Проведение микробиологического анализа

Радиофармпрепараты, применяемые in vivo, должны быть стерильными (не содержащими микробных загрязнений) и апирогенными (не содержащими бактериальных эндотоксинов). Специфика применения РФП, особенно диагностических препаратов, изготовляемых на основе ультраи короткоживущих PH, состоит в том, что срок их использования ограничивается часами или даже минутами. При средней продолжительности теста на стерильность до двух недель, а испытаний на пирогенностьдо 3…5 часов введение препаратов пациентам производится, как правило, без проведения микробиологического контроля.

Это накладывает жесткие требования к соблюдению асептических условий при производстве РФП и использованию технологий и оборудования, исключающих возможность микробной загрязненности.

Наиболее часто стерилизация готовых препаратов проводится в па;

ровом автоклаве при температуре 121 ± 1 °C и давлении 1,1 ± 0,2 кгс/см' в течение 8…20 мин. Контроль режима стерилизации осуществляется с помощью химических тестов: элементарной серы (Г_пл~ 120 °С) или индикатора, меняющего свой цвет в пределах температуры 122±2°С. Препараты, разлагающиеся или изменяющие свои свойства при тепловой обработке в автоклаве, стерилизуют фильтрацией через мембранные фильтры с диаметром пор 0,22 мкм.

В соответствии с действующими требованиями контрольным испытаниям на стерильность подвергается каждая десятая серия препаратов, стерилизуемых в автоклаве. Количество образцов для анализа (п) из каждой серии составляет n = 0,4x/iv, где N — число фасовок в серии. Для контроля стерильности применяют тиогликолевую среду и жидкую среду Сабуро, используя метод прямого посева на питательные среды или метод мембранной фильтрации (в случае плохого разведения препарата). Полученные посевы инкубируют при температурах 30…35 и 20…25 °С соответственно в течение 14 суток с последующей визуальной регистрацией тест-штаммов аэробных и анаэробных бактерий и грибов. Препарат считают стерильным при отсутствии роста микроорганизмов.

Испытания на пирогенность проводят на трех специально подготовленных кроликах путем введения препарата в ушную вену животных с последующей регистрацией изменения температуры их тела три раза с интервалом времени 1 час. Препарат считают апирогенным, если сумма повышений температуры у трех кроликов меньше или равна 1,4 °С.

Пирогенный эффект, возникающий в организме человека и животных после инъекций растворов с примесями бактериальных эндотоксинов (БЭ), зависит от их общей дозы. Начиная с 90-х годов в фармакопеях США и Европы в качестве пороговой дозы БЭ принято значение 5 ЕЭ на 1 кг веса. Для их количественного и качественного определения разработаны ЛАЛ-реактивы, которые при взаимодействии с эндотоксинами вызывают помутнение реакционной смеси вплоть до формирования плотного геля. Такие испытания на бактериальные эндотоксины взамен традиционных испытаний на пирогенность для РФП являются более предпочтительными ввиду более высокой чувствительности и экспрессное™ ЛАЛ-тестирования.

Для РФП, вводимых внутривенно, предельное содержание БЭ рассчитывают по формуле 175?.,/К, где V- максимальный объем вводимого препарата (в миллилитрах) в конце срока его годности.

Для определения величины V используется соотношение.

где А — вводимая доза препарата (МБк), рекомендуемая для проведения исследования в инструкции по его медицинскому применению; ао~ объемная активность РФП на дату и время поставки; Т— срок годности.

Контрольные вопросы

• 1. По каким основным показателям осуществляется контроль качества РФП? Охарактеризуйте каждый из них.
• 2. Приведите перечень радиометрических измерений. Какая аппаратура для этого используется? В чем состоит отличие понятий «радиохимическая чистота» и «радиохимическая примесь»?
• 3. Какое влияние на качество РФП могут оказывать химические примеси? Чем обусловлены их предельные концентрации?
• 4. Какие методы микробиологического контроля используются при производстве РФП для внутривенного введения? Как рассчитывается предельное содержание бактериальных эндотоксинов в препаратах и максимальный объем вводимой дозы?