins // Bio-chim. Biophys. Acta. 1666 (1−2). 62−87
  121. A.J. Leitz, T.H. Bayburt, A.N. Barnakov, B.A. Springer, S.G. Sligar. 2006. Functional reconstitution of beta2-adrenergic receptors utilizing self-assembling nanodisc technology // Biotechniques 40. 601 606
  122. S.A. Laporte. 2000. The interaction of beta-arrestin with the AP-2 adaptor is required for the clustering of beta 2-adrenergic receptor into clathrin-coated pits // J. Biol. Chem. 275. 23 120−23 126
  123. M.J. Lohse. 1990. beta-Arrestin: a protein that regulates beta adrenergic receptor function // Science 248. 1547−1550
  124. R.J. Lefkowitz. 2006. New roles for beta-arrestins in cell signaling: not just for seven- transmembrane receptors // Mol. Cell 24 643−652
  125. R.J. Lefkowitz. 2004. Historical review: a brief history and personal retrospective of seven-transmembrane receptors // Trends Pharmacol. Sci. 25. 413 422
  126. R.J. Lefkowitz, S.K. Shenoy. 2005. Transduction of receptor signals by beta-arrestins // Science. 308. 512−517
  127. M. Leutenegger, T. Lasser, E.K. Sinner, R. Robelek. 2008. Imaging of G proteincoupled receptors in solid-supported planar lipid membranes // Biointerphases 3. FA136-FA145
  128. D. Levy, A. Bluzat, M. Seigneuret and Rigaud J. L. 1990. A systematic study of liposome and proteoliposome reconstitution involving Bio-Bead-mediated Triton X-100 removal // Biochim. Biophys. Acta. 1025. 179−190
  129. S. Luca, J.F. White, A.K. Sohal, D.V. Filippov, J.H. van Boom, R. Grisshammer, M. Baldus. 2003. The conformation of neurotensin bound to its G protein-coupled receptor//Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100. 10 706−10 711
  130. S. Lund, S. Orlowski, B. de Foresta, M. le Maire, P. Champeil, J.M. Moller. 1989. Detergent structure and associated lipid as determinants in the stabilization of solubi-lized Ca2+ ATPase from sarcoplasmic reticulum // J. Biol. Chem. 264. 4907 4915.
  131. M. le Maire, P. Champeil, J.M. Moller. 2000. Interaction of membrane proteins and lipids with solubilizing detergent // Biochim. Biophys. Acta. 1508. 86 — 111
  132. I. Marcotte, M. Auger. 2005. Bicelles as model membranes for solid- and solution-state NMR studies of membrane peptides and proteins // Concepts Magn. Reson. A 24A. 17−37
  133. K. Marheineke, S. Grunewald, W. Christie, Reilander H. 1998. Lipid composition of Spodoptera frugiperda (Sf9) and Trichoplusia ni (Tn) insect cells used for baculovi-rus infection. // FEBS Lett. 441 (1). 49−52
  134. D. Massotte, C. A. Pereira, Y. Pouliquen, Pattus F. 1999. Parameters influencing human mu opioid receptor over-expression in baculovirus-infected insect cells // J. Biotechnol. 69 (1). 39−45
  135. D. Mattanovich, Gasser B. 2004. Stress in recombinant protein producing yeasts // Biotechnol. 113, 121 135
  136. K. E. Mazina, C. D. Strader, M. R. Tota, S. Daniel, Fong T.M. 1996. Purification and reconstitution of a recombinant human neurokinin-1 receptor // J. Recept. Signal Transduction Res. 16(3−4). 191−207
  137. H.M. McConnell, T.H. Watts, R.M. Weis, A.A. Brian. 1986. Supported planar membranes in studies of cell-cell recognition in the immune-system // Biochim. Bio-phys. Acta 864. 95−106
  138. C. McKibbin, N.A. Farmer, C. Jeans, P.J. Reeves, H.G. Khorana, B.A. Wallace, P.C. Edwards, C. Villa, P.J. Booth. 2007. Opsin stability and folding: modulation by phospholipid bicelles // J. Mol. Biol. 374. 1319−1332
  139. T. Mirzabekov, N. Bannert, Farzan M., Hofmann W., Kolchinsky P., Wu L. 1999. Enhanced expression native purification and characterization of CCR5 a principal HIV-1 coreceptor // J. Biol. Chem. 274. 28 745−28 750
  140. L.R. Montes, A. Alonso, F.M. Goni, L.A. Bagatolli. 2007. Giant unilamellar vesicles electroformed from native membranes and organic lipid mixtures under physiological conditions // Biophys. J. 93. 3548−3554
  141. R. Mollaaghababa, F. F. Davidson, C. Kaiser, Khorana H. G. 1996. Structure and function in rhodopsin: Expression of functional mammalian opsin in Saccharomyces cerevisiae // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 (21). 11 482−11 486
  142. C.A. Moore. 2007. Regulation of receptor trafficking by GRKs and arrestins // Annu. Rev. Physiol. 69 451−482
  143. P. Mueller, D.O. Rudin, H.T. Tien, W.C. Wescott. 1962. Reconstitution of cell membrane structure in vitro and its transformation into an excitable system // Nature. 194. 979−980
  144. J. G. Mulheron, S. J. Casanas, J. M. Arthur, M.N. Garnovskaya, T. W. Gettys, Raymond J. R. 1994. Human 5-Htla receptor expressed in insect cells activates endogenous G (0)-like G-protein (s) // J. Biol. Chem. 269 (17). 12 954−12 962
  145. Murakami, K., Onoda, Y. 1997. Protection by histidine against oxidative inactiva-tion of AMP deaminase in yeast // Biochem. Mol. Biol. Int. 42, 1063−1069
  146. Y., Watanabe T. 2003. Dimethyl sulfoxide exposure facilitates phospholipids biosynthesis and cellular membrane proliferation in yeast cells // J. Biol. Chem. 278,33 185−33 193
  147. J. Navarro, E.M. Landau, K. Fahmy. 2002. Receptor-dependent G-protein activation in lipidic cubic phase // Biopolymers 67.167−177
  148. G. Y. K. Ng, B. F. Odowd, M. Caron, M. Dennis, M.R. Brann, S. R. George. 1994. Phosphorylation and palmitoylation of the human D2(L) dopamine receptor in Sf9 cells // J. Neurochem. 63 (5).1589−1595
  149. R. T. Niebauer, Robinson A. S. 2006. Exceptional total and functional yields of the human adenosine (A2a) receptor expressed in the yeast Saccharomyces cerevisiae // Protein Expression Purif. 46 (2).204−211
  150. L. Niu, J.M. Kim, H.G. Khorana. 2002. Structure and function in rhodopsin: asymmetric reconstitution of rhodopsin in liposomes // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99. 13 409−13 412
  151. E. Nekrasova, A. Sosinskaya, M. Natochin, Lancet D., and Gat U. 1996. Overexpression solubilization and purification of rat and human olfactory receptors // Eur. J. Biochem. 238. 28−37
  152. C.D. Nelson. 2008. Beta-arrestin scaffolding of phosphatidylinositol 4-phosphate 5-kinase Ialpha promotes agonist stimulated sequestration of the beta2-adrenergic receptor//J. Biol. Chem. 283. 21 093−21 101
  153. S., Satow Y. 2006. Purification of human beta2-adrenergic receptor expressed in methylotrophic yeast Pichia pastoris // J. Biochem. 140, 799 804
  154. K. J. Nordstrom, M. C. Lagerstrom, L. M. Waller, Fredriksson, R., and Schioth, H.B. 2009. The Secretin GPCRs descended from the family of Adhesion GPCRs // Mol BiolEvol. 26(1). 71−84
  155. J.K. Northup, M.D. Smigel, A.G. Gilman. 1982. The guanine nucleotide activating site of the regulatory component of adenylate cyclase. Identification by ligand binding // J. Biol. Chem. 257. 11 416−11 423
  156. M. A. O’Malley, T. Lazarova, Robinson A. S. 2007. High-level expression in Sac-charomyces cerevisiae enables isolation and spectroscopic characterization of functional human adenosine A2a receptor // J. Struct. Biol.
  157. W.M. Oldham, H.E. Hamm. 2006. Structural basis of function in heterotrimeric G proteins // Q. Rev. Biophys. 39. 117−166
  158. M. Opekarova, Tanner W. 2003. Specific lipid requirements of membrane proteins a putative bottleneck in heterologous expression // Biochim. Biophys. Acta. 1610 (1). 11−22
  159. K. Ozawa. 2008. S-Nitrosylation of beta-arrestin regulates beta adrenergic receptor trafficking // Mol. Cell 31 395^-05
  160. K. Palczewski, T. Kumasaka, T. Hori, C.A. Behnke, H. Motoshima, B.A. Fox, I.L. Trong, D.C. Teller, T. Okada, R.E. Stenkamp, M. Yamamoto, M. Miyano. 2000. Crystal structure of rhodopsin: a G protein-coupled receptor, Science. 289. 739−745
  161. S.H. Park, S. Prytulla, A.A. De Angelis, J.M. Brown, H. Kiefer, S.J. Opella. 2006. High resolution NMR spectroscopy of a GPCR in aligned bicelles // J. Am. Chem. Soc. 128. 7402−7403
  162. J. H. Park, P. Scheerer, K. P. Hofmann, Choe H. W., Ernst O. P. 2008.'Crystal structure of the ligand-free G-protein-coupled receptor opsin // Nature. 454(7201). 183−187
  163. P. S. Park, J. W. Wells. 2003. Monomers and oligomers of the M2 muscarinic cholinergic receptor purified from Sf9 cells // Biochemistry.42. 12 960−12 971
  164. E. M. Parker, K. Kameyama, T. Higashijima, Ross E. M. 1991. Reconstitutively active G-protein-coupled receptors purified from baculovirus-infected insect cells // J. Biol. Chem. 266 (1). 519−527
  165. S. Pawate, K. L. Schey, Meier G. P., Ullian M. E., Mais D. E., Halushka P. V. 1998. Expression characterization and purification of C-terminally hexahistidine-tagged thromboxane A2 receptors // J. Biol. Chem. 273. 22 753−22 760
  166. K. J. Peterson, N. J. Butterfield. 2005 Origin of the Eumetazoa: testing ecological predictions of molecular clocks against the Proterozoic fossil record //Proc Natl Acad Sci USA 102(27).9547−9552.
  167. K.L. Pierce, R.T. Premont, R.J. Lefkowitz. 2002. Seven-transmembrane receptors // Nat.Rev. Mol. Cell Biol. 3. 639−650
  168. J. P. Pin, T. Galvez, L. Prezeau. 2003 Evolution, structure, and activation mechanism of family 3/C G-protein-coupled receptors // Pharmacol Ther. 98(3). 325−354
  169. C. E. Piersen, C. D. True, J. N. Wells. 1994. A carboxyl-terminally truncated mutant and nonglycosylated a (2a) adenosine receptors retain ligand-binding // Mol. Pharmacol., 45 (5), 861−870
  170. R.S. Prosser, F. Evanics, J.L. Kitevski, M.S. Al-Abdul-Wahid. 2006. Current applications of bicelles in NMR studies of membrane-associated amphiphiles and proteins // Biochemistry. 45. 8453−8465
  171. T. Pourcher, S. Leclercq, Brandolin G., Leblanc G. 1995. Melibiose permease of Escherichia coir, large scale purification and evidence that H+ Na+ and Li+ sugar symport is catalyzed by a single polypeptide // Biochemistry 34. 4412−4420
  172. O. Quehenberger, E. R. Prossnitz, C. G. Cochrane, R. D. Ye. 1992. Absence of Gi-proteins in the Sf9 insect cell Characterization of the uncoupled recombinant N-formyl peptide receptor // J. Biol. Chem. 267 (28). 19 757−19 760
  173. M. Rached, E. Mourabit, A. Buronfosse, A. Blondett, D. Naville, M. Begeot, A. Penhoat. 2005. Expression of the human melanocortin-2 receptor in different eu-karyotic cells // Peptides. 26. 1842 1847
  174. E. Rands, M. R. Candelore, A. H. Cheung, W. S. Hill, C. D. Strader, R. A. Dixon. 1990. Mutational analysis of a-adrenergic-receptor glycosylation // J. Biol. Chem. 265 (18). 10 759−10 764
  175. S.G.F. Rasmussen, H.-J. Choi, T.S. Kobilka, F.S. Thian, B.T. Devree, G.F.X. Schertler, W.I. Weis, B.K. Kobilka. 2011. Structure of nanobody-stabilized active state of the b2-adrenoreceptor // Nature. 469. 175- 181
  176. S.G., Devree B.T. 2011. Crystal structure of the b (2) adrenergic recep-tor-Gs protein complex. Nature
  177. T.K. Ritchie, Y.V. Gririkova, T.H. Bayburt, I.G. Denisov, J.K. Zolnerciks, W.M. Atkins, S.G. Sligar. 2009. Reconstitution of membrane proteins in phospholipid bi-layer nanodiscs // Methods Enzymol. Liposomes Pt F. 464. 211−231
  178. H. Reilander, Weiss H. M. 1998. Production of G-protein-coupled receptors in yeast // Curr. Opin. Biotechnol. 9 (5). 510−517
  179. S. Rensdomiano, T. Reisine. 1991. Structural-analysis and functional role of the carbohydrate component of somatostatin receptors // J. Biol. Chem. 266 (30). 2 009 420 102
  180. P. J. Reeves, J. M. Kim, Khorana H. G. 2002. Structure and function in rhodopsin: A tetracycline-inducible system in stable mammalian cell lines for high-level expression of opsin mutants // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (21). 13 413−13 418
  181. T. P. Roosild, J. Greenwald, M. Vega, S. Castronovo, R. Riek, Choe S. 2005. NMR structure of Mistic, a membrane-integrating protein for membrane protein expression // Science 307 (5713). 1317−1321
  182. V. R. Ratnala, H. G. Swarts, VanOostrum J., Leurs R. DeGroot H. J., Bakker R. A. 2004 Large-scale overproduction functional purification and ligand affinities of the His-tagged human histamine HI receptor // Eur. J. Biochem.271. 2636−2646
  183. D.M. Rosenbaum, S.G.F. Rasmussen, B.K. Kobilka. 2009. The structure and function of G protein-coupled receptors // Nature. 459. 356−363
  184. J. Salafsky, J.T. Groves, S.G. Boxer. 1996. Architecture and function of membrane proteins in planar supported bilayers: a study with photosynthetic reaction centers. Biochemistry 35. 14 773−14 781
  185. B. S. Sambi, M. D. Hains, C. M. Waters, M. C. Connell, F. S. Willard, A. J. Kim-ple, S. Pyne, D. Sambrook, J., Russell, D.W. 2001. Molecular Cloning: A Laboratory Manual // Cold Spring Harbor, N. Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press
  186. P. Siderovski, Pyne N. J. 2006. The effect of RGS12 on PDGF a receptor signalling to p42/p44 mitogen activated protein kinase in mammalian cells // Cell. Signalling. 18 (7). 971−981
  187. L. Sanchez-Laorden, J. Sanchez-Mas, M. C. Turpin, J. C. Garcia-Borron, Jimenez-Cervantes C. 2006. Variant amino acids in different domains of the human melano-cortin 1 receptor impair cell surface expression // Cell. Mol. Biol. 52 (2). 39−46
  188. V. Sarramegna, I. Muller, Mousseau G., Froment C., Monsarrat B., Milon A. 2005. Solubilization purification and mass spectrometry analysis of the human mu-opioid receptor expressed in Pichiapastoris II Protein Expr. Purif. 43. 85−93
  189. V. Sarramegna, F. Talmont, Seree de Roch M., Milon A., Demange P. 2002. Green fluorescent protein as a reporter of human mu-opioid receptor overexpression and localization in the methylotrophic yeast Pichia pastoris // J Biotechnol. 99. 23−39
  190. V. Sarramegna, Demange P., Milon A. and Talmont F. 2002. Optimizing functional versus total expression of the human mu-opioid receptor in Pichia pastoris II Protein Expr. Purif. 24. 212−220.
  191. V. Sarramegna, I. Muller, A. Milon, Talmont. 2006. Recombinant G proteincoupled receptors from expression to renaturation: A challenge towards structure // Cell. Mol. Life Sci. 63 (10). 1149−1164.
  192. C.R. Sanders, R.S. Prosser. 1998. Bicelles: a model membrane system for all seasons? // Structure 6. 1227−1234.
  193. P. Schmidt, C. Berger, H.A. Scheidt, S. Berndt, A. Bunge, A.G. Beck-Sickinger, D. Huster. 2010. A reconstitution protocol for the in vitro folded human G proteincoupled Y-2 receptor into lipid environment // Biophys. Chem. 150. 29−36.
  194. A.S. Spirin, V. I. Baranov, L. A. Ryabova, S. Y. Ovodov, Y. B. Alakhov. 1988. A continuous cell-free translation system capable of producing polypeptides in high yield // Science. 242 (4882). 1162−1164
  195. Y. Shimizu, Y. Kuruma, B. W. Ying, S. Umekage, Ueda T. 2006. Cell-free translation systems for protein engineering // FEBS J. 273 (18). 4133−4140
  196. C. A. Scorer, J. J. Clare, W. R. McCombie, Romanos M. A. Sreekrishna K. 1994. Rapid selection using G418 of high copy number transformants of Pichia pastoris for high-level foreign gene expression// BioTechnology. 12 (2). 181−184
  197. G. Servant, D. T. Dudley, E. Escher, Guillemette G. 1996. Analysis of the role of N-glycosylation in cell-surface expression and binding properties of angiotensin II type-2 receptor of rat heochromocytoma cells // Biochem. J. 313. 297−304.
  198. D. G. Sawutz, S. M. Lanier, Warren, C. D. Graham, R. M. 1987. Glycosylation of the mammalian alpha-1-adrenergic receptor by complex type N-linked oligosaccharides // Mol. Pharmacol. 32 (5). 565−571
  199. S. K. Shenoy, R. J. Lefkowitz. 2011. b-arrestin-mediated receptor trafficking and signal transduction // Trends Pharm. 32. 521 533
  200. S.K. Shenoy and R.J. Lefkowitz 2003. Trafficking patterns of beta arrestin and G protein-coupled receptors determined by the kinetics of beta-arrestin deubiquitination // J. Biol. Chem. 278. 14 498−14 506
  201. S.K. Shenoy. 2007. Ubiquitination of beta-arrestin links seventransmembrane receptor endocytosis and ERK activation // J. Biol. Chem. 282. 29 549−29 562
  202. T. Shimamura, M. Shiroishi, S. Weyand, Tsujimoto H, Winter G, Katritch V, Abagyan R, Cherezov V, Liu W, Han GW, Kobayashi T, Stevens RC, Iwata S. 2011. Structure of the human histamine HI receptor complex with doxepin // Nature.475. 65 -70
  203. M. Shiroishi, T. Kobayashi, Ogasawara S, Tsujimoto H, Ikeda-Suno C, Iwata S, T. Shimamura. 2011. Production of the stable human histamine H (l) receptor in Pichia pastoris for structural determination // Methods. 55. 281 286
  204. A.V. Smrcka, J.R. Hepler, K.O. Brown, P.C. Sternweis. 1991 // Regulation of polyphosphoinositide-specific phospholipase C activity by purified Gq, Science 251. 804−807
  205. H. B. Schioth, R. Fredriksson. 2005 The GRAFS classification system of G-protein coupled receptors in comparative perspective // Gen Comp Endocrinol 142(1−2). 94 101
  206. C.M. Sommers, M.E. Dumont. 1997. Genetic interactions among the transmembrane segments of the G protein coupled receptor encoded by the yeast STE2 gene // J Mol Biol. 266(3).559−75
  207. J. Soppa. 1994. Two hypotheses—one answer. Sequence comparison does not support an evolutionary link between halobacterial retinal proteins including bacteri-orhodopsin and eukaryotic G-protein-coupled receptors // FEBS Lett 342(1). 7−11
  208. L. Stanasila, F. Pattus, D.Massotte. 1998. Heterologous expression of G-protein-coupled receptors: Human opioid receptors under scrutiny // Biochimie. 80 (5−6). 563 571
  209. Staudinger R. and Bandres J. C. 2000. Solubilization of the chemokine receptor CXCR4 // Biochem. Biophys. Res. Commun. 274. 153−156
  210. T. C. Sudhof. 2001. alpha-Latrotoxin and its receptors: neurexins and CIRL/latrophilins // Annu Rev Neurosci 24. 933−962
  211. B. Schuster, U.B. Sleytr. 2009. Composite S-layer lipid structures // J. Struct. Biol. 168. 207−216.
  212. K. Suzuki, H. Kawasaki. 1990. Separation of peptides dissolved in sodium dodecyl sulphate solution by reversed phase liquid chromatography // Anal. Biochem.186. 292 -298
  213. F. 2009. Monitoring the human betal, beta2, beta3 adrenergic receptors expression and purification in Pichia pastoris using the fluorescence properties of the enhanced green fluorescent protein // Biotechnol. Lett. 31, 49 55
  214. L.K. Tamm, H.M. Mcconnell. 1985. Supported phospholipid-bilayers // Biophys. J. 47. 105−113
  215. Tathiah A., De Strooper B. 2011. The role of G protein coupled receptors in the pathology of Alzheimer’s disease //Nature Rev. Neurosci. 12, 73 87
  216. Tollin, V.J. Hruby, M.F. Brown, S.S. Saavedra. 2005. Rhodopsin reconstituted into a planarsupported lipid bilayer retains photoactivity after cross-linking polymerization of lipid monomers // J. Am. Chem. Soc. 127. 5320−5321.
  217. Tucker J. and Grisshammer R. (1996) Purification of a rat neurotensin receptor expressed in Escherichia coli II Biochem. J. 317.891−899
  218. H., Strahelin T., Gordon J. 1979 // Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 76, 4350- 4354
  219. J.L., Pearsall K.M. 1988 // Affinity purification of the mammalian b2-adrenergic receptor. J. Biochem. and Biophys. Meth. 17, 215 228
  220. S. Vasudevan, E. C. Hulme, M. Bach, W. Haase, J. Pavia, Reilander H. 1995. Characterization of the rat M3 muscarinic acetylcholinereceptor produced in insect cells infected with recombinant baculovirus // Eur. J. Biochem. 227 (1−2). 466−475
  221. R.R. Void, R.S. Prosser. 1996. Magnetically oriented phospholipid bilayered micelles for structural studies of polypeptides. Does the ideal bicelle exist? // J. Magn. Reson. 113. 267−271
  222. Z.Q. Wang, Y.X. Tao. 2011. Functional studies on twenty novel naturally occurring melanocortin-4 receptor mutations // Biochem.Biophys.Acta. 1812 (9), 1190 — 1199.
  223. T. Warne, M.J. Serrano-Vega, J.G. Baker, R. Moukhametzianov, P.C. Edwards, R. Henderson, A.G.W. Leslie, C.G. Tate, G.F.X. Schertler. 2008. Structure of a b1-adrenergic G-protein-coupled receptor //Nature.454. 486−491
  224. S. A. Waschuk, A. G. Bezerra, Jr., Shi, L., and Brown, L. S. 2005 Leptosphaeria rhodopsin: bacteriorhodopsin-like proton pump from a eukaryote // Proc Natl Acad Sci USA 102.(19). 6879−6883
  225. A.J. Watson, A. Katz, M.I. Simon, A fifth member of the mammalian G-protein beta-subunit family. 1994. Expression in brain and activation of the beta 2 isotype of phospholipase C // J. Biol. Chem. 269. 22 150−22 156
  226. A. Wedekind, M. A. O’Malley, R. T. Niebauer, Robinson A. 2006. Optimization of the human adenosine A (2)a receptor yields in Saccharomyces cerevisiae. Biotechnol. Prog. 22 (5) 1249−1255
  227. H. M. Weiss, Grisshammer R. 2002. Purification and characterization of the human adenosine A (2a) receptor functionally expressed in Escherichia coli // Eur. J. Bio-chem. 269 (1). 82−92
  228. O. Wesolowska, K. Michalak, J. Maniewska, A.B. Hendrich. 2009. Giant unilamellar vesicles—a perfect tool to visualize phase separation and lipid rafts in model systems // Acta Biochim. Pol. 56. 33−39
  229. R. Wick, M.I. Angelova, P. Walde, P.L. Luisi. 1996. Microinjection into giant vesicles and light microscopy investigation of enzyme-mediated vesicle transformations // Chem. Biol. 3. 105−111 —
  230. J. F. White, L. B. Trinh, J. Shiloach, Grisshammer R. 2004. Automated large-scale purification of a G protein-coupled receptor for neurotensin // FEBS Lett. 564 (3). 289−293
  231. M. Wheatley, S. R. Hawtin. 1999. Glycosylation of G-protein-coupled receptors for hormones central to normal reproductive functioning: its occurrence and role // Hum. Reprod. Update, 5 (4), 356−364
  232. T.M. Wilkie, D.J. Gilbert, A.S. Olsen, X.N. Chen, T.T. Amatruda, J.R. Korenberg, B.J. Trask, P. de Jong, R.R. Reed, M.I. Simon. 1992. Evolution of the mammalian G protein alpha subunit multigene family // Nat. Genet. 185−91
  233. M. C.Wiener. 2004. A pedestrian guide to membrane protein crystallization // Methods. 34 (3). 364−372
  234. T. Van Aken, S. Foxal-Van Aken, S. Castleman, S. Ferguson-Miller. 1986. Alkyl glycoside detergent synthesis and application to the study of membrane proteins // Methods Enzymol. 125. 27 — 35
  235. M.L. Wagner, L.K. Tamm. 2000. Tethered polymer-supported planar lipid bilayers for reconstitution of integral membrane proteins: silane-polyethyleneglycol-lipid as a cushion and covalent linker // Biophys. J. 79. 1400−1414
  236. O. Worsfold, N.H. Voelcker, T. Nishiya. 2006. Biosensing using lipid bilayers suspended on porous silicon // Langmuir 22. 7078−7083
  237. Xu B.Y., Huang D. 2000. Beta2-adrenergic receptor gene polymorphisms in myasthenia gravis // Clin.Exp.Immunol. 119, 156−160
  238. F. Xu, H. Wu, V. Katritch, G.W. Han, K.A. Jacobson, Z.G. Gao, V. Cherezov, R.C. Stevens. 2011. Structure of an agonist-bound human A2A adenosine receptor // Science 332. 322−327
  239. X. Yu, S. Stavrakis, M.A. Hill, S. Huang, S. Reim. 2012. Autoantibody activation of beta-adrenergic and muscarinic receptors contributes to an «autoimmune» orthostatic hypotension. J.Am.Soc.Hypertens. 6. 40 47.
  240. A. Yeliseev, K. K. Wong, O. Soubias, K. Gawrisch. 2005. Expression of human peripheral cannabinoid receptor for structural studies // Protein Sci. 14 (10). 2638−2653
  241. Zeder-Lutz G., Cherouati N. 2006. Dot-blot immunodetection as a versatile and high-throughput assay to evaluate recombinant GPCRs produced in the yeast Pichia pastoris // Prot. Exp. Purif. 50,118−127
  242. F. Y. Zeng and Wess J. 1999. Identification and molecular characterization of m3 muscarinic receptor dimmers//J. Biol. Chem. 274. 19 487−19 497
  243. J. Zhang. 1996. Dynamin and beta-arrestin reveal distinct mechanisms for G protein-coupled receptor internalization // J. Biol. Chem. 271. 18 302−18 305
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!