Принцип метода «Сэндвич» — РИА

В наборе используется два вида мышиных моноклональных антител к различным эпитопам в-субъединицы ХГЧ, что позволяет определять общий ХГЧ, т. е. его интактную молекулу и (в-субъединицу. Исследуемые образцы, контрольные и калибровочные пробы инкубируют в пробирках, покрытых одним видом моноклональных антител совместно с раствором других антител, меченных ¹²⁵I. После окончания, инкубации удаляют жидкое содержимое, промывают пробирки и измеряют связанную активность ¹²⁵ I. Концентрацию общего ХГЧ, прямо пропорциональную связанной активности, определяют методом интерполяции по калибровочной кривой.

Процедура определения ХГЧ

В покрытые антителами пробирки последовательно внести:

• а) 50 мкл калибровочных, контрольных и анализируемых проб в соответствии с маркировкой;
• б) 200 мкл меченых антител;

Перемешать.

В две дополнительные пробирки внести по 200 мкл меченых антител для определения общей активности ¹²⁵I (Т).

Инкубировать 1 час при (18−25)°С и постоянном встряхивании.

Тщательно удалить содержимое пробирок (кроме проб Т).

Промыть пробирки 2 мл промывочного раствора.

Измерить связанную (В) и общую (Т) активность I в течение 1 мин на гамма-счетчике.

Расчёты и графические построения проводятся при помощи специальных программ на ПК. Результаты (определение содержания гормона) рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой, полученной одновременно с анализом неизвестных проб.

Во время практики нами проводились анализы на подтверждение нормального протикания беременности на разных сроках у 36 женщин. Для этого полученные данные сравнивали с показателями нормы содержания данных гормонов на определенных сроках беременности (таб.3.1 и 3.2).

Количественное содержание эстрадиола было определено у 8 пациенток, прогестерона — у 25, ХГЧ — у 11 (таб.3.3).

При определении прогестерона содержание гормона в норме (показатели нормы на разных сроках см. табл.1) наблюдалось у 8 беременных, у 10 зарегистрированно повышенное и у — 14 пониженное.

При определении Е₂ содержание гормона в норме (см. табл.3.1) наблюдалось у 5ти пациенток, у 2х — повышенное и у 2х — пониженное.

При определении ХГЧ содержание гормона в норме (см. табл.3.2) наблюдалось у 1 беременных, у 12 — повышенное и у 0 — пониженное.

Таб.3.1 Содержание гормонов в сыворотке крови при физиологически протекающей беременности (в норме).

Таб.3.2 Содержание ХГЧ в сыворотке крови при физиологически протекающей беременности (в норме).

Таб.3.3 Содержание Е₂, Пг и ХГЧ у исследуемых.

Содержание прогестерона в крови матери прогрессирующе растет, возрастая в 2 раза к 7−8 неделе, а затем постепенно повышается до 37−38 недель. Снижение уровня гормона указывает на наличие патологии беременности и требует заместительной терапии. Увеличение уровня гормона указывает на наличие почечной недостаточности (нарушение его выведения). Выработка прогестерона полностью прекращается лишь при далекозашедших дегенеративных изменениях в плаценте, например, при замершей беременности.

При беременности содержание эстрогенов прогрессивно растет, причем происходит преимущественное образования Е₃ по сравнению с Е₂ и Е₁— Поскольку Е₃ образуется в плаценте, его уровень непосредственно характеризует функциональное состояние плаценты и плода. Недостаток синтеза Е₃ вызывает угрозу прерывания в 1-ой половине беременности и угрозу преждевременных родов — во 2- ой. В количественном отношении Е₃ начинает доминировать над другими эстрогенами после 12−15-й недели беременности. Содержание Е₂ в крови матери в начале беременности соответствует его уровню у небеременных женщин в период овуляции. При физиологически протекающей беременности резкий подъем его уровня отмечается к 9−10-й неделе, затем — постепенно увеличивается до конца беременности с тремя пиками более высокой концентрации — в 23−24, 35−36 и 39−40 недель [9].

Снижение уровня Е₃ в крови беременных наблюдается при гипоплазии надпочечников плода, анэнцефалии, синдроме Дауна, внутриутробной инфекции. Низкие значения Е₃ обнаруживаются также при приеме глюкокортикоидов, антибиотиков, что связано со снижением активности надпочечников плода. Снижение концентрации эстрогенов в плазме крови более чем на 35% указывает на острую недостаточность функционирования ФПК и является сигналом угрозы для плода. Повышение уровня эстрогенов в крови беременных отмечено при многоплодной беременности или крупном плоде. Ложное повышение концентрации эстрогенов возможно при заболеваниях печени, что обусловлено снижением их конъюгации.

ХГЧ транспортируется преимущественно в кровь матери, где его уровень в 10−20 раз выше, чем в крови плода. Период полураспада — 27 часов, следовательно, при его определении получают истинную и сиюминутную характеристику состояния его секреции. В первые 4−6 недель беременности содержание ХГЧ в биологических жидкостях организма увеличивается в 2 раза каждые 2 дня, достигая максимума на 9−12 неделе. Во 2 триместре содержание ХГЧ стабилизируется на невысоком уровне, а затем несколько возрастает.

Гиперсекреция ХГЧ возникает как вариант нормы при многоплодной и пролонгированной беременности. Повышение уровня ХГЧ является неблагоприятным симптомом токсикоза беременных, врожденных пороков развития плода.

При определении понижения содержания в крови или экскреции ХГЧ у беременной на 20−30 % от недельной нормы необходимо повторить анализ. Если содержание ХГЧ окажется таким же или в пределах нормы при отсутствии иных признаков плацентарной недостаточности, то можно расценивать данный случай как вариант нормы. Прогрессирующее в динамике наблюдения снижение содержания ХГЧ в крови матери на 50% и более указывает на формирование плацентарной недостаточности и требует дополнительного определения других гормонов плаценты и ФПК.

Как правило, одновременно со снижением уровня ХГЧ снижается уровень прогестерона и эстрогенов, секреция которых находится под контролем.