Лабораторная работа № 19. Получение безвирусного посадочного материала методом термотерапии в сочетании с культивированием апикальных меристем

В случае заражения посадочного материала вирусами применяют термотерапию (использование сухого горячего воздуха). В случаях заражения растений мозаичными, веретеновидными, нитевидными, палочковидными вирусами термическая обработка малоэффективна. В связи с этим дополнительно используют метод апикальных меристем. Для этого после термообработки апикальную меристему растений картофеля срезают и помещают в пробирки на питательные среды. Термообработку обычно проводят осенью и зимой. Весной из растений вычленяют пазушные почки — от 0,3 до 1 мм и высаживают на питательные среды (МС без гормонов, pH 5,7).

Цель работы: изучить влияние высокой температуры на развитие апикальных меристем картофеля.

Оборудование и материалы: ламинар-бокс; кюветы с песком; пробирки с питательными средами; флаконы с водой; бинокулярный микроскоп; стерильные препаровальные иглы, скальпели; флаконы с хлорамином; флаконы с 96%-м спиртом; спиртовка.

Объект исследования: клубни картофеля.

Ход работы.

Здоровые клубни картофеля тщательно промыть проточной водой. Клубни обработать дезинфицирующим раствором (спирт, хлорамин), промыть стерильной дистиллированной водой. Вырезать глазки с частью паренхимы (1,5×1,5 см) и поместить в кюветы для проращивания и термотерапии.

Глазки разместить в кюветах со стерильным песком и проращивать одну-две недели при температуре 28—30 °С, четыре недели — при температуре 37—38 °С и влажности воздуха 70—80%. Дважды в день песок увлажнять, через 7—10 дней провести подкормку раствором Кнопа и микроэлементов по прописи среды МС: 5 мл маточного раствора на 1 л раствора Кнопа.

Проростки, прошедшие термотерапию, поместить в 6%-й раствор хлорамина на 5 мин, промыть стерильной дистиллированной водой. В ламинар-боксе под микроскопом вычленить апикальные меристемы и поместить их в пробирки с питательными средами. Весь растительный материал перенести в культуральную комнату с нормальными условиями.

Клубни жаровыносливых сортов можно сразу выращивать при температуре 37—38 °С и влажности воздуха 70%. Режим тепловой обработки для каждого сорта подбирают экспериментально.

Задание. Результаты зарисовать через две, четыре, шесть и восемь недель, сделать выводы о влиянии высокой температуры на зараженный посадочный материал.