Концентрация гентамицина (мкг/мл).
1 2 3 4 5 Среднее До введения 0 0 0 0 0 0 1 8,1 6,2 11,3 7,6 7,7 8,18 ± 1,89 2 7,3 5,9 9,2 7,0 5,9 7,06 ± 1,35 3 5,2 5,5 5,7 4,8 4,7 5,18 ± 0,43 6 2,9 3,8 3,4 3,1 3,2 3,46 ± 0,34 9 2,2 2,05 2,1 3,15 2,76 2,45 ± 0,48 12 1,81 1,7 1,8 1,9 1,4 1,72 ± 0,19 18 1,05 0,99 1,2 0,6 0,42 0,85 ± 0,24 24 0,6 0,62 0,61 0,5 0,4 0,55 ± 0,09.
В результате проведенных исследований установлено, что после внутримышечного введения всех лекарственных форм гентамицин быстро всасывался из места инъекции и обнаруживался в сыворотке крови в течение 24 часов.
Максимальные концентрации антибиотика в сыворотке крови регистрировали через 1 час после введения (11,0 — 11,3 мкг/мл). Высокие концентрации (1,52−1,72 мкг/мл) поддерживались в течение 12 часов, затем в течение 12−18 часов концентрация препарата плавно снижалась до 0,85−0,76 мкг/мл.
В графическом виде результаты опытов представлены на рис.
1 и 2.
Площади под фармакокинетическими кривыми двух препаратов, максимальные концентрации и углы наклона нисходящих участков кривых практически не отличаются друг от друга, что говорит о биоэквивалентности препаратов.
Таким образом, при внутривенном введении белым мышам ЛД50 препарата гентамицина сульфат 4% раствор производства ООО «Бионит» составила 68 мг/кг.
При внутривенном введении белым мышам ЛД50 препарата гентамицина сульфат 4% раствор производства ЗАО «Мосагроген» составила 65 мг/кг.
После внутримышечного введения сравниваемых препаратов антибиотик гентамицин быстро всасывался. Максимальные концентрации обнаруживали уже через 1 час после инъекции.
После однократного внутримышечного введения 4% препаратов гентамицина в дозе 3 мг ДВ/кг массы тела животного антибиотик обнаруживали в сыворотке крови в течение 24 часов.
Два сравниваемых препарата биоэквивалентны.
Однократное внутримышечное введение гентамицина 4% раствора в дозе 0,75 мл/10 кг (3 мг по ДВ) массы тела обеспечивало поддержание терапевтических концентраций гентамицина в сыворотке крови не менее 18 часов.
Глава III. Фармакопейный анализ гентамицина сульфата Гентамицины — антибиотики аминогликозидного ряда широкого спектра действия, подавляют бактериальный синтез белка, высокоактивны по отношению к аэробным грамотрицательным бактериям. Гентамицины продуцируются бактериями Micromonospora, промышленный продуцент — Micromonospora purpurea.
Тип Общая структура.
R.
R'.
C1.
— CH3.
— CH3.
C1a.
— H.
— H.
C2.
— CH3 1.
— H.
C2a.
— CH3 1.
— H.
C2b.
— H.
— CH3.
Сизомицин.
— H ².
— H ².
1Стереоизомеры ²Двойная связь C4'.
— C5' в правом пирановом кольце В медицине и ветеринарии в качестве фармацевтического препарата «Гентамицин» используется смесь гентамицинов C1-C2, продуцируемых Micromonospora purpurea, которая обычно cодержит 20−40% гентамицина C1, 10−30% гентамицина C1a и 40−60% гентамицинов C2, C2a и C2b.
Gentamicini sulfas.
Гентамицина сульфат Описание. Порошок или пористая масса белого цвета; допускается кремовый оттенок.
Растворимость. Легко растворим в воде. Водные растворы препарата стабильны, выдерживают кипячение и автоклавирование.
pH. pH 4% раствора гентамицина в воде — 3,5−5,5.
Удельное вращение. Используют раствор испытуемого вещества с концентрацией 0,10 мг/мл и пересчитывают результат на безводное вещество. Интервал удельного вращения от +107 до +121.
Сульфатная зола. Не более 10 мг/г.
Вода. Проводится по методу Фишера. Используют около 0,2 г испытуемого вещества. Содержание воды не более 150 мг/г.
Определение подлинности.
1. Мальтозная проба:
2. По альдегидной группе а) реакция серебряного зеркала б) с реактивом Несслера в) с реактивом Фелинга г) с фенолами.
3. На остатки гуанидина в (Str)2· H2SO4.
а) по реакции Сакагучи б) с реактивом Вебера.
4. Подлинность также устанавливают методом инфракрасной спектрометрии и тонкослойной хроматографии.
5. Кроме того, сульфат определяют фармакопейной реакцией на сульфат-ион с помощью иона Ва2+.
Испытания на чистоту. Проводится испытание на содержание метанола методом газовой хроматографии с использованием внутреннего стандарта. Последний представляет собой водный раствор, содержащий 0,25% метанола и 0,25% н-пропанола. Контрольный раствор готовят, растворяя 0,50 г гентамицина сульфата в 2 мл воды. Тестовую пробу готовят, растворяя 0,50 г гентамицина сульфата в 1 мл внутреннего стандарта, добавляя 1 мл воды и перемешивая.
Количественное определение. Содержание гентамицинов в ЛС проводят методом жидкостной хроматографии. Содержание гентамицина Ci должно составлять от 25 до 50% С1а — от 10 до 35% и С2 — между 25 и 55%. Кроме того, проводят оценку микробиологической активности антибиотика по общей фармакопейной статье. 1 мг ЛС содержит не менее 590 мкг гентамицина (в расчете на сухую массу).
Для количественного определения гентамицина сульфата можно применять также нингидриновый и поляриметрический методы.
Сопоставимые результаты с поляриметрией дает фотоколориметрический метод, основанный на образовании окрашенного комплекса гентамицина с ионом меди (II) в щелочной среде.
Согласно Международной Фармакопеи, количественно определение проводится по микробиологической активности, используя или Bacillus pumilus или Staphylococcus aureus в качестве тест-организма.
В фармакопейном анализе гентамицина, как и для других антибиотиков, проводится испытание на стерильность, пирогенность и неспецифическую токсичность.
Хранение. Гентамицина сульфат следует хранить в плотно укупоренной таре, предохраняющей от действия света.
Дополнительная информация. Гентамицина сульфат гигроскопичен, даже в темноте он постепенно разрушается во влажной атмосфере, причём разрушение ускоряется при повышении температуры.
Выводы В результате проделанной работы были выявлены особенности фармакологического действия аминогликозидов и, в частности представителя этого ряда, гентамицина.
Также были изучены химические и физико-химические свойства данной группы антибиотиков.
На основании изученных свойств предложены методы фармакопейного анализа гентамицина.
Антибиотики применяются в медицине, ветеринарии и в пищевой промышленности при консервировании и для обработки пищевых продуктов при их транспортировке.
В связи с этим требуется контроль за содержанием антибиотиков в лекарственных веществах, биологических жидкостях организма человека и животных, продуктах питания, сточных водах фармацевтических предприятий и других объектах.
Анализ данных литературы показал, что для количественного определения антибиотиков применяются микробиологические методы, различные варианты хроматографических методов (ВЭЖХ, ЖХ, ионообменная, хромато-масс-спектрометрия), спектрофотометрические, кинетические, флуориметрические, хемилюминесцентные методы, инверсионная вольтамперометрия, электрокаталитическое определение с модифицированными электродами, потенциометрия с ионоселективными электродами.
Каждый метод имеет свои преимущества и недостатки. Выбор метода зависит от доступности оборудования, наличия персонала, знающего данное оборудование, от количества анализов и их частоты, степени точности и других обстоятельств.
Список использованных источников
Яковлев В. П., Яковлев С. В. Рациональная антимикробная фармакотерапия. М.:. 2007; 784.
Страчунский Л.С., Белоусов Ю. Б., Козлов С. Н. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии. М.: 2002; 384.
Егоров Н. С. Основы учения об антибиотиках. М.: 2004; 528.
Евгеньев М.И., Гармонов С. Ю., Шакирова Л. Ш. Проточно-инжекционный анализ лекарственных веществ. Журн. аналит. химии 2001; 56: 4: 355−366.
Соколова Л.И., Черняев А. П. Определение антибиотиков цефалоспоринового ряда в биологических объектах методом обращено-фазовой ВЭЖХ. Хим-фарм.
журн. 2002; 36: 5: 39−45.
Харитонов С. В. Ионоселективные электроды для определения лекарственных веществ. Успехи химии 2007; 76: 4: 398−432.
Hanko V.P., Rohrer J.S. Determination of tobramycin and impurities using high-performance anion exchange chromatography with integrated pulsed amperometric detection. J. Pharm. Biomed. Anal. 2006; 40: 4: 1006−1012.
Клюев Н. А. Применение масс-спектрометрии и хромато-масс-спектрометрии в анализе лекарственных препаратов. Журн. аналит. химии 2002; 57: 6: 566−584.
Глазков И. Н., Бочкарева Н. Л., Ревельский И. А. Определение органических примесей в фармацевтических препаратах. Журн. аналит. химии 2005; 60: 2: 124−136.
Колосова А.Ю., Блинцов А. Н., Самсонова Ж. В. и др. Разработка твердофазного иммуноферментного анализа гентамицина в сыворотке крови человека. Антибиотики и химиотер. 1998; 2: 9−13.
Benito-Peo E., Partal-Rodera A.I., Leonzoz M.E. et. al. Evaluation of mixed mode solid phase extraction cartridges for the preconcentration of beta-lactam antibiotics in waste water using liquid chromatography with UV-DAD detection. Ana. l Chim. Acta 2006; 556: 2: 415−422.
Выдрин А. В, Шихалеев И. В., Махортов В. Л. и др. Изучение компонентного состава препаратов гентамицина сульфата. Антибиотики и химиотер. 2003; 37: 8: 52−54.
Костарной А.В., Голубицкий Г. Б., Басова Е. М. и др. Использование высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа многокомпонентных лекарственных препаратов. Журн. аналит. химии 2008; 63: 6: 566−580.
Кулапина Е.Г., Барагузина В. В., Кулапина О. И. Экспрессное ионометрическое определение аминогликозидных антибиотиков в лекарственных формах и биологических жидкостях больных инфекционной патологией. Журн. аналит. химии 2005; 60: 6: 592−597.
(Str)2· H2SO4.
HOH.
— OH.
L-стрептоза.
NaOH.
NaBrO + β-нафтол.
OH;
Нафтохинонимин.
Красное окрашивание.
Na[Fe (CN)5NO]+K3[Fe (CN)6].
