Лекция № 15. Иммунный статус макроорганизма. 
Методы оценки

Состояние иммунной системы имеет важнейшее значение в обеспечении гомеостаза организма, защите от всего генетически чужеродного.

Иммунный статус определяет эффективность и согласованность работы всех систем и звеньев иммунитета — макрофагов, комплемента, интерферонов, Т — и В — лимфоцитов, главной системы гистосовместимости. Раздел медицины, изучающий патологию человека в аспекте нарушений функций иммунной системы, называется клинической иммунологией.

Для постановки диагноза иммунопатологического состояния проводят сбор иммунологического анамнеза и постановку иммунологических тестов. Могут также осуществляться тесты in vivo (кожные тесты), ретгенологическое исследование лимфоидных органов (тимуса).

При опросе определяют наиболее вероятный иммунопатологический синдром, среди которых основными являются шесть:

• — инфекционный синдром;
• — аллергический синдром;
• — аутоиммунный синдром;
• — первичный иммунодефицит;
• — вторичный иммунодефицит;
• — иммунопролиферативный синдром.

Для оценки общего иммунного статуса используют наиболее простые и достоверные показатели, отражающие суммарную эффективность работы всех систем иммунитета, для изучения уязвимого звена — специфичные для каждой системы дифференциальные тесты. Следовательно, изучение иммунного статуса проводится не менее чем в два этапа. Р. П. Петров с соавторами в 1984 г. создали двухэтапный подход к оценке иммунного статуса, в соответствии с которым лабораторные иммунологические тесты разделены на тесты первого и второго уровня.

На первом этапе с помощью простых ориентировочных методов выявляют «грубые» дефекты фагоцитоза, клеточного и гуморального иммунитета. К тестам первого уровня относят:

• — определение абсолютного и относительного содержания лимфоцитов в периферической крови;
• — определение количества Т — и В — лимфоцитов;
• — определение уровня иммуноглобулинов основных классов (IgG, IgM, IgA);
• — определение фагоцитарной активности лейкоцитов;
• — определение титра комплемента (не обязательно).

С учетом анализа результатов тестов 1 уровня определяют дальнейшую тактику иммунологического исследования.

Более тщательный и глубокий анализ состояния иммунной системы проводят с помощью тестов второго уровня — аналитических методов. К ним можно отнести методы оценки функциональной активности Т — и В — лимфоцитов, фагоцитов, вспомогательных клеток, естественных киллеров, компонентов системы комплемента и многих других.

Методы исследования главных компонентов иммунной системы принято делить также на скрининговые и развернутые.

При оценке В — системы иммунитета к скрининговым тестам относятся: определение количества CD19+ и CD20+ клеток, IgG, IgM и IgA, а также IgG1,2,3,4, к развернутым — бласттрансформацию на митоген лаконоса и S. aureus, пповерхностных маркеров В — лимфоцитов.

При оценке Т — системы иммунитета к скрининговым методам можно отнести кожные тесты на бактериальные антигены, определение поверхностных маркеров Т — лимфоцитов CD3, CD4, CD8, бласттрансформацию на фитогемагглютинин, к развернутым — изучение продукции цитокинов, активационных маркеров, Т — клеточных рецепторов.

При оценке фагоцитоза к скрининговым тестам относят определение количества нейтрофилов, изучение их морфологии и образования активных форм кислорода, к развернутым — определение киллинга микробов, лизосомальных ферментов, цитокинов.

Существующие методы оценки иммунного статуса постоянно совершенствуются, однако есть ряд общих правил, которых необходимо придерживаться при оценке иммунограмм:

• — комплексный анализ, а не оценка одного показателя;
• — анализ в комплексе с клиническими и анамнестическими данными;
• — оценка резких сдвигов показателей (не менее 20% от нормы);
• — анализ в динамике;
• — анализ не только (и не столько) абсолютных данных, а соотношений показателей (особо — индекс Th/Ts);
• — учет возможных индивидуальных особенностей (возраст, сопутствующие заболевания) и колебаний показателей (физиологических и патологических — прием пищи, физические нагрузки, время суток, действие стрессоров и т. д.);
• — учет региональных норм;
• — учет материально — технической базы лаборатории. На вооружении современной лаборатории — проточные цитометры и другое оборудование, которое позволяет наиболее точно и подробно определить иммунный статус (лазерная проточная цитофлюориметрия).

Методы исследования лимфоцитов можно разделить на изучение поверхностных маркеров и функциональные тесты.

Изучение поверхностных СД антигенов основывается на:

• — методах розеткообразования;
• — методах иммунофлюоресценции;
• — иммуноферментном анализе.

Для определения количества Т — клеток чаще используют метод розеткообразования с эритроцитами барана. Метод основан на родстве рецептора CD2 с белками мембраны эритроцитов барана. При смешивании лимфоцитов с эритроцитами барана образуются фигуры в виде розеток. Количество розеткообразующих клеток (Е — РОК) соответствует количеству Т — лимфоцитов (CD2+ клеток).

Для определения количества В — клеток используют EAC — розетки. Лимфоциты смешивают с эритроцитами быка, обработанными комплементом и антителами к эритроцитам.

Важнейшее значение имеет вычисление индекса CD4/CD8 (хелперно — супрессорного отношения). Необходимо учитывать, что нет единого метода для оценки Т — хелперов и Т — супрессоров.

CD8+ несут Т — супрессоры и Т — киллеры, часть NK — клеток.

CD4+ несут Т — хелперы и Т — индукторы, моноциты, эффекторы — Т — клетки ГЗТ.

Поэтому оценку Ts и Th осуществляют также в теофиллиновом тесте. Т — супрессоры в присутствии теофиллина теряют способность к Е — розеткообразованию (теофиллин — чувствительные Т — лимфоциты), Т — хелперы теофиллин — резистентны. Оценивают также субпопуляции Т — лимфоцитов с рецепторами для Fc фрагмента: IgM (Т мю) и IgG (Т гамма). Т — гамма это преимущественно хелперы, Т мю — супрессоры.

К функциональным тестам относят методы оценки пролиферативной активности лимфоцитов на Т — и В — митогены (РБТЛ — реакция бластной трансформации лимфоцитов), продукции антител, синтеза мононуклеарами цитокинов (особо!).